PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Cunha V.E.S., Silva M.H. & Faccini J.L.H. 2012. Serological identification of house dust mite allergens in dogs with atopic dermatitis. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(9):917-921. Departamento de Parasitologia Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, BR 465 Km 7, Seropédica, RJ 23890-000, Brazil. E-mail: mv.victor@uol.com.br House dust mite antigens have been used for decades to diagnose allergic diseases in humans and animals. The objective of this study was to identify allergens in commercial Dermatophagoides farinae and Blomia tropicalis extracts by immunoblotting using sera from allergic dogs and anti-dog IgE conjugate. The analysis of antigens present in the D. farinae extract (FDA Allergenic) using sera from 10 dogs allergic to D. farinae showed that eight sera recognized a band of approximately 102 kDa, eight recognized two bands of 52 to 76 kDa, five recognized one band of approximately 76 kDa, four recognized one band of 31 to 38 kDa, and two recognized one band of 12 to 17 kDa. Immunoblot assays of the B. tropicalis extract (FDA Allergenic) using sera from 10 animals allergic to B. tropicalis showed that five sera recognized two bands of 52 to 76 kDa. These results demonstrate the importance of the two house dust mite species for the pathogenesis of canine atopic dermatitis in Brazil. In addition, the results indicate which allergens should be present in allergenic extracts used for diagnosis and allergen-specific immunotherapy.

• House dust mite dermatitis allergens ácaros da poeira domiciliar dermatite atópica alérgenos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Cunha V.E.S., Silva M.H. & Faccini J.L.H. 2012. Serological identification of house dust mite allergens in dogs with atopic dermatitis. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(9):917-921. Departamento de Parasitologia Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, BR 465 Km 7, Seropédica, RJ 23890-000, Brazil. E-mail: mv.victor@uol.com.br Antígenos de ácaros da poeira domiciliar são utilizados por décadas para diagnóstico de doenças alérgicas em seres humanos e animais. O objetivo do presente trabalho foi identificar proteínas alergênicas presentes em extratos de Dermatophagoides farinae e Blomia tropicalis através de “immunoblotting” utilizando-se soros de animais alérgicos e conjugado anti-IgE canina. A análise por “immunoblotting” dos antígenos presentes no extrato de D. farinae (FDA Allergenic), utilizando soros de dez animais alérgicos, mostrou que oito soros reconhecem uma banda com peso molecular de aproximadamente 102 kDa; oito soros duas bandas entre 52 e 76 kDa; cinco soros uma banda com aproximadamente 76 kDa; quatro soros uma banda entre 31 e 38 kDa; e dois soros uma banda entre 12 e 17 kDa. A análise por “immunoblotting” dos antígenos do extrato de B. tropicalis (FDA Allergenic) mostrou que cinco soros reconhecem duas bandas com pesos moleculares entre 52 e 76 kDa. Esses resultados demonstram a importância dessas duas espécies de ácaros da poeira domiciliar na patogênese da dermatite atópica canina no Brasil, assim como indicam alérgenos que devem estar presentes nos extratos alergênicos utilizados para diagnóstico e imunoterapia alérgeno-específica.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Holsback L., Pena H.F.J., Ragozo A., Lopes E.G., Gennari S.M. & Soares R.M. 2012. Serologic and molecular diagnostic and bioassay in mice for detection of Toxoplasma gondii in free range chickens from Pantanal of Mato Grosso do Sul. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(8):721-726. Setor de Veterinária e Produção Animal, Universidade Estadual do Norte do Paraná, Campus Luiz Meneghel, Rodovia BR 369 Km 54, Bandeirantes, PR 86360-000, Brazil. E-mail: lhsfertonani@uenp.edu.br The aim of this study was to investigate the occurrence of Toxoplasma gondii and compare the results obtained in the Modified Agglutination Test (MAT), Polimerase Chain Reaction (PCR) and bioassay in mice. In order to accomplish this, 40 free-range chickens from eight farms in neighboring areas to the Pantanal in Nhecolândia, Mato Grosso do Sul, were euthanized and blood samples, brain and heart were collected. The occurrence of anti-T. gondii antibodies found in chickens was 67.5% (27 samples), considering as a cutoff point the dilution 1:5. Among the samples analyzed, 7 (25.9%) were positive in the dilution 1:5, 3 (11.1%) in 1:10, 2 (7.4%) in 1:20, 3 (11.1%) in 1:320, 1 ( 3.7%) in 1:640, 3 (11.1%) in 1:1280, 2 (7.4%) in 1:2560, 4 (14.8%) in 1:5120 and 2 (7.4%) in 1:10.240. From the mixture of tissue samples (brain and heart) from the chickens analyzed, 16 (40%) presented electrophoretic bands compatible with T. gondii by PCR (gene B1). In the comparison of techniques, 59.26% positivity in PCR was revealed among animals that were seropositive in MAT (cutoff 1:5). From 141 inoculated mice, six (4.44%) died of acute toxoplasmosis between 15 and 23 days after inoculation. Surviving mice were sacrificed at 74 days after inoculation, and a total of 28 cysts were found in the brains of 10 distinct groups. From the seropositive hens, 27 bioassays were performed and 11 (40.7%) isolates were obtained. A greater number of isolations happened in mice that were inoculated with tissues from chickens that had high titers for anti-T. gondii antibodies. Chronic infection in mice was observed in nine groups (33.3%) from five different properties. Among the surviving mice, 25.6% were positive for T. gondii in MAT (1:25). From mice positive in PCR, 87.5% were also positive in MAT. Among the PCR-negative mice, 5.2% were positive for T. gondii in MAT. It can be concluded through this study that the occurrence of infecton by T. gondii in the rural properties studied was high, that PCR directed to gene B1 does not confirm the viability of the parasite, but it can be used as a screening method for the selection of chickens infected by T. gondii, that the animals with titer greater than 10 must be prioritized for the selection of animals for bioassay, since for them, the chances of isolating the parasite are greater and that seroconversion in experimentally infected mice is not a good indicator for isolating the agent.

• Toxoplasma gondii Toxoplasmosis Toxoplasmose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Holsback L., Pena H.F.J., Ragozo A., Lopes E.G., Gennari S.M. & Soares R.M. 2012. Serologic and molecular diagnostic and bioassay in mice for detection of Toxoplasma gondii in free range chickens from Pantanal of Mato Grosso do Sul. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(8):721-726. Setor de Veterinária e Produção Animal, Universidade Estadual do Norte do Paraná, Campus Luiz Meneghel, Rodovia BR 369 Km 54, Bandeirantes, PR 86360-000, Brazil. E-mail: lhsfertonani@uenp.edu.br Os objetivos deste estudo foram investigar a ocorrência de Toxoplasma gondii e comparar os resultados obtidos no Teste de Aglutinação Modificada (MAT), Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) e o bioensaio em camundongos. Para tanto, 40 galinhas de criação livre de oito fazendas em áreas limítrofes ao Pantanal da Nhecolândia, Mato Grosso do Sul, foram eutanasiadas e amostras de sangue, o cérebro e o coração foram coletados. A frequência de anticorpos anti-T. gondii encontrada nas galinhas foi de 67,5% (27 amostras), considerando como ponto de corte a diluição 1:5. Entre as amostras analisadas, 7 (25,9%) foram positivas na diluição 1:5, 3 (11,1%) em 1:10, 2 (7,4%) em 1:20, 3 (11,1%) em 1:320, 1 ( 3,7%) em 1:640, 3 (11,1%) em 1:1.280, 2 (7,4%) em 1:2.560, 4 (14,8%) em 1:5.120 e 2 (7,4%) em 1:10.240. A partir da mistura de amostras de tecidos (cérebro e coração) das galinhas analisadas, 16 (40%) apresentaram bandas eletroforéticas compatíveis com T. gondii por PCR (gene B1). Na comparação das técnicas, revelou-se 59,26% de positividade na PCR entre os animais soropositivos no MAT (ponto de corte 1:5). Dos 141 camundongos inoculados, seis (4,44%) morreram de toxoplasmose aguda entre 15 e 23 dias após a inoculação. Os camundongos que sobreviveram foram sacrificados 74 dias após a inoculação, sendo encontrados 28 cistos nos cérebros de 10 grupos distintos. Das galinhas soropositivas, foram realizados 27 bioensaios e obtidos 11 (40,7%) isolados. Um maior número de isolamentos ocorreu em camundongos que foram inoculados com tecidos de galinhas que tinham altos títulos de anticorpos anti-T. gondii. Infecção crônica em camundongos foi observada em nove grupos (33,3%) de cinco propriedades diferentes. Entre os camundongos que sobreviveram, 25,6% foram positivos para T. gondii no MAT (1:25). Dos camundongos positivos na PCR, 87,5% também foram positivos no MAT. Já entre os camundongos PCR negativos 5,2% foram positivos para T. gondii no MAT. Concluiu-se através deste estudo que a ocorrência de infecção pelo T. gondii nas propriedades rurais estudadas foi alta, que a PCR direcionada ao gene B1, não confirma a viabilidade do parasita, porém pode ser utilizada como método de triagem para a seleção de galinhas infectadas por T. gondii, que os animais com título maior que 10 devem ser priorizados para a seleção de animais para bioensaio, pois para eles, as chances de isolamento do parasita são maiores e que a soroconversão em camundongos infectados experimentalmente não é um bom indicador de isolamento do agente.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Sarmento A.M.C., Azevedo S.S., Morais Z.M., Souza G.O., Oliveira F.C.S., Gonçales A.P., Miraglia F. & Vasconcellos S.A. 2012. [Use of Leptospira spp. strains isolated in Brazil in the microscopic agglutination test applied to diagnosis of leptospirosis in cattle herds in eight brazilian states.] Emprego de estirpes Leptospira spp. isoladas no Brasil na microtécnica de soroaglutinação microscópica aplicada ao diagnóstico da leptospirose em rebanhos bovinos de oito estados brasileiros. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(7);601-606. Universidade de São Paulo, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: savasco@usp.br The aim of this study was to investigate the adequacy of the use of autochthonous strains of leptospires isolated in Brazil, added to antigen collection of the microscopic agglutination test (MAT) applied to the diagnosis of bovine leptospirosis. By means of non-probability sampling, 109 farms and 9,820 cattle, females at reproductive age were chosen from 85 municipalities in the states of Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Paraná, Rio Grande do Sul, Santa Catarina and São Paulo. Among the 9,820 examined animals, 5,806 (59.12%) were reactants at MAT for at least one serovar using the 23 reference serovars. Employing the collection of reference serovars and the ten autochthonous strains, 6,400 (65.24%) reactants and significant difference (p=0.001) was found. The most probable serovars identified by the collection of reference antigens were Hardjo (43.03%), Shermani (20%), Wolfi (9.96%), Grippothyphosa (5.42%) and Pomona (4.28%). With the collection amplified with the ten strains isolated in Brazil, the most probable serovars were Hardjo (31%), Guaricura-M4/84 (22.50%), Shermani (15.43%), Wolffi (4.76%), Grippothyphosa (3.71%) and Autumnalis (3.24%). The serovar Guaricura, strain M4/84, isolated from bovines and buffaloes in the State of São Paulo, was ranked as one of the three most probable serovars in the states of Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais and São Paulo. The addition of autochthonous strains to the MAT antigen collection provided the confirmation of the diagnosis of leptospirosis in 594 cattle (6%) which have been classified as non-reactants by the reference collection (p=0.001).

• Leptospira spp. leptospirosis

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Sarmento A.M.C., Azevedo S.S., Morais Z.M., Souza G.O., Oliveira F.C.S., Gonçales A.P., Miraglia F. & Vasconcellos S.A. 2012. [Use of Leptospira spp. strains isolated in Brazil in the microscopic agglutination test applied to diagnosis of leptospirosis in cattle herds in eight brazilian states.] Emprego de estirpes Leptospira spp. isoladas no Brasil na microtécnica de soroaglutinação microscópica aplicada ao diagnóstico da leptospirose em rebanhos bovinos de oito estados brasileiros. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(7);601-606. Universidade de São Paulo, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: savasco@usp.br O objetivo do presente trabalho foi investigar a conveniência do emprego de estirpes de leptospiras autóctones isoladas no Brasil, na coleção de antígenos da microtécnica de soroaglutinação microscópica (SAM) aplicada a leptospirose. Foram amostradas por conveniência 109 propriedades e 9820 bovinos, fêmeas em idade reprodutiva, distribuídos em 85 municípios, dos Estados de Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais, Paraná, Rio Grande do Sul, Santa Catarina e São Paulo. Dos 9820 animais examinados, 5806 (59,12%) foram reagentes na SAM para pelo menos um sorovar com a coleção de 23 sorovares de referência. Com a coleção de antígenos de referência e dez estirpes autóctones houve 6400 (65,17%) reagentes, com diferença significativa entre as proporções (p=0,001). Os sorovares mais prováveis identificados com a coleção de antígenos de referência foram Hardjo (43,03%), Shermani (20 %), Wolffi (9,96%), Grippothyphosa (5,42%) e Pomona (4,28%). Com a coleção ampliada por dez estirpes isoladas no Brasil, os sorovares mais prováveis foram Hardjo (31,00%), Guaricura-M4/84 (22,50%), Shermani (15,43%), Wolffi (4,76%), Grippothyphosa (3,71%) e Autumnalis (3,24%). O sorovar Guaricura, estirpe M4/84, isolada de bovinos e búfalos no Estado de São Paulo, despontou como um dos três sorovares mais freqüentes nos Estados de Goiás, Mato Grosso, Mato Grosso do Sul, Minas Gerais e São Paulo. A introdução de estirpes autóctones na coleção de antígenos da SAM propiciou a confirmação do diagnóstico de leptospirose em 594 animais (6,00%) classificados como não reagentes pela coleção de referência (p=0,001).

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rosa D.C., Garcia K.C.O.D. & Megid J. 2012. [Seropositivity for brucellosis in pigs in slaughter houses.] Soropositividade para brucelose em suínos em abatedouros. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(7):623-626. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jane@fmvz.unesp.br The aim of this investigation was to evaluate the seropositivity for brucellosis in pig slaughterhouses. Sera of 910 pigs from 30 farms and slaughtered at slaughterhouses, located in the central region of the state of São Paulo, were tested with Buffered Plate Acidified Antigen (BPAA) and 2-mercaptoethanol (2-Me) as confirmatory test to determine the serological positivity in this species. The results demonstrated that 25 (2.7%) of the pigs from 10 farms reacted to BPAA, corresponding to 36% of positive properties. From BPAA positive animals 16% and 52% presented titers of 25 incomplete and 25 respectively in the Tube agglutination test (TAT), 8% presented 50 and 25 incomplete, respectively, in TAT and 2-ME, and 8% resulted 50 and 25 positive in TAT and 2-ME, respectively. These results demonstrate the high percentage of positive farms for swine brucellosis in this region and reinforce the need for official and effective program implementation for the swine brucellosis control.

• Brucellosis brucelose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rosa D.C., Garcia K.C.O.D. & Megid J. 2012. [Seropositivity for brucellosis in pigs in slaughter houses.] Soropositividade para brucelose em suínos em abatedouros. Pesquisa Veterinária Brasileira 32(7):623-626. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-970, Brazil. E-mail: jane@fmvz.unesp.br O presente trabalho teve por objetivo investigar a soropositividade para brucelose em suínos em abatedouros. Foram coletados 910 soros de suínos, procedentes de 30 propriedades, abatidos em frigoríficos da região central do estado de São Paulo, e submetidos às provas de soroaglutinaçao com antígeno tamponado acidificado (AAT) e 2-Mercaptoetanol (2-Me) objetivando determinar a ocorrência da enfermidade nesta espécie. Do total de soros avaliados foram observados 25 (2,7%) animais reagentes ao AAT pertencentes a 10 propriedades, caracterizando 36% de propriedades positivas. Dos animais positivos ao AAT, 16% apresentaram titulo de 25 (incompleto) e 52% titulo de 25 na soroaglutinação lenta (SAL), 8% apresentaram titulo de 50 incompleto na SAL e 25 incompleto no 2-ME e 8% apresentaram titulo de 50 na SAL e 25 no 2-ME. Estes resultados demonstram o elevado percentual de propriedades positivas para brucelose nesta região e ressaltam a necessidade de implementação de programas oficiais efetivos para o controle da brucelose suína.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Melo R.T., Guimarães A.R., Mendonça E.P., Coelho L R., Monteiro G.P., Fonseca B.B. & Rossi D.A. 2011. [Serological identification and phylogenetic relationship of Salmonella spp. pig origin.] Identificação sorológica e relação filogenética de Salmonella spp. de origem suína. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(12):1039-1044. Laboratório de Biotecnologia Animal Aplicada, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Uberlândia, Rua Ceará s/n, Bloco 2D, sala 43, Bairro Umuarama, Uberlândia, MG 38402-018, Brazil. E-mail: roberta-melo@hotmail.com Salmonella spp. is an important zoonotic pathogen that can spread along the production chain of swines. The objective was to evaluate the incidence of Salmonella spp. in feces of swines in termination phase in the farm, in the pre-slaughter and environmental samples, identify the serotypes and establish a phylogenetic relationship among the isolates. Three collections were done in different batches of pigs housed in the termination pen and in the same animals after transport to the slaughterhouse totaling 90 plots and 9 environmental samples. The transport does not influenced the percentage of isolation of the microorganism (p>0.05). Of the total of 99 samples, 50 (50.5%) were identified as Salmonella spp., and was identified a variety of serovars: Agona (30%), Typhimurium (26%), Minnesota (24%), Infantis (18%) and Panama (2%). Dendrograms showed homology among isolates of different serovars grouped into clusters. The similarity was independent of the local of isolation, indicating the presence of several clones. The main sources of infection were cross-contamination between animals and environment and the consumption of contaminated feed. The diversity of strains and homology among the isolates indicates a common origin, demonstrating a need for monitoring of zoonotic bacterias and the deployment of more effective control measures for Salmonella spp. in swines.

• Salmonellosis Salmonella spp. samonelose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Melo R.T., Guimarães A.R., Mendonça E.P., Coelho L R., Monteiro G.P., Fonseca B.B. & Rossi D.A. 2011. [Serological identification and phylogenetic relationship of Salmonella spp. pig origin.] Identificação sorológica e relação filogenética de Salmonella spp. de origem suína. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(12):1039-1044. Laboratório de Biotecnologia Animal Aplicada, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Uberlândia, Rua Ceará s/n, Bloco 2D, sala 43, Bairro Umuarama, Uberlândia, MG 38402-018, Brazil. E-mail: roberta-melo@hotmail.com Salmonella spp. é um importante patógeno zoonótico que pode ser disseminado ao longo da cadeia produtiva de suínos. Objetivou-se avaliar a incidência de Salmonella spp. em fezes de suínos de terminação na granja, no pré-abate e amostras ambientais, identificar os sorovares e estabelecer a relação filogenética entre os isolados. Foram realizadas três coletas em lotes diferentes de suínos alojados na granja de terminação e nos mesmos animais após o transporte ao frigorífico totalizando 90 parcelas e 9 amostras ambientais. O transporte não influenciou na porcentagem de isolamento do microrganismo (p>0,05). Das 99 amostras, 50 (50,5%) foram identificados como Salmonella spp., sendo identificado uma multiplicidade de sorovares: Agona (30%), Typhimurium (26%), Minnesota (24%), Infantis (18%) e Panama (2%). Os dendrogramas demonstraram homologia entre isolados dos diferentes sorovares agrupados em clusters. A similaridade foi independente do local de isolamento indicando a presença de vários clones. As principais fontes de infecção determinadas foram a contaminação cruzada entre animais e ambiente e o consumo de ração contaminada. A diversidade de sorovares e a homologia entre eles indicam origem comum, demonstrando necessidade de monitoramento de bactérias zoonóticas e de implantação de medidas de controle mais eficazes para Salmonella spp. em suínos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Mineiro A.L.B.B., Vieira R.J., Costa E.A., Santos R.L., Gonçalves L.M.F., Carvalho S.M., Bomfim M.R.Q. & Costa F.A.L. 2011. Serology, polymerase chain reaction and histopathology for leptospirosis in samples collected at slaughter from dairy cows of Parnaiba region, state of Piauí, Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(10):859-866. Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinária, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Piauí, Campus da Socopo, Bairro Ininga, Teresina, PI 64049-550, Brazil. E-mail: fassisle@gmail.com The presence of anti leptospiral agglutinins (microscopic agglutination test - MAT) and DNA of leptospires was investigated in the kidney and urine (Polymerase Chain Reaction - PCR) in samples collected at the time of slaughter of cattle originating from the dairy basin of Parnaíba, Piauí, Brazil, as also the lesions in kidney, lung, liver, uterus, ovary and placenta (histopathology and immunohistochemistry). In the MAT, Hardjo was the predominant serovar with the highest number of reagent animals for the strain Hardjobovis/Sponselee. Anti-leptospiral antigens were scored in epithelial cells, interstitial vascular endothelium, endothelium of glomerular capillaries and Bowman’s capsule of 20 positive animals. Inflammatory cells were more common in the kidney. PCR was positive in urine and kidney tissue.

• Leptospirosis leotospirose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Mineiro A.L.B.B., Vieira R.J., Costa E.A., Santos R.L., Gonçalves L.M.F., Carvalho S.M., Bomfim M.R.Q. & Costa F.A.L. 2011. Serology, polymerase chain reaction and histopathology for leptospirosis in samples collected at slaughter from dairy cows of Parnaiba region, state of Piauí, Brazil. [Sorologia, reação em cadeia da polimerase e histopatologia para leptospirose em amostras coletadas de vacas leiteiras, em matadouro da região de Parnaíba, Piauí.] Pesquisa Veterinária Brasileira 31(10):859-866. Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinária, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal do Piauí, Campus da Socopo, Bairro Ininga, Teresina, PI 64049-550, Brazil. E-mail: fassisle@gmail.com Foi investigada a presença de aglutininas anti leptospiras (reação de soroaglutinação microscópica - SAM), de DNA de leptospiras no rim e na urina (reação de cadeia pela polimerase - PCR), bem como de lesões no rim, pulmão, fígado, útero, ovário e placenta (histopatologia e imunohistoquímica), em materiais colhidos, por ocasião do abate, de bovinos originários da bacia leiteira da região de Parnaíba, Piauí, Brasil. Na SAM o sorovar predominante foi o Hardjo com maior número de animais reagentes para a estirpe Hardjobovis/Sponselee. Antígenos anti leptospira foram marcados em 20 animais positivos nas células epiteliais e do endotélio vascular, endotélio dos capilares glomerulares e na cápsula de Bowman, somente nos animais infectados. O infiltrado inflamatório foi maior no rim do que nos demais órgãos. A PCR foi positiva em amostras de urina e tecido renal.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Knöbl T., Saidenberg A.B.S., Moreno A.M., Gomes T.A.T., Vieira M.A.M., Leite D.S., Blanco J.E. & Ferreira A.J.P. 2011. Serogroups and virulence genes of Escherichia coli isolated from psittacine birds. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(10):916-921. Faculdade de Medicina Veterinária do Complexo Educacional FMU, Av. Santo Amaro 1239, São Paulo, SP 04505 002, Brazil. E-mail: tknobl@usp.br Escherichia coli isolates from 24 sick psittacine birds were serogrouped and investigated for the presence of genes encoding the following virulence factors: attaching and effacing (eae), enteropathogenic E. coli EAF plasmid (EAF), pili associated with pyelonephritis (pap), S fimbriae (sfa), afimbrial adhesin (afa), capsule K1 (neu), curli (crl, csgA), temperature-sensitive hemagglutinin (tsh), enteroaggregative heat-stable enterotoxin-1 (astA), heat-stable enterotoxin -1 heat labile (LT) and heat stable (STa and STb) enterotoxins, Shiga-like toxins (stx1 and stx2), cytotoxic necrotizing factor 1 (cnf1), haemolysin (hly), aerobactin production (iuc) and serum resistance (iss). The results showed that the isolates belonged to 12 serogroups: O7; O15; O21; O23; O54; O64; O76; O84; O88; O128; O152 and O166. The virulence genes found were: crl in all isolates, pap in 10 isolates, iss in seven isolates, csgA in five isolates, iuc and tsh in three isolates and eae in two isolates. The combination of virulence genes revealed 11 different genotypic patterns. All strains were negative for genes encoding for EAF, EAEC, K1, sfa, afa, hly, cnf, LT, STa, STb, stx1 and stx2. Our findings showed that some E. coli isolated from psittacine birds present the same virulence factors as avian pathogenic E. coli (APEC), uropathogenic E. coli (UPEC) and Enteropathogenic E. coli (EPEC) pathotypes.

• Escherichia coli

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Knöbl T., Saidenberg A.B.S., Moreno A.M., Gomes T.A.T., Vieira M.A.M., Leite D.S., Blanco J.E. & Ferreira A.J.P. 2011. Serogroups and virulence genes of Escherichia coli isolated from psittacine birds. [Sorogrupos e genes de virulência em Escherichia coli isoladas de psitacídeos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 31(10):916-921. Faculdade de Medicina Veterinária do Complexo Educacional FMU, Av. Santo Amaro 1239, São Paulo, SP 04505 002, Brazil. E-mail: tknobl@usp.br Amostras de Escherichia coli isoladas de 24 psitacídeos doentes foram sorogrupadas e investigadas para a presença de genes que codificam os seguintes fatores de virulência: attaching e effacing (eae), plasmídeo EAF (EAF), pili associado à pielonefrite (pap), fímbria S (sfa), adesina afimbrial (afa), cápsula K1 (neu), curli (crl, csgA), hemaglutinina termosensível (tsh), enterotoxina termo-estável 1 de E. coli enteroagregativa (astA), toxina termolábil (LT) e toxina termoestável (STa e STb), Shiga-like toxinas (stx1 e stx2), fator citotóxico necrotizante 1 (cnf1), hemolisina (hly), produção de aerobactina (iuc) e resistência sérica (iss). Os resultados mostraram que os isolados pertenciam a 12 sorogrupos: O7; O15; O21; O23; O54; O64; O76; O84; O88; O128; O152 e O166. Os genes de virulência encontrados foram: crl em todos os isolados, pap em 10 isolados, iss em sete isolados, csgA em cinco isolados, iuc e tsh em três isolados e eae em dois isolados. A combinação dos genes de virulência revelou 11 perfis genotípicos distintos. Todas as amostras foram negativas para os genes que codificam EAF, EAEC, K1, sfa, afa, hly, cnf, LT, STa, STb, stx1 e stx2. Estes resultados demonstraram que algumas amostras de E. coli isoladas de psitacídeos apresentam os mesmos fatores de virulência presentes nos patotipos de E. coli patogênicas para aves (APEC), uropatogênicas (UPEC) e E. coli enteropatogênicas (EPEC).

Abstract in English:

ABSTRACT.- Biscola N.P., Fornazari F., Saad E., Richini-Pereira V.B., Campagner M.V., Langoni H., Barraviera B. & Ferreira Junior R.S. 2011. Serological investigation and PCR in detection of pathogenic leptospires in snakes. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(9):806-811. Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos, Universidade Estadual Paulista, Fazenda Experimental Lageado, Rua José Barbosa de Barros 1780, Botucatu, SP 18610-307, Brazil. E-mail: rseabra@cevap.org.br Detection of Leptospira by PCR had not yet been described in snakes. This study investigated, by microscopic agglutination test (MAT) and PCR, the presence of antibodies to Leptospira spp. and Leptospira spp., respectively, in venomous and non-venomous wildlife and captivity snakes. All snakes were divided into three groups to be compared: Group 1 (wildlife snakes - WS); Group 2 (snakes in intensive captivity - IC), and Group 3 (collective semi-extensive captivity -CC). Of the 147 snakes studied, 52 (35.4%) were positive for leptospirosis by MAT, 8 (15.4%) belonging to Group 1 (WS), 34 (65.4%) to Group 2 (IC) and 10 (19.2%) to Group 3 (CC). Jararaca (Bothrops jararaca) presented the highest average titer (66.7%, N=22/33) among the three group studied, and Hardjo prajtino was the most prevalent serovar (88.5%, N=46/52), with titers varying from 100 to 3200. Leptospira interrogans was revealed by PCR in kidney and liver of caiçaca (Bothrops moojeni) and jararaca-pintada (Bothrops pauloensis), showing 100% and 93% identity respectively. Future studies should be carried out for better understanding of the role of snakes as a reservoir of Leptospira in nature.

• Leptospira spp. Bothrops jararaca Bothrops moojeni Hardjo prajtino

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Biscola N.P., Fornazari F., Saad E., Richini-Pereira V.B., Campagner M.V., Langoni H., Barraviera B. & Ferreira Junior R.S. 2011. Serological investigation and PCR in detection of pathogenic leptospires in snakes. [Investigação sorológica e PCR na detecção de leptospiras patogênicas em serpentes.] Pesquisa Veterinária Brasileira 31(9):806-811. Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos, Universidade Estadual Paulista, Fazenda Experimental Lageado, Rua José Barbosa de Barros 1780, Botucatu, SP 18610-307, Brazil. E-mail: rseabra@cevap.org.br A detecção de Leptospira pela técnica de PCR não havia sido descrita em serpentes. Este estudo investigou pelo teste de aglutinação microscópica (MAT) e PCR, a presença de anticorpos anti-Leptospira spp. e Leptospira spp., respectivamente, em serpentes peçonhentas e não peçonhentas de vida livre e de cativeiro. As serpentes foram divididas em três grupos para comparação: Grupo 1 (serpentes recém-chegadas da natureza - WS); Grupo 2 (serpentes em regime de cativeiro intensivo -IC) e Grupo 3 (serpentes em regime de cativeiro coletivo semi-extensivo - CC). Do total de 147 serpentes estudadas, 52 (35,4%) foram positivas para leptospirose pelo MAT, as quais 8 (15,4%) pertenciam ao Grupo 1 (WS), 34 (65,4%) ao Grupo 2 (IC) e 10 (19,2%) ao Grupo 3 (CC). Das espécies estudadas, a jararaca (Bothrops jararaca) apresentou maior soropositividade (66,7%, N=22/33). O sorovar mais prevalente foi o Hardjo prajtino (88,5%, N=46/52) e os títulos variaram de 100 a 3200. Leptospira interrogans foi revelada por PCR nos rins e no fígado de caiçaca (Bothrops moojeni) e de jararaca-pintada (Bothrops pauloensis), mostrando 100% e 93% de identidade, respectivamente. Futuros estudos devem ser realizados para melhor compreensão do papel das serpentes como reservatório de leptospiras na natureza.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Herrmann G.P., Rodrigues R.O., Vidal C.E.S., Machado G., Moreira E.C. & Leite R.C. 2011. [Post vaccinal antibodies profile of sheep immunized with one or two doses of an oil emulsified anti leptospirosis bacterin produced with serovar Hardjo, type Hardjoprajitno, strain Norma, isolated in Brazil.] Curva de anticorpos pós-vacinais em ovinos imunizados com uma ou duas doses de bacterina oleosa anti-leptospirose, produzida com a sorovariedade Hardjo, tipo Hardjoprajitno, estirpe Norma, isolada no Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(8):683-689. Departamento de Microbiologia e Parasitologia, Universidade Federal de Santa Maria, Avenida Roraima 1000, Prédio 20, Sala 4011, Campus Universitário, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil, E-mail: gederpaulo@hotmail.com It was compared the level of antibodies of sheep immunized with one or two doses of an oil bacterin produced with serovar Hardjo, type Hardjoprajitno, strain Norma, isolated from cattle urine in Brazil. Cultures of 2x108 leptospires/mL were inactivated with formalin 0.3%, final concentration and emulsified in oil Emulsigen® 12%. The vaccine dose was standardized to the concentration of 1x108 leptospires/mL. Forty adult sheep, Santa Inês breed from a herd free of leptospirosis by clinical and serological examinations during one year were chosen for the experiment. Group A (n=15) received two subcutaneous 3.0 mL vaccine dose, interval of 30 days. Group B (n=15) received one subcutaneous 3.0 mL vaccine dose. Group C (control) received one subcutaneous dose of 3.0 mL of 0.85% sodium chloride solution. Post vaccination antibody titers were measured by microscopic agglutination test (MAT) and an in house enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) every 30 days during 120 days. At 30 days post-vaccination, the titers of the groups A and B ranged from 80 to 160. In group A, after the booster dose, the titers increased two to four times until 3,200, while in the group B the titers were lower than 160 and decreased by one to two times after 60 days after vaccination. Using a single dose, the antibodies persisted for only 30 days, and with two doses with 30 days of interval, the antibodies were detectable for 60 days through the MAT test and 120 days through the ELISA. The MAT test detected IgM titers of vaccine only for 60 days, while the ELISA was able to detect antibodies during the 120 days. In the negative control group, nonspecific reactions occurred in the ELISA up to titer 80, however titers in the MAT of the same animals remained at zero. The ELISA test can be used to assess anti leptospire vaccinal antibody level to the serovar Hardjo, type Hardjoprajitno, strain Norma in sheep.

• Oil emulsified anti leptospirosis bacterin vaccines bacterina oleosa anti-leptospirose vzcina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Herrmann G.P., Rodrigues R.O., Vidal C.E.S., Machado G., Moreira E.C. & Leite R.C. 2011. [Post vaccinal antibodies profile of sheep immunized with one or two doses of an oil emulsified anti leptospirosis bacterin produced with serovar Hardjo, type Hardjoprajitno, strain Norma, isolated in Brazil.] Curva de anticorpos pós-vacinais em ovinos imunizados com uma ou duas doses de bacterina oleosa anti-leptospirose, produzida com a sorovariedade Hardjo, tipo Hardjoprajitno, estirpe Norma, isolada no Brasil. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(8):683-689. Departamento de Microbiologia e Parasitologia, Universidade Federal de Santa Maria, Avenida Roraima 1000, Prédio 20, Sala 4011, Campus Universitário, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil, E-mail: gederpaulo@hotmail.com Foi comparado o nível de anticorpos de ovelhas imunizadas com uma ou duas doses de bacterina oleosa produzida com a sorovariedade Hardjo, tipo Hardjoprajitno, estirpe Norma, isolada da urina de bovino no Brasil. Culturas de 2x108 leptospiras/mL foram inativadas com formalina a 0,3%, à concentração final e emulsionada em óleo Emulsigen® 12%. A dose da vacina foi padronizada para a concentração de 1x108 leptospiras/mL. Quarenta ovinos adultos, da raça Santa Inês, de um rebanho livre de leptospirose por exames clínicos e sorológicos durante um ano foram escolhidos para o experimento. O grupo A (n=15) recebeu duas doses de 3,0mL da vacina por via subcutânea, com intervalo de 30 dias. O grupo B (n=15) recebeu dose única de 3,0mL, via subcutânea e o grupo C (controle) recebeu uma dose subcutânea de 3,0mL de solução 0,85% de cloreto de sódio. Os títulos de anticorpos pós-vacinação foram mensurados pelo teste de soroaglutinação microscópica (SAM) e um teste imunoenzimático (ELISA) a cada 30 dias durante 120 dias. Os títulos dos grupos A e B na primeira colheita variaram de 80 a 160. No grupo A, após a segunda dose, os títulos aumentaram duas a quatro vezes, até 3.200, enquanto no grupo B os títulos de aglutininas foram menores que 160 e diminuíram uma a duas vezes após 60 dias da vacinação. Utilizando-se dose única, os anticorpos persistiram por somente 30 dias e, com duas doses, com 30 dias de intervalo, os anticorpos foram detectáveis por 60 dias por meio do teste de SAM e 120 dias no teste de ELISA. Assim, o teste de SAM detectou títulos de IgM vacinal somente por 60 dias, enquanto o teste de ELISA foi capaz de detectar anticorpos durante os 120 dias. No grupo controle negativo, ocorreram no ELISA reações inespecíficas de títulos até 80, porém no SAM os títulos dos mesmos animais se mantiveram em zero. O teste de ELISA pode ser utilizado para medir anticorpos vacinais para a sorovariedade Hardjo, tipo Hardjoprajitno, estirpe Norma em ovinos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rodrigues R.O., Silva J.A., Alves T.M., Dorneles E.M.S., Minharro S., Lage A.P., Leite R.C. & Moreira E.C. 2011. [Characterization of outer membrane proteins of serovar Hardjo isolated from cattle in Minas Gerais, Brazil.] Caracterização das proteínas de superfície de membrana externa da sorovariedade Hardjo isolada de bovinos em Minas Gerais. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(7):555-560. Universidade Vale do Rio Doce, Campus Antônio Rodrigues Coelho, Rua Israel Pinheiro 2000, Bairro Universitário, Cx. Postal 295, Governador Valadares, MG 35020-220, Brazil. E-mail: rogerrodriguesvet@gmail.com Differences in the protein profile of Leptospira sp. strains Sponselee, Norma and Hardjoprajitno were observed, with bands ranging from 175.47 kDa to 12.10 kDa. Strain Sponselee presented a 12-band profile, while strain Norma showed 11 and strain Hardjoprajitno showed 9 bands in the profile. All bands observed in Sponselee strain profile could match bands in the other two strains. Strain Norma lacks a band at 35.77 kDa and strain Hardjoprajitno lacks the bands at 89.59 kDa, 35.77 kDa and 12.10 kDa. The recognition profile from hyperimmune sera was also different for the studied serovar Hadjo strains. The majority of recognized proteins was in the range of 35.83 kDa to 29.19 kDa. Cattle sera against strain Norma only recognized low molecular mass proteins in strains Norma (6.80 kDa) and Hardjoprajitno (6.80 kDa and 5.30 kDa). Bovine sera against strain Hardjoprajitno recognized a 44.33 kDa protein in all studied strains and proteins of 4.22 kDa in strains Sponselee and Norma and of 10.49 kDa and 6.16 kDa in strain Hadjoprajitno. The different identified proteins could become specific targets to the development of diagnostic tests and vaccines against bovine leptospirosis.

• Leptospira serovar Hardjo protein profile Leptospira sorovar Hardjo perfil protéico

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rodrigues R.O., Silva J.A., Alves T.M., Dorneles E.M.S., Minharro S., Lage A.P., Leite R.C. & Moreira E.C. 2011. [Characterization of outer membrane proteins of serovar Hardjo isolated from cattle in Minas Gerais, Brazil.] Caracterização das proteínas de superfície de membrana externa da sorovariedade Hardjo isolada de bovinos em Minas Gerais. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(7):555-560. Universidade Vale do Rio Doce, Campus Antônio Rodrigues Coelho, Rua Israel Pinheiro 2000, Bairro Universitário, Cx. Postal 295, Governador Valadares, MG 35020-220, Brazil. E-mail: rogerrodriguesvet@gmail.com Foram identificadas diferenças no perfil protéico das amostras de Sponselee, Norma e Hardjoprajitno, com bandas protéicas entre 175, 47 kDA e 12,10 kDa. A amostra Sponselee foi a que apresentou maior número de bandas (12), seguida da Norma que apresentou 11 bandas e de Hardjoprajitno que apresentou 9 bandas. Todas as bandas observadas na amostra Sponselee possuíam correspondentes nas outras duas amostras. A amostra Norma não apresentou uma banda em torno de 35,77 kDa e a Hardjoprajitno não apresentou bandas em torno de 89,59 kDa, 35,77 kDa e 12,10 kDa. O reconhecimento dessas proteínas por soros hiperimunes contra cada uma das amostras também mostrou diferenças, sendo que o maior número de proteínas reconhecido em todas as amostras por todos os soros se encontrou entre 35,83 kDa e 29,19 kDa. Os soros contra bovino na amostra Norma só reconheceu proteínas de baixa massa molecular nas amostras Norma (6,80 kDa) e Hardjoprajitno (6,80 kDa e 5,30 kDa). Soro bovino contra a amostra Hardjoprajitno reconheceu uma proteína de 44,33 kDa todas às amostras e proteínas de 4,22 kDa nas amostras Sponselee e Norma e de 10,49 kDa e 6,16 kDa na Hardjoprajitno. As diferentes proteínas identificadas poderiam se constituir em alvos específicos para o desenvolvimento de testes diagnósticos e vacinas contra leptospirose bovina.