Resultado da pesquisa (15)
Termo utilizado na pesquisa neosporosis
#1 - Cloning and expression of Neospora caninum rhoptry 2 and its potential as an immunobiological for neosporosis control
Abstract in English:
The protozoan Neospora caninum is known worldwide as one of the main causes of abortion in cattle. During infection, rhoptry proteins present in the apical complex of the parasite play important roles in adhesion and parasitophorous vacuole formation. The use of N. caninum ROP2 in experimental vaccines has shown promising protective results. In our study we performed cloning and expression in Escherichia coli of an antigenic portion of N. caninum ROP2. The recombinant protein (rROP2) was obtained in insoluble form, and the purified protein showed a size of approximately 18kDa. Even being a small truncate NcROP2 region, it was possible to conserve the antigenic epitopes which were recognized by bovine serum naturally infected with N. caninum. Vaccination with rROP2 on aluminum hydroxide adjuvant induced high levels of rROP2-specific IgG antibodies capable of recognizing native protein in tachyzoite lysates. In conclusion, our approaches were effective in obtaining the rROP2 protein, which induced specific mouse immune response and was also recognized by sera from N. caninum naturally infected cattle. These results suggest that it is a promising antigen for the development of neosporosis subunit vaccines as well as a suitable antigen for use in immunodiagnosis.
Abstract in Portuguese:
O protozoário Neospora caninum é conhecido mundialmente como uma das principais causas de aborto em bovinos. Durante a infecção, as proteínas rhoptry presentes no complexo apical do parasita desempenham papel importante na adesão e formação de vacúolos parasitóforos. O uso de ROP2 de N. caninum em vacinas experimentais tem mostrado resultados de proteção promissores. Em nosso estudo, realizamos a clonagem e expressão em Escherichia coli de uma porção antigênica de N. caninum ROP2. A proteína recombinante (rROP2) foi obtida na forma insolúvel, e a proteína purificada apresentou tamanho aproximado de 18kDa. Mesmo sendo uma pequena região truncada de NcROP2, foi possível conservar os epítopos antigênicos que foram reconhecidos pelo soro de bovinos naturalmente infectados com N. caninum. A vacinação com rROP2 adsorvida no adjuvante de hidróxido de alumínio induziu altos níveis de anticorpos IgG anti-rROP2, capazes de reconhecer a proteína nativa em lisados de taquizoítos. Em conclusão, nossas abordagens foram eficazes na obtenção da proteína rROP2, que induziu resposta imune específica em camundongos e também foi reconhecida por soros de bovinos naturalmente infectados com N. caninum. Estes resultados sugerem que rROP2 é um antígeno promissor para o desenvolvimento de vacinas de subunidades de neosporose, bem como um antígeno adequado para uso em imunodiagnóstico.
#2 - Serological response to Neospora caninum infection in goats and agreement between three diagnostic techniques to detect caprine neosporosis
Abstract in English:
The present study aimed to measure the serological response of goats infected with Neospora caninum by assessing the diagnostic performance and agreement between three techniques (indirect immunofluorescent antibody test, IFAT; Neospora agglutitation test, NAT; enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA). The panel of sera were comprised of 500 samples of goats, and 60 reference serum samples. These reference and field serum samples were tested by ELISA, NAT, and IFAT. In the field serum samples tested, the seroprevalences of anti-N. caninum antibodies were 3.2%, 4.6%, and 6.4% in the NAT, IFAT and ELISA, respectively. Using the IFAT as the gold standard, the NAT and the ELISA agreement was considered weak (k=0.28) and strong (k=0.75), respectively. When the IFAT performance was used for comparison purposes, the ELISA showed 91.3% sensitivity and 97.7%, specificity with a PPV of 65.2% and a NPV of 99.6%; The NAT presented sensitivity of 26.1% and specificity of 97.9% with a PPV of 37.5% and a NPV of 96.5%. Accordingly, the IFAT should remain the assay of choice for studies about N. caninum infection in goats in individual serum samples. A combination of serological assays with high sensitivity and specificity is recommended in serosurveys of caprine neosporosis.
Abstract in Portuguese:
Objetivou-se avaliar a resposta sorológica de caprinos infectados com Neospora caninum mediante o estudo da performance e concordância de três técnicas sorológicas (RIFI, NAT e ELISA). O painel de soros testes foi composto por 500 amostras de caprinos e ainda 60 soros classificados como de referência. Todos os soros de referência e de campo foram testados por ELISA, NAT e RIFI. Nos soros de campo, as soroprevalências de anticorpos anti-N. caninum foram de 3,2% no NAT, 4,6% na RIFI e 6,4% no ELISA. Utilizando a RIFI como técnica de referência, a concordância de NAT e ELISA foi considerada fraca (k=0,28) e substancial (k=0,75), respectivamente. Ainda utilizando a RIFI como comparação, foram obtidos valores de sensibilidade de 91,3% e 97,7% de especificidade no ELISA, e valores preditivos positivo de 65,2% e negativo de 99,6%; NAT apresentou resultados de sensibilidade de 26,1% e de especificidade de 97,9% com valores preditivos positivo de 37,5% e negativo de 96,5%. Com base nos resultados deste trabalho, sugerimos que a RIFI permaneça como técnica de escolha no estudo da neosporose caprina em amostras individuais, resguardando as recomendações e pontos de corte adotados neste estudo. Indicamos a associação de técnicas sorológicas de alta sensibilidade e especificidade.
#3 - Occurrence of brucellosis, leptospirosis and neosporosis in cows with retained placenta in Southwest Paraná, Brazil, 38(8):1537-1542
Abstract in English:
ABSTRACT.- Porto Y.F., Pinto Neto A., Bernardi F., Possa M.G., Mota M.F., Martinez A.C., Merlini L.S. & Berber R.C. 2018. Occurrence of brucellosis, leptospirosis and neosporosis in cows with retained placenta in Southwest Paraná, Brazil. [Ocorrência de brucelose, leptospirose e neosporose em vacas com retenção de placenta no Sudoeste do Paraná, Brasil] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(8):1537-1542. Curso de Medicina Veterinária, Universidade Federal da Fronteira Sul, Campus Realeza, Av. Edmundo Gaievisky 1000, Realeza, PR 85770-000, Brazil. E-mail: adalgiza.uffs@gmail.com
The aim of this study was to measure the occurrence of brucellosis, leptospirosis and neosporosis in cows from 25 family farms milk, with semi-intensive grazing system, located in the Southwest region of Paraná, Brazil. Eighty-four cows with retained placenta, between July 2013 to July 2014, diagnosed by the presence of fetal membranes in the uterus up to 12 hours after partum, decrease of appetite and of milk production, as well increase of rectal temperature were included into the study. The animals were submitted to blood collection for evaluating the seropositivity for brucellosis, leptospirosis and neosporosis. The blood was collected at 15 to 45 days postpartum, avoiding false negative results due to immune deficiency observed in the transition period. After collection, the blood was centrifuged, the serum was packed in three aliquots, identified and subsequently frozen. Serology was performed to diagnose brucellosis (technique of buffered acidified antigen), leptospirosis (through the microscopic agglutination test - MAT) and neosporosis (indirect immunofluorescence test). Animals were considered positive when presenting titer >1:100 (leptospirosis) and 1:200 (neosporosis). No animal with placenta retention presented Brucella abortus bacteria; 39% (33/84) were reactive to one or more Leptospira serovars, 15% (13/84) were positive to Neospora caninum, and 4% (4/84) had both diagnosis, being reactive for leptospirosis and neosporosis. In conclusion, data from this experiment inspires greater attention to leptospirosis and neosporosis in dairy cattle presenting placenta retention in southwest Paraná.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Porto Y.F., Pinto Neto A., Bernardi F., Possa M.G., Mota M.F., Martinez A.C., Merlini L.S. & Berber R.C. 2018. Occurrence of brucellosis, leptospirosis and neosporosis in cows with retained placenta in Southwest Paraná, Brazil. [Ocorrência de brucelose, leptospirose e neosporose em vacas com retenção de placenta no Sudoeste do Paraná, Brasil] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(8):1537-1542. Curso de Medicina Veterinária, Universidade Federal da Fronteira Sul, Campus Realeza, Av. Edmundo Gaievisky 1000, Realeza, PR 85770-000, Brazil. E-mail: adalgiza.uffs@gmail.com
Objetivou-se com esse estudo avaliar a ocorrência de brucelose, leptospirose e neosporose em fêmeas bovinas de 25 propriedades leiteiras de agricultura familiar, mantidas em sistema de pastejo semi-intensivo, localizadas na Região Sudoeste do Paraná, Brasil. Para tanto, incluiu-se nesse estudo, 84 vacas diagnosticadas com retenção de placenta (RP) pela presença parcial ou total dos anexos fetais no útero após 12 horas do parto, diminuição do apetite e da produção de leite, como também aumento da temperatura retal. Os animais foram submetidos à coleta de sangue 15 a 45 dias pós-parto, a fim de evitar resultado falso negativo devido à imunodeficiência observada no período de transição. Após coleta, o sangue foi centrifugado, o soro aliquotado em três amostras, identificado e congelado. Para o diagnóstico sorológico de Brucelose utilizou-se o exame sorológico do antígeno acidificado tamponado, de leptospirose a técnica de soroaglutinação microscópica, e neosporose pela técnica de imunofluorescência indireta. Os animais foram diagnosticados positivos quando apresentaram título igual ou superior à 1:100 (leptospirose) e 1:200 (neosporose). Em nenhum dos 84 animais com RP foi detectada a presença da bactéria Brucella abortus. Desses, 39,28% (33/84) foram reativos para um ou mais sorovares de Leptospira, 15,47% (13/84) foram positivos para Neospora caninum e 4,76% (4/84) foram reativos para sorovares de Leptospira sp. e N. caninum, concomitantemente. Em conclusão, os dados deste estudo inspiram maior atenção à leptospirose e neosporose em bovinos leiteiros que apresentam retenção de placenta no sudoeste do Paraná.
#4 - Occurrence of antibodies anti-Toxoplasma gondii and anti-Neospora caninum in sheep with history of reproductive disorders and risk factors
Abstract in English:
The objective was to evaluate the occurrence, clinical signs and risk factors associated with seropositivity to Toxoplasma gondii and Neospora caninum in sheep. We used 294 sheep with history of reproductive disorders from 28 farms located in the state of São Paulo, southeastern Brazil. Producers were interviewed, and blood samples were collected to perform indirect immunofluorescence tests (1:64 and 1:50 respectively). The frequency of T. gondii infection was found to be 29.9% (88/294), the frequency of N. caninum was 18% (53/294), and 3.7% (11/294) of the sheep were seropositive for both. We observed the following risk factors associated with T. gondii infection: crossbred sheep (p=0.04), Santa Inês breed (p=0.006), pasture supply (p<0.001) or associated with concentrate (p<0.001), exclusive use of natural breeding (p=0.002), and presence of birds on farms (p=0.001). For N. caninum the factors were: female sheep (p=0.031), absence of barns (p<0.001), and semi-intensive system (p<0.001). In relation to the history of reproductive problems, N. caninum and T. gondii infected sheep presented a reduction in the risk of having an abortion (p=0.044) and repeated estrus (p=0.025) respectively. T. gondii was more serologically present than N. caninum in sheep with a history of reproductive disorders and, despite their similarities, differed epidemiologically in aspects related to breeding characteristics such as race, sex, breeding system, type of feeding and reproductive management.
Abstract in Portuguese:
Objetivou-se avaliar a ocorrência, sinais clínicos e fatores de risco associados a soropositividade para Toxoplasma gondii e Neospora caninum em ovinos. Foram utilizados 294 animais com histórico de distúrbios reprodutivos de 28 fazendas do estado de São Paulo, Brasil, diagnosticados através da imunofluorescência indireta (1:64 e 1:50). A ocorrência de T. gondii foi de 29,9% (88/294) e de N. caninum 18% (53/294), sendo 3,7% (11/294) dos ovinos soropositivos para ambos. Observou-se com maiores chances à infecção pelo T. gondii: ovinos mestiços (p=0,04), Santa Inês (p=0,006), fornecimento de pastagem (p<0,001) ou associada a concentrado (p<0,001), uso exclusivamente de monta natural (p=0,002, OR=2,28 e IC95%=1,37-3,79) e a presença de aves nas propriedades (p=0,001). Na infecção por N. caninum essa chance aumentou em: fêmeas (p=0,031), propriedades sem aprisco (p<0,001) e sistema de criação semi-intensivo (p<0,001). Em relação ao histórico de problemas reprodutivos, ovelhas infectadas pelo N. caninum e T. gondii apresentaram redução da chance de apresentarem abortamento (p=0,044) e repetição de estro (p=0,025) respectivamente. O T. gondii esteve mais presente sorologicamente que o N. caninum em ovinos com histórico de distúrbios reprodutivos e apesar de suas semelhanças, diferiram epidemiologicamente em aspectos relacionados as características da criação como raça, sexo, sistema de criação, tipo de alimentação e manejo reprodutivo.
#5 - Seropositivity and risk factors for leptospirosis, toxoplasmosis and neosporosis in the canine population of Paraiba state, northeastern Brazil
Abstract in English:
The aim of this study was to determine the frequency of seropositive animals for Leptospira spp., Toxoplasma gondii and Neospora caninum in dogs from Paraiba state, northeastern Brazil, and to identify risk factors. A total of 1,043 sera were sampled from dogs from five urban centers considered as regional poles: João Pessoa, Campina Grande, Patos, Sousa and Cajazeiras. For the serological diagnosis of Leptospira spp. infection the microscopic agglutination test (MAT) was used, and for detecting anti-T. gondii and N. caninum antibodies the indirect fluorescent antiboy test (IFAT) was carried out. Ninety-seven dogs showed anti‑Leptospira spp. agglutinins, resulting in a frequency of 9.3% (95% CI=7.5; 11.1%). The most frequente serovars were Icterohaemorragiae (47.4%), Copenhageni (16.5%), Bratislava (11.3%), Canicola (10.3%) and Pomona (6.2%). The seropositivities for T. gondii and N. caninum were 22.1% (231/1043; 95% CI=19.6; 24.7%) and 7.7% (80/1043; 95% CI=6.1; 9.3%) respectively. Age >48 months (OR=2.92), mixed breed (OR=1.94) and access to street (OR=1.57) were identified as risk factors for Leptospira spp. infection. For toxoplasmosis, the categories age >48 months (OR=1.74), homemade food (OR=2.24), comercial and homemade food (OR=2.34) and contact with cats (OR=1.57) were considered risk factors, while access to street (OR=2.62) was risk fator for N. caninum. We conclude that dogs from five urban centers in Paraiba state are exposed to Leptospira spp., T. gondii and N. caninum infections, evidenced by antibody detection, as well as it is suggested a better feed management, control of outside home environment access and proper disposal of cat feces.
Abstract in Portuguese:
Objetivou-se com este trabalho determinar a frequência de animais soropositivos para Leptospira spp., Toxoplasma gondii e Neospora caninum em cães do Estado da Paraíba, Nordeste do Brasil, bem como identificar fatores de risco. Foram amostrados 1.043 soros de cães procedentes de cinco centros urbanos considerados polos regionais: João Pessoa, Campina Grande, Patos, Sousa e Cajazeiras. Para o diagnóstico sorológico da infecção por Leptospira spp. foi utilizada a soroaglutinação microscópica (SAM) enquanto que para detecção de anticorpos anti-T. gondii e N. caninum empregou-se a reação de imunofluorescência indireta (RIFI). Noventa e sete cães apresentaram aglutininas anti-Leptospira spp., resultando em frequência de 9,3% (IC 95% = 7,5-11,1%). Os sorovares de maior frequência foram Icterohaemorragiae (47,4%), Copenhageni (16,5%), Bratislava (11,3%), Canicola (10,3%) e Pomona (6,2%). Observou-se soropositividade de 22,1% (231/1.043; IC 95% = 19,6-24,7%) e 7,7% (80/1.043; IC 95% = 6,1-9,3%) para T. gondii e N. caninum, respectivamente. Idade >48 meses (OR=2,92), raça não definida (OR=1,94) e criação com acesso à rua (OR=1,57) foram apontados como fatores de risco para infecção por Leptospira spp. Para toxoplasmose, as categorias idade >48 meses (OR=1,74), alimentação com comida caseira (OR=2,24), alimentação com ração e comida caseira (OR=2,34) e contato com gatos (OR=1,57) foram consideradas fatores de risco, enquanto que a criação com acesso à rua (OR=2,62) foi fator de risco para N. caninum. Conclui-se que cães de cinco centros urbanos do Estado da Paraíba estão expostos às infecções por Leptospira spp., T. gondii e N. caninum, evidenciadas pela detecção de anticorpos, bem como sugere-se melhor manejo alimentar, controle no acesso a ambientes externos e destino adequado das fezes de gatos.
#6 - Placental lesions associated with abortion and stillbirth in goats naturally infected by Neospora caninum
Abstract in English:
Neospora caninum has been described as a parasite that sporadically causes reproductive problems in goats. Several aspects of the pathogenesis of neosporosis in naturally infected goats remain to be established. The aims of the present study were to characterize the placental lesions in goats naturally infected by N. caninum and to evaluate several diagnostic techniques for effective detection of this protozoan in the goat placenta. Some placentas in this study originated from abortion and stillbirth in which there were severe lesions. The lesions were characterized mainly by necrosis involving the mesenchyme of the chorionic villi and trophoblast cells often alongside mononuclear inflammation and in some cases with neutrophilic infiltration. N. caninum DNA was detected in these placentas, but parasite structures were not visualized through immunohistochemistry (IHC). However, five of 11 placentas from N. caninum-infected goats that gave birth to healthy kids had histological lesions characterized by mononuclear inflammation. Of these 11 placentas, N. caninum DNA was detected in seven, and N. caninum tachyzoites were detected in only one of these seven placentas using IHC. The present study demonstrates that severe lesions in the placenta are associated with abortion and stillbirth in caprine neosporosis and the placental alterations are likely involved in abortion pathogenesis. Moreover, the results highlight the importance of using more than one diagnostic technique for the detection of the protozoan in placentas because N. caninum cannot be reliably detected by histological and immunohistochemical tests.
Abstract in Portuguese:
Neospora caninum é descrito como um parasito que causa problemas reprodutivos esporádicos em cabras. Muitos aspectos da patogênese da neosporose em cabras naturalmente infectadas ainda precisam ser estabelecidos. Os objetivos deste trabalho foram caracterizar as lesões placentárias em cabras naturalmente infectadas por N. caninum e avaliar as técnicas diagnósticas para a detecção efetiva do protozoário na placenta. Algumas placentas deste estudo são originárias de abortos e natimortos, nas quais havia lesões graves. As lesões foram classificadas principalmente por necrose envolvendo o mesênquima das vilosidades coriônicas e células trofoblásticas, geralmente associadas a infiltrado inflamatório mononuclear e em alguns casos infiltrado neutrofílico. O DNA do N. caninum foi detectado nestas placentas, porém estruturas parasitárias não foram visualizadas na imuno-histoquímica (IHQ). Entretanto, cinco das onze placentas de cabras infectadas, que deram à luz a conceptos saudáveis, apresentaram lesões histológicas caracterizadas por infiltrado inflamatório mononuclear. Destas 11 placentas, foi detectado DNA de N. caninum em sete e taquizoítos foram encontrados em apenas uma por meio de imuno-histoquímica. O presente estudo demonstra que abortos e natimortos na espécie caprina, causados pelo N. caninum estão associados a lesões acentuadas nas placentas, sendo que as mesmas estão envolvidas na patogênese do aborto. Os resultados também ressaltam a importância do uso de mais de uma técnica diagnóstica para a detecção do protozoário em placentas, pois o N. caninum não pode ser confiavelmente detectado somente pelos exames de histopatologia e imuno-histoquímica.
#7 - Transplacental transmission of Neospora caninum in naturally infected small ruminants from northeastern Brazil, 37(9):921-925
Abstract in English:
ABSTRACT.- Nunes A.C.B.T., Yamasaki E.M., Kim P.C.P., Melo R.P.M., Ribeiro-Andrade M., Porto W.J.N. & Mota R.A. 2017. Transplacental transmission of Neospora caninum in naturally infected small ruminants from northeastern Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(9):921-925. Laboratório de Doenças Infecto-contagiosas dos Animais Domésticos, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Dois Irmãos, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: rinaldo.mota@hotmail.com
Toxoplasma gondii and Neospora caninum are causative agents of abortion in sheep and goats. Thus, the present study aimed to describe the transplacental transmission of these protozoans in small ruminants of northeastern Brazil. Seventeen fetuses (6 goats and 11 sheep) from farms with history of abortion were necropsied and samples were collected from different tissues (brain, liver, lung, kidney and heart). The samples were analyzed by PCR, histopathology (HP) and immunohistochemistry (IHC) to evaluate whether T. gondii and/or N. caninum infection were the cause of abortion. None of the samples was positive for T. gondii according to PCR and IHC results. Some brain, liver, lung, kidney and heart samples of goat fetuses were positive for N. caninum by PCR. In the histopathology, mild mononuclear infiltration and necrosis with calcification were observed in the liver and brain of one goat fetus, respectively, that also was positive for N. caninum by PCR and IHC. The results confirmed vertical transmission of N. caninum in naturally infected goats of northeastern, Brazil.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Nunes A.C.B.T., Yamasaki E.M., Kim P.C.P., Melo R.P.M., Ribeiro-Andrade M., Porto W.J.N. & Mota R.A. 2017. Transplacental transmission of Neospora caninum in naturally infected small ruminants from northeastern Brazil. [Transmissão transplacentária de Neospora caninum em pequenos ruminantes infectados naturalmente do Nordeste do Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(9):921-925. Laboratório de Doenças Infecto-contagiosas dos Animais Domésticos, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Dois Irmãos, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: rinaldo.mota@hotmail.com
Toxoplasma gondii e Neospora caninum são reconhecidos como protozoário causadores de aborto em ovinos e caprinos. Desta forma, objetivou-se descrever a transmissão transplacentária desses agentes em pequenos ruminantes na região Nordeste do Brasil. Foram examinados seis fetos caprinos e onze fetos ovinos, totalizando 78 amostras de diferentes tecidos (cérebro, fígado, pulmão, rim e coração) provenientes de propriedades rurais com histórico de aborto. As amostras foram analisadas por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), Histopatologia (HP) e Imunohistoquímica (IHQ), com a finalidade de associar o abortamento a T. gondii e/ou N. caninum. Nenhuma amostra foi positiva na PCR e IHQ para T. gondii. Algumas amostras de cérebro, fígado, pulmão, rim e coração de fetos de caprinos e ovinos foram positivas na PCR para N. caninum. Na histopatologia foi observado leve infiltrado mononuclear no fígado e necrose com calcificação no SNC de um caprino, associada à imunomarcação positiva para N. caninum na IHQ e PCR positiva. Os resultados confirmam a transmissão vertical de N. caninum em caprinos naturalmente infectados na região nordeste do Brasil.
#8 - Development and standardization of Dot-ELISA using recombinant peptides for serological diagnosis of Neospora caninum, 34(8):723-727
Abstract in English:
ABSTRACT.- Blanco R.D., Fidelis C.F., Araujo L.S., Henao A.M., Cardona J.A., Guimarães J.D., Vargas M.I. & Patarroyo J.H. 2014. [Development and standardization of Dot-ELISA using recombinant peptides for serological diagnosis of Neospora caninum.] Desenvolvimento e padronização do Dot-ELISA usando peptídeos recombinantes para o diagnóstico sorológico de Neospora caninum. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(8):723-727. Laboratório de Biologia e Controle de Hematozoários e Vetores, Universidade Federal de Viçosa, Avenida Ph Rolfs, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: rdblama@gmail.com
Neosporosis is recognized as a major cause of abortion and neonatal loss in cattle worldwide, both for dairy cattle and beef cattle. In recent years this disease has attracted the interest of researchers and studying the epidemiology and effective methods of diagnosis of this disease. The present study aimed to develop and standardize on a Dot-ELISA for the serological diagnosis of Neospora caninum by using recombinant peptide as antigen for the development of a diagnostic kit used on the field. The recombinant antigen (rNcGRA1) was designed based on the method of reverse genetics derived antigenic epitopes of dense granules protein of N. caninum and synthesized by GenScript (USA). It was produced by the fermentation in yeasts Pichiapastoris KM71. The serological technique was used for the Dot-ELISA detection of IgG specific for N. caninum in which 0.22μm nitrocellulose membranes were sensitized with 1μL of antigen and subsequently the plasmas were diluted in a washing solution and incubated for 1 hour. The results will revealed by the addition of Protein G labeled with peroxidasse for 30 minutes, followed by the developing solution based on 3,3’-Diaminobenzidine (DAB). Soon after standardization tested 44 bovine plasmas were diagnosed by indirect immunofluorescence assay (IFA), agreeing with the results on a 95.5% and a sensitivity and specificity of 100% and 92% respectively. In regard to the diagnostic kit for the Technology Platform Rapid Flow-Through Miriad®, the peptide presented rNcGRA1 visible markings to react with positive plasma, and showed no markings using the negative plasma. This study is the first to use recombinant peptides and prove to be efficient for the serological diagnosis of cattle naturally infected.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Blanco R.D., Fidelis C.F., Araujo L.S., Henao A.M., Cardona J.A., Guimarães J.D., Vargas M.I. & Patarroyo J.H. 2014. [Development and standardization of Dot-ELISA using recombinant peptides for serological diagnosis of Neospora caninum.] Desenvolvimento e padronização do Dot-ELISA usando peptídeos recombinantes para o diagnóstico sorológico de Neospora caninum. Pesquisa Veterinária Brasileira 34(8):723-727. Laboratório de Biologia e Controle de Hematozoários e Vetores, Universidade Federal de Viçosa, Avenida Ph Rolfs, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: rdblama@gmail.com
A neosporose é reconhecida como uma das maiores causas de aborto e perdas neonatais em bovinos de leite e corte em todo o mundo. Nos últimos anos esta doença tem atraído o interesse de pesquisadores com foco na epidemiologia e métodos eficazes de diagnóstico desta doença. No presente estudo objetivou-se desenvolver e padronizar um teste Dot-ELISA para o diagnóstico sorológico de Neospora caninum com um peptídeo recombinate como antígeno, visando o desenvolvimento de um kit para diagnóstico a campo. O peptídeo recombinante (rNcGRA1) foi desenhado com base na metodologia de genética reversa de epítopos antigênicos originados de uma proteína de grânulos densos de N. caninum, e sintetizado pela GenScript (USA). Produzido mediante o processo fermentativo em leveduras Pichia pastoris KM71. Para a padronização do Dot-ELISA, membranas de nitrocelulose de 0.22µm foram sensibilizadas com 1µL do antígeno e posteriormente os soros foram diluídos em solução de lavagem e incubados durante 1 hora. A revelação foi feita mediante a adição de Proteína G marcada com peroxidase por 30 minutos, seguido da solução reveladora a base de 3,3’-Diaminobenzidine (DAB). Logo após a padronização foram testados 44 soros bovinos diagnosticados por imunofluorescência indireta (RIFI), obtendo-se uma concordância nos resultados do teste de 95,5% e uma sensibilidade e especificidade de 100% e 92% respectivamente. Quanto ao Kit para diagnóstico a campo na Plataforma Tecnológica RapidFlow-Through Miriad®, o peptídeo rNcGRA1 apresentou marcações visíveis ao reagir com os soros positivos, e não apresentou marcações usando os soros negativos. Este estudo é o primeiro a utilizar peptídeos recombinantes e mostrar-se eficiente para o diagnóstico sorológico de bovinos naturalmente infetados por N. caninum.
#9 - Neospora caninum abortions in cattle in southern Minas Gerais, Brazil, 33(11):1332-1338
Abstract in English:
ABSTRACT.- Orlando D.R., Costa R.C., Soares B.A., Oliveira N.S.C., Nascimento L.C., Peconick A.P., Raymundo D.L. & Varaschin M.S. 2013. [Neospora caninum abortions in cattle in southern Minas Gerais, Brazil.] Abortos por Neospora caninum em bovinos do sul de Minas Gerais. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1332-1338. Setor de Patologia Veterinária, Universidade Federal de Lavras, Cx. Postal 3037, Lavras, MG 37200-000, Brazil. E-mail: msvaraschin@dmv.ufla.br
The present study evaluates the participation of Neospora caninum in bovine abortions from farms in the southern region of Minas Gerais state, Brazil, through histopathological, immunohistochemical (IHQ) analysis and DNA detection by polymerase chain reaction (PCR). The material used in this study was obtained through retrospective study of bovine abortion cases received by the Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal de Lavras and by necropsies performed in fetuses from 2011 to 2013. From 60 fetuses studied, 30 (50%) had microscopic lesions; 19 (63%) of them had histologic lesions compatible with N. caninum abortion, characterized by multifocal non-suppurative encephalitis, necrosis and gliosis in the central nervous system and multifocal nonsuppurative myocarditis and myositis. From the 19 fetuses with protozoa lesions in 14 the final diagnosis was performed; five were confirmated only by IHQ staining and five were positive only by PCR. Four fetuses were positive in IHC and in PCR. In five fetuses from the retrospective study lesions compatible with N. caninum were seen, but the presence of the protozoan was not confirmed by IHQ labeling. The findings demonstrate that N. caninum is an important agent associated with abortion in cattle from Minas Gerais. Therefore, beyond the microscopic lesions association between IHC and PCR was essential to confirm the diagnosis.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Orlando D.R., Costa R.C., Soares B.A., Oliveira N.S.C., Nascimento L.C., Peconick A.P., Raymundo D.L. & Varaschin M.S. 2013. [Neospora caninum abortions in cattle in southern Minas Gerais, Brazil.] Abortos por Neospora caninum em bovinos do sul de Minas Gerais. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(11):1332-1338. Setor de Patologia Veterinária, Universidade Federal de Lavras, Cx. Postal 3037, Lavras, MG 37200-000, Brazil. E-mail: msvaraschin@dmv.ufla.br
Este estudo avaliou a participação de Neospora caninum em casos de abortos em bovinos provenientes de propriedades rurais da região sul de Minas Gerais por meio de análises histopatológicas, imuno-histoquímicas (IHQ) e pela reação em Cadeia de Polimerase (PCR). O material utilizado foi obtido de um estudo retrospectivo de casos de aborto recebidos pelo Setor de Patologia Veterinária da Universidade Federal de Lavras e de fetos necropsiados durante os anos de 2011 a 2013. De 60 fetos estudados, 30 (50%) tinham lesões microscópicas. Destes, 19 (63%) apresentaram lesões compatíveis com aborto por N. caninum, caracterizadas principalmente por encefalite não supurativa multifocal, necrose e gliose multifocal, assim como, miocardite e miosite não supurativa. Em 14 fetos chegou-se ao diagnóstico definitivo. Destes, cinco tiveram sua confirmação somente pela marcação IHQ e cinco foram positivos somente na PCR. Quatro fetos foram positivos tanto na IHQ quanto na PCR. Cinco fetos, provenientes do estudo retrospectivo apresentaram lesões compatíveis com N. caninum, mas a presença do protozoário não foi confirmada pela marcação IHQ. Os achados demonstram que o N. caninum é um importante agente associado ao aborto em bovinos na região sul de Minas Gerais. Para tanto, além das lesões microscópicas a associação entre a IHQ e a técnica de PCR foi essencial para a confirmação do diagnóstico.
#10 - Seroprevalence and risk factors associated with infection by Neospora caninum of dairy cattle in the state of Alagoas, Brazil, 32(10):1009-1013
Abstract in English:
ABSTRACT.- Souza M.E., Porto W.J.N., Albuquerque P.P.F., Souza Neto O.L., Faria E.B., Pinheiro Júnior J.W. & Mota R.A. 2012. Seroprevalence and risk factors associated with infection by Neospora caninum of dairy cattle in the state of Alagoas, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(10):1009-1013. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: rinaldo.mota@hotmail.com
The objective of this study was to investigate the prevalence of anti-Neospora caninum antibodies in cattle from milk producing farms of the microregion of Batalha, state of Alagoas, Brazil, as well as to identify the risk factors associated with the infection. Blood samples were collected from 1,004 cattle of 17 farms for the serological investigation regarding the presence of anti-N. caninum antibodies by the Indirect Immunofluorescence Reaction Technique (IMRT). From the total amount of samples analyzed, 77/1,004 (7.67%) were positive and 927/1,004 (92.33%) were negative. The logistical regression identified that cattle from farms without consortium breeding have an infection risk 6.33 (p<0.001; C.I. 2.89-13.10) times higher than cattle from farms with that type of breeding. Cattle from farms where the aborted fetuses are not adequately buried have an infection risk 3.04 (p<0.001; C.I. 1.64-5.63) times higher than cattle from farms with adequate destination of these fetuses. Infection by N. caninum occurs in cattle of the investigated region. The factors identified in our study can be used as risk indicators, so that control measures could be implemented to avoid infection by N. caninum in the herds of this region.
Abstract in Portuguese:
RESUMO.- Souza M.E., Porto W.J.N., Albuquerque P.P.F., Souza Neto O.L., Faria E.B., Pinheiro Júnior J.W. & Mota R.A. 2012. Seroprevalence and risk factors associated with infection by Neospora caninum of dairy cattle in the state of Alagoas, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(10):1009-1013. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: rinaldo.mota@hotmail.com
Objetivou-se com este estudo investigar a prevalência de anticorpos anti-Neospora caninum em bovinos procedentes de propriedades leiteiras da microrregião Batalha, Estado de Alagoas, Brasil, além de identificar os fatores de risco associados à infecção. Foram coletadas amostras de sangue de 1004 bovinos procedentes de 17 propriedades para investigação sorológica quanto à presença de anticorpos anti-N. caninum através do teste de Reação de Imunofluorescência Indireta (RIFI). Do total das amostras analisadas, 77/1004 (7,67%) foram positivas e 927/1004 (92,33%) foram negativas. A regressão logística identificou que animais de propriedades sem criação consorciada têm risco 6,33 (p<0,001; I.C. 2,89-13,10) vezes maior de infecção do que animais de propriedades onde ocorre esse tipo de criação. Animais de propriedades onde os fetos abortados não são adequadamente enterrados têm risco 3,04 (p<0,001; I.C. 1,64-5,63) vezes maior de infecção do que animais de propriedades onde é feito o destino adequado dos mesmos. A infecção por N. caninum ocorre em bovinos na região estudada. Os fatores identificados neste estudo podem servir como indicadores de risco para que sejam implantadas medidas de controle para evitar a infecção por N. caninum nos rebanhos dessa região.
