PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

In order to test different technics to control Senecio madagascariensis, three experiments were carried out. In the first, 40 sheep were placed in an area of four hectares for 90 days, with medium/high levels of infestation by the plant. The area after this period was desiccated with glyphosate (Roundup®) and seeded with Lotus corniculatus L., Trifolium repens, Medicago sativa and Festuca arundinacea Schreb. by direct seeding. After eight months, sheep returned to the area for another 90 days. The second experiment was conducted with 10 sheep grazing for 30 days and 60 days’ rest, in three areas of 0.5 hectares each, with low, medium and high levels of S. madagascariensis infestation. The third experiment was carried out using drying, plowing and cultivated pasture (legumes and grasses) for three consecutive times without the use of sheep in an area infested by the plant. For the control of S. brasiliensis and other species of the genus, a fourth experiment was performed on a farm with history of intoxication by Senecio spp. in cattle. Eighty-six sheep were used in an area of 90 hectares for a year. The results of these experiments demonstrated that sheep consume and decrease the amount of S. madagascariensis in infested areas. Furthermore, it also indicated that S. madagascariensis to be efficiently controlled requires continuous grazing with at least four sheep per hectare. Practices as drying the pastures with herbicides, tillage and pasture planting can help eliminate the plant in long-term plan. In areas with S. brasiliensis infestation mowing can be an effective practice, mainly due to the high size of the plant, since it facilitates consumption by sheep.

• Poisonous plants Senecio madagascariensis Asteraceae hepatotoxic plants seneciosis plant poisoning cattle toxicoses

Abstract in Portuguese:

Com o objetivo de testar diferentes formas de controle de Senecio madagascariensis foram realizados três experimentos. No primeiro, 40 ovinos foram colocados em uma área de quatro hectares por 90 dias, com infestação média e alta por S. madagascariensis. A área após este período foi dessecada com glifosato (Roundup®) e semeada com Lotus corniculatus L. (cornichão), Trifolium repens (trevo branco), Medicago sativa (alfafa) e Festuca arundinacea Schreb. (festuca) por plantio direto. Os ovinos, após oito meses, retornaram a área por mais 90 dias. O segundo experimento foi realizado com 10 ovinos em pastejo por 30 dias com 60 dias de descanso em três áreas de 0,5 hectares cada uma, com infestação baixa, média e alta por S. madagascariensis. O terceiro experimento foi realizado utilizando-se dessecação, aração e plantio de pastagens (leguminosas e gramíneas) por três vezes consecutivas, sem utilização de ovinos em uma área invadida pela planta. Para o controle de S. brasiliensis e outras espécies do gênero, um quarto experimento foi realizado em uma propriedade rural com histórico de intoxicação por Senecio spp. em bovinos. Foram utilizados 86 ovinos, que permaneceram em uma área de 90 hectares durante um ano. Os resultados destes experimentos demonstraram que os ovinos consomem S. madagascariensis e diminuem a quantidade de planta em áreas infestadas. Por outro lado, evidenciou-se também que S. madagascariensis para ser controlado de forma eficiente necessita de pastejo contínuo com pelo menos quatro ovinos por ha. As práticas como dessecação com herbicidas, aração e plantio de pastagem podem auxiliar na eliminação da planta a longo prazo. Em áreas de infestação por S. brasiliensis a roçagem pode ser uma prática eficiente, principalmente pelo porte alto da planta, pois facilita o consumo pelos ovinos.

• Plantas tóxicas Senecio spp Asteraceae seneciose intoxicação por plantas ruminantes toxicoses

Abstract in English:

This is an epidemiological study of leptospirosis in 24 month-old females from 246 herds. Two thousand, seven hundred and sixty six (2,766) animals were randomly sampled in the nine counties comprising the region of Pantanal of Mato Grosso do Sul, Brazil. The risk factors associated with the disease were also identified. Blood samples were collected from September to November 2009 and examined by the microscopic agglutination test (MAT) against a collection of 24 live antigens of Leptospira spp., representatives of serovars Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panama, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana, and Patoc. Additionally, twelve representatives of Leptospira strains isolated in Brazil were added to the collection of antigens for the microscopic agglutination test (MAT). The apparent prevalence was 66% and the actual prevalence of infected animals was 79.80%, with a confidence interval of 95% (78.3 to 81.3) and 241 herds having at least one reactive animal. The most likely serovars were Hardjo followed by Wolffi. Results show that bovine leptospirosis is still present in Pantanal, with high prevalence both in animals and herds, the main risk factors for the disease being the type of cattle farming and breeding.

• Leptospirosis cattle epidemiology Pantanal bacterioses

Abstract in Portuguese:

Foi realizado um estudo epidemiológico da leptospirose em fêmeas acima de 24 meses, provenientes de 246 rebanhos, e 2.766 animais amostrados aleatoriamente nos nove municípios que compõem a região do Pantanal de Mato Grosso do Sul, bem como identificados os fatores de risco associados à doença. As amostras de sangue foram coletadas no período de setembro a novembro de 2009 e examinadas pelo teste de aglutinação microscópica ante uma coleção de 24 antígenos vivos de Leptospira spp., representantes dos sorovares Australis, Bratislava, Autumnalis, Butembo, Castellonis, Batavie, Canicola, Whitcombi, Cynopteri, Grippotyphosa, Hebdomadis, Copenhageni, Icterohaemorrhagiae, Javanica, Panamá, Pomona, Pyrogenes, Hardjo, Wolffi, Shermani, Tarassovi, Sentot, Andamana e Patoc. Adicionalmente, representantes de doze estirpes de leptospiras isoladas no Brasil foram adicionados à coleção de antígenos do teste de soroaglutinação microscópica (SAM). A prevalência aparente foi de 66% e a prevalência real de animais infectados, de 79,80%, com intervalo de confiança (IC) de 95% (78,3-81,3) e 241 rebanhos apresentando pelo menos um animal reagente. Os sorovares mais prováveis foram o Hardjo seguido pelo Wolffi. Os resultados demonstram que a leptospirose bovina continua presente no Pantanal, com alta prevalência tanto em rebanhos quanto em indivíduos, sendo os principais fatores de risco para a doença o tipo de exploração e a raça.

• Leptospirose bovinos epidemiologia Pantanal bacterioses

Abstract in English:

Reproductive diseases, mainly endometritis, are important hurdles in cattle raising, In the current study we evaluated gross, bacteriological, cytological, and histological findings from selected sites of the genital from 23 slaughtered cows and tested whether there is an association between these findings and the probability of reaching a reliable diagnosis. The results from the examinations of macroscopic aspects of uterine secretions, the cytological, bacteriological, and histopathological findings were then correlated. There was no significant correlation (P>0.05) of the statistical data from different parts of the genital tract. Trueperella pyogenes and Escherichia coli were isolated from the vagina in 3/23 cases. In only 2/23 samples Enterococcus faecalis and a gram-negative, oxidase-positive bacteria were isolated from the cervix uteri. Only Staphylococcus epidermidis, in 1/23 case, was isolated from the uterus. Histopathological findings in uterus from samples of Groups II (moderate lesions) and III (severe lesions) did not translated in grossly visible changes. Samples from reproductive tracts with secretion in the vagina and cervix uteri had no detectable changes in the other parameters analyzed from this portion. Uterus with positive bacterial culture had evidence of ascendant inflammation judging by the high granulocyte count in the three analyzed portions. This study reinforces that vaginitis and cervicitis in the cow diagnosed only by clinical examination does not reflect the real status of the uterine health. For this reason, treatment of uterine disorders should be conducted based on reliable tests to determine the appropriate therapy for each situation.

• Cattle diseases reproductive diseases reproductive tract endometritis

Abstract in Portuguese:

Doenças reprodutivas causam altas perdas econômicas nos rebanhos bovinos, sendo a endometrite uma das alterações mais relevantes. Os objetivos desta pesquisa foram avaliar a associação dos achados fisiopatológicos em exames macroscópicos, bacteriológicos, citológicos e histopatológicos nas porções do trato genital de 23 vacas abatidas, bem como avaliar a necessidade de associação destes exames para efetuar diagnóstico fidedigno. A avaliação macroscópica da secreção, os exames histopatológico, citológico e as bactérias identificadas foram correlacionados. Não houve associação (P>0,05) dos resultados nas diferentes porções do trato genital. Na vagina foram isoladas as bactérias Trueperella pyogenes e Escherichia coli. Na cérvix, em apenas 2/23 (8,6%) amostras isolou-se Enterococcus faecalis e gram negativo oxidase positiva. No útero houve isolamento apenas da bactéria Staphylococcus epidermidis. As amostras histopatológicas classificadas em grupo II e III não apresentaram alterações detectadas no exame macroscópico. As amostras com secreção não fisiológica na vagina e cérvix não apresentaram alterações nos outros exames na porção uterina. A amostra com cultura bacteriológica positiva no útero demonstrou uma infecção ascendente através da alta contagem de granulócitos nas três porções analisadas. O presente estudo reforça o conceito de que a vaginite e cervicite diagnosticadas pelo exame clinico na vaca não retratam o real status da saúde uterina e por esta razão, o tratamento do útero deve ser conduzido com critério, alicerçado nos exames complementares para definir a terapia adequada para cada situação.

• Endométrio granulócitos trato reprodutivo bactérias bovinos

Abstract in English:

This study made a detailed description of the milk producer of the municipality of Joanópolis/SP, situated 115 km from the largest city of Brazil, São Paulo, and how they deal with tick control and other important diseases for dairy farming. Forty milk producers were interviewed. It was found that most of them fit into family farms: small farms with family labor; 72.5% have another source of income in addition to the milk; 75% produce less than 100 liters of milk per day; and most of them are not technified (72.5% do manual milking; 55% do not keep zootechnical records; 80% do not fertilize the pastures; 87.5 % do not use artificial insemination). Tick control is made without technical criteria. A hundred percent of the interviewed applied the acaricide in the same place of milking; 90% do not use protective equipment to apply the acaricide. The prevalent cattle breed is the crossbred Girolando (87.5%), a more tick resistant breed. This may contribute to 57.5% that are satisfied with tick control. It was found that few producers (only 12.5%) have constant technical assistance. This may be the explanation for the low use of technologies and the failures observed in the diagnosis of diseases and the use of tick control.

• Tick control Rhipicephalus microplus dairy cattle milk questionnaire parasitoses

Abstract in Portuguese:

Este estudo verificou o perfil do produtor de leite do município de Joanópolis, SP, situado a 115 km de São Paulo, e como esse produtor lida com o controle do carrapato e outras doenças importantes na pecuária leiteira. Quarenta produtores de leite foram entrevistados. Verificou-se que grande parte deles se enquadra em agricultura familiar: pequenas propriedades com mão-de-obra familiar. Verificou-se que 72,5% possuem outra fonte de renda além do leite; 75% produzem menos que 100 litros de leite por dia, e a maioria não é tecnificada (ordenha manual: 72,5 %; não faz escrituração zootécnica: 55%; não aduba pastos: 80%; não utiliza inseminação artificial: 87,5%). O controle do carrapato é feito sem critérios técnicos; a aplicação do carrapaticida é feita no mesmo local da ordenha; 90% não usam equipamentos de proteção individual para aplicar o carrapaticida. O gado prevalente é o mestiço Girolando (87,5%), que, por ser mais resistente ao carrapato, deve contribuir para que 57,5% dos entrevistados estejam satisfeitos com o controle do carrapato. Verificou-se que poucos produtores (apenas 12,5%) possuem assistência técnica constante. Isso pode ser a explicação para o baixo uso de tecnologias e nas falhas observadas no diagnóstico das doenças e no controle do carrapato.

• Carrapatos Rhipicephalus microplus controle bovinos leite questionário parasitoses

Abstract in English:

Central nervous system (CNS) development researches are extremely important to the most common congenital disorders and organogenesis comprehension. However, few studies show the entire developmental process during the critical period. Present research can provide data to new researches related to normal development and abnormalities and changes that occur along the CNS organogenesis, especially nowadays with the need for preliminary studies in animal models, which could be used for experimental research on the influence of viruses, such as the influence of Zika virus on the development of the neural system and its correlation with microcephaly in human newborns. Then, present study describes CNS organogenesis in cattle according to microscopic and macroscopic aspects, identifying structures and correlating to gestational period. Fourteen embryos and nine bovine fetuses at different ages were collected and analyzed. All individuals were measured in order to detect the gestational period. Bovine embryo at 17 days age has its neural tube, cranial neuropore, caudal neuropore and somites developed. After 24 days of development, were observed in cranial part of neural tube five encephalic vesicles denominated: telencephalon, diencephalon, mesencephalon, metencephalon and myelencephalon. In addition, the caudal part of neural tube was identified with the primitive spinal cord. The primordial CNS differentiation occurred from 90 to 110 days. The five encephalic vesicles, primordial spinal cord and the cavities: third ventricule, mesencephalic aqueduct, fourth ventricle and central canal in spinal cord were observed. With 90 days, the main structures were identified: (1) cerebral hemispheres, corpus callosum and fornix, of the telencephalon; (2) interthalamic adhesion, thalamus, hypothalamus and epythalamus (glandula pinealis), of the diencephalon; (3) cerebral peduncles and quadruplets bodies, of the mesencephalon; (4) pons and cerebellum, of the metencephalon; (5) medulla oblongata or bulb, of the myelencephalon; and (6) spinal cord, of the primitive spinal cord. After 110 days of gestation, the five encephalic vesicles and its structures were completely developed. It was noted the presence of the spinal cord with the cervicothoracic and lumbossacral intumescences. In summary, the results describes the formation of the neural tube from the neural plate of the ectoderm, the encephalic vesicles derived from the neural tube and subsequent structural and cavities subdivisions, thus representing the complete embryology of the central nervous system.

• Bovine central nervous system encephalon encephalic vesicles CNS ontogeny spinal cord

Abstract in Portuguese:

Os estudos que descrevem o desenvolvimento do sistema nervoso central (SNC) são de suma importância para compreensão da organogênese e identificação dos prováveis eventos que resultam em malformações congênitas. Estes dados podem subsidiar novas pesquisas relacionadas ao desenvolvimento normal, e interpretação de malformações e alterações que ocorrem ao longo da organogênese do SNC, considerando neste momento a necessidade de estudos preliminares em modelos animais, os quais poderiam ser utilizados para pesquisas experimentais sobre a influência de agentes infecciosos como o Zika vírus, no desenvolvimento do sistema nervoso e suas relações com a microcefalia em humanos recém-nascidos. O presente estudo teve como objetivo descrever os aspectos morfológicos macro e microscópicos da organogênese do SNC de bovinos, buscando correlacionar os achados morfológicos com a idade gestacional. Todos os animais foram mensurados para detectar o período gestacional. Foram coletados e analisados 14 embriões e nove fetos de bovinos de diferentes idades gestacionais. No embrião bovino a partir do décimo sétimo dia de gestação, encontra-se a formação do tubo neural, o neuroporo cranial e neuroporo caudal, e formação dos somitos. Após 24 dias de desenvolvimento, são observadas na parte cranial do tubo neural cinco vesículas encefálicas denominadas: telencéfalo, diencéfalo, mesencéfalo, metencéfalo e mielencéfalo; e na parte caudal do tubo neural, encontra-se a medula espinhal primitiva. Entre 90 a 110 dias de gestação, observa-se a total diferenciação das cinco vesículas do SNC. Com 90 dias, são identificas as principais estruturas: (1) do telencéfalo, os hemisférios cerebrais, corpo caloso e fórnix; (2) do diencéfalo, a aderência intertalâmica, tálamo, hipotálamo e epitálamo (glândula pineal); (3) do mesencéfalo, os pedúnculos cerebrais e os corpos quadrigêmios; (4) do metencéfalo, a ponte e o cerebelo; (5) do mielencéfalo, a medula oblonga (ou bulbo); e (6) da medula espinhal primitiva, a medula espinhal. Após 110 dias, as cinco vesículas encefálicas e as suas subdivisões se encontram completamente desenvolvidas. Notou-se a presença da medula espinhal com as intumescências cervicotorácica e lombossacral. Em resumo, os resultados demonstram a formação do tubo neural a partir da placa neural do ectoderma, as vesículas encefálicas provenientes do tubo neural e posteriormente as subdivisões das estruturas e das cavidades, que representam a completa embriologia do sistema nervoso central.

• Sistema nervoso central bovinos encéfalo medula espinhal ontogenia SNC vesículas encefálicas

Abstract in English:

ABSTRACT.- Bier D., Tutija J.F., Pasquatti T.N., Oliveira T.L., Araújo F.R. & Verbisck N.V. 2017. [MALDI–TOF mass spectrometry identification of Salmonella spp. and Escherichia coli isolated from bovine carcasses.] Identificação por espectrometria de massa MALDI-TOF de Salmonella spp. e Escherichia coli isolados de carcaças bovinas. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1373-1379. Setor de Sanidade Animal, Embrapa Gado de Corte, Av. Rádio Maia 830, Zona Rural, Campo Grande, MS 79106-550, Brazil. E-mail: newton.verbisck@embrapa.br The aim of this study was to introduce matrix-assisted laser desorption/ionization (MALDI) time-of-flight (TOF) mass spectrometry to improve the traditional microbiological method for the detection of Salmonella spp. and Escherichia coli in beef carcasses. Two hundred seventy samples from 90 beef carcasses were evaluated. The methodologies described in ISO 6579:2002 and in the Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods were used for Salmonella spp. and E. coli isolation, respectively. MALDI-TOF analysis were performed on tryptone soya broth suspension isolates or directly from nutrient agar colonies, from the positive, inconclusive or negative biochemically tested samples for Salmonella and E. coli. Mass profiles were acquired on an Autoflex III SmartBeam MALDI-TOF mass spectrometer and the raw spectra were processed using the MALDI Biotyper software (Bruker Daltonics). According to the preliminary identification based on colony morphology and the biochemical reactions, seven isolates were positive for Salmonella spp. Through MALDI Biotyper these seven isolates were also classified as belonging to the genus Salmonella and further identified as S. enterica. Four isolates showing unusual phenotypic characteristics and inconclusive results in biochemical tests for Salmonella were identified as belonging to Citrobacter and Proteus genera after MALDI analysis. Regarding Escherichia coli, 37 were positive for species biochemical testing which MALDI Biotyper confirmed. MALDI-TOF methodology allowed rapid Salmonella spp. and E. coli identity confirmation and may be used to detect these microrganisms within bacterial isolates from beef carcasses.

• Salmonella spp. Escherichia coli enterobacteria enterobactérias

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Bier D., Tutija J.F., Pasquatti T.N., Oliveira T.L., Araújo F.R. & Verbisck N.V. 2017. [MALDI–TOF mass spectrometry identification of Salmonella spp. and Escherichia coli isolated from bovine carcasses.] Identificação por espectrometria de massa MALDI-TOF de Salmonella spp. e Escherichia coli isolados de carcaças bovinas. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1373-1379. Setor de Sanidade Animal, Embrapa Gado de Corte, Av. Rádio Maia 830, Zona Rural, Campo Grande, MS 79106-550, Brazil. E-mail: newton.verbisck@embrapa.br O objetivo deste trabalho foi introduzir a técnica de espectrometria de massa com fonte de ionização e dessorção a laser assistida por matriz e analisador de tempo-de-voo (MALDI-TOF) para incrementar o método tradicional microbiológico na detecção de Salmonella spp. e Escherichia coli em carcaças bovinas. Foram avaliadas 270 amostras de 90 carcaças de bovinos. Para isolamento de Salmonella spp. e E. coli, foram utilizadas, respectivamente, as metodologias descritas na ISO 6579:2002 e no Compendium of Methods for the Microbiological Examination of Foods. As análises por MALDI-TOF foram realizadas a partir de isolados cultivados em ágar nutriente ou em caldo triptona de soja, provenientes das amostras com características bioquímicas positivas (n=7), inconclusivas (n=4) e negativas (n=85) para Salmonella spp. e bioquímicas positivas (n=37) e negativas (n=85) para E. coli. Os perfis de massas foram adquiridos com o espectrômetro de massas MALDI-TOF Autoflex III SmartBeam e os espectros brutos foram processados usando o programa MALDI Biotyper (Bruker Daltonics). De acordo com a identificação preliminar, com base na morfologia das colônias e nas reações bioquímicas, sete isolados foram considerados positivos para Salmonella spp. Através do MALDI Biotyper, esses sete isolados foram classificados como pertencentes ao gênero Salmonella e, além disso, identificados como S. enterica. Quatro isolados que apresentaram características fenotípicas não usuais e resultados inconclusivos nos testes bioquímicos para Salmonella foram identificados como pertencentes aos gêneros Citrobacter e Proteus após análise por MALDI. Para E. coli, 37 amostras foram positivas pelos testes bioquímicos da espécie, o que foi confirmado por MALDI Biotyper. A metodologia MALDI-TOF permitiu a rápida confirmação da identidade de Salmonella spp. e E. coli, podendo ser utilizada para detecção desses microrganismos em isolados bacterianos de carcaças bovinas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rodrigues R.A., Meneses I.I.F.S., Jorge K.S.G., Silva M.R., Santos L.R., Lilenbaum W., Etges R.N. & Araújo F.R. 2017. False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1380-1384. Embrapa Gado de Corte, Av. Rádio Maia 830, Campo Grande, MS 79106-550, Brazil. E-mail: flabio.araujo@embrapa.br According to the Brazilian National Program for the Control and Eradication of Animal Brucellosis and Tuberculosis (PNCEBT), the routine tests for the diagnosis of bovine tuberculosis in the country are the simple intradermal tuberculin test (SITT) of the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA), the caudal fold test and the comparative intradermal tuberculin test (CITT). The latter is also used as a confirmatory test. A group of 53 animals from three dairy herds in a focal area for bovine tuberculosis, that were submitted to depopulation in the state of Rio Grande do Sul, were submitted to the CITT. Tissues were cultured and the resulting colonies were confirmed by PCR and DNA sequencing. Among the 53 animals analyzed using the CITT, 32 (60.4%) were negative, 14 (26.4%) were positive and seven (13.2%) results were inconclusive. The CITT detected 11 of the 39 animals with culture-confirmed M. bovis infection as positive. Among the total of 14 uninfected animals based on cultures, the CBT detected eight as negative. Thus, the CITT demonstrated sensitivity of 28.2% and specificity of 57.1% for the population sampled. A total of 24/32 (75.0%) of the animals with negative CITT results were culture positive (confirmed by PCR) and were considered false negatives based on the CITT. The maintenance of these false-negative animals in herds has serious implications for the control of the disease, since they can be a source of infection. The addition of complementary tests could help identify such animals and increase the odds of diagnostic success.

• Tuberculosis Mycobacterium bovis Tuberculin Test tuberculose tuberculose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rodrigues R.A., Meneses I.I.F.S., Jorge K.S.G., Silva M.R., Santos L.R., Lilenbaum W., Etges R.N. & Araújo F.R. 2017. False-negative reactions to the comparative intradermal tuberculin test for bovine tuberculosis. [Reações falso-negativas ao teste cervical comparativo para tuberculose bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1380-1384. Embrapa Gado de Corte, Av. Rádio Maia 830, Campo Grande, MS 79106-550, Brazil. E-mail: flabio.araujo@embrapa.br No Brasil, segundo o Programa Nacional de Controle e Erradicação da Brucelose e Tuberculose Animal (PNCEBT), do Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), os testes de rotina para o diagnóstico de tuberculose bovina são o teste cervical simples (TCC), o teste da prega caudal (TPC) e o teste cervical comparativo (TCC), sendo que o último também é utilizado como teste confirmatório. Um grupo de 53 animais oriundos de três rebanhos leiteiros de área de foco para tuberculose bovina que foram submetidos a vazio sanitário no Rio Grande do Sul foi submetido ao TCC. Os tecidos destes animais foram cultivados e as colônias resultantes confirmadas por PCR e sequenciamento de DNA. Dos 53 animais analisados no TCC, 32 (60,4%) foram negativos, 14 (26,4%) positivos e sete (13,2%) inconclusivos, com base no PNCEBT. O TCC detectou como positivos 11 dos 39 animais com infecção por M. bovis confirmada por cultivo. Do total de 14 animais não infectados, baseado na cultura, o TCC detectou oito como negativos. Assim, o TCC apresentou, para a população amostrada, sensibilidade de 28,2% e especificidade de 57,1%. Um total de 24/32 (75,0%) dos animais negativos ao TCC foi positivo no cultivo (confirmado por PCR), sendo considerados falso-negativos ao TCC. A manutenção destes animais falso-negativos nos rebanhos tem sérias implicações para o controle da enfermidade, já que os mesmos podem ser fonte de infecção. A adição de testes complementares poderia auxiliar na identificação destes animais, aumentando a cobertura diagnóstica.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Novo S.M.F., Costa J.F.R., Baccili C.C., Sobreira N.M., Maia M.A., Leite S.B.P., Hurley D.J. & Gomes V. 2017. Specific immune response in neonate Holstein heifer calves fed fresh or frozen colostrum. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1385-1394. Departamento de Medicina Interna, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, Butantã, São Paulo, SP 05508-270. E-mail: viviani.gomes@usp.br The objective of this study was to evaluate the influence of viable cells from colostrum on immune development in dairy heifer calves during the first 28 days of life. The animals were distributed between 2 groups: COL+ (n=9) receiving fresh whole colostrum from their own damns; and COL- (n=10) receiving pooled frozen colostrum, containing no viable cells, from a pool of donor cows. These calves were assessed before colostrum intake (D0), 48 hours of age (D2), and weekly from D7 to D28. The development of immunity was evaluated by assessment of the phenotype of blood leukocyte subsets, and induced cytokine production after 72 hours of stimulation in culture with concanavalin A (ConA), killed Staphylococcus aureus (S.aureus) and killed Escherichia coli (E. coli) by peripheral blood mononuclear cell (PBMC). The clinical history of these calves was marked by a high frequency of diarrhea in both groups. However, COL- had greater diarrhea intensity scores (fecal score~3 of 4), and rectal temperature on D7 than COL+ calves. Moreover, bronchopneumonia (n=1) and navel inflammation were observed only in COL- calves. COL- had a lower concentration of serum iron, and a higher absolute number of lymphocytes on D7 than COL+. COL- also had a higher percentage of anemic calves than the COL+ calves on D21 and D28. In general, the percent of cells within each subset of leukocytes was similar between the groups over the experiment, except on week 1 when COL- calves had a higher percentage of lymphocytes expressing CD45RO+ (P=0.07). A steady increase in CD45RO+ and concomitant decline in CD45RO- leukocytes was observed over the course of the study, indicating the development of immune memory. The proportion of CD14MHCII+ leukocytes increased with age (P≤0.05). The median background cytokine production by PBMC that were not stimulated was below the level of detection of the assays used for both groups. The PBMC from COL+ calves stimulated with ConA secreted a larger quantity of IL-17 week 2 (COL+=2060.0pg/mL and COL-=0.0pg/mL, P=0.00). PBMC from COL+ calves stimulated with killed S. aureus whole cell antigen (P=0.05) and killed E. coli whole cell antigen (P=0.05) also secreted higher levels of IL17 than COL- calves at week 4. Clear production of IL17 was observed in PBML from COL+ calves at week 2, but the difference was not statistical different between groups. In conclusion, calves fed fresh and frozen colostrum showed no difference in cells subset profile overall. The increased percentage of leukocytes expressing the memory CD45RO+ or CD14MHCII+ over the course of the experiment indicated a maturation of the adaptive immune response after natural exposure to pathogens in the environment of the calf. The enhanced IL17 secretion by COL+ calves indicated that viable maternal cells modulated T-cell Th17 production that was primed by bacterial antigens. This mechanism could be responsible for quick and efficient activation of neutrophils for bacterial clearance. The differences in cytokine production observed between groups may help to explain the different clinical pictures observed for calves COL+ and COL- calves.

• Calves colostrum immune transfer cytokines bezerras colostro imunidade

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Novo S.M.F., Costa J.F.R., Baccili C.C., Sobreira N.M., Maia M.A., Leite S.B.P., Hurley D.J. & Gomes V. 2017. Specific immune response in neonate Holstein heifer calves fed fresh or frozen colostrum. [Resposta imune específica em bezerras holandesas recém-nascidas alimentadas com colostro fresco ou congelado.] Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1385-1394. Departamento de Medicina Interna, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, Butantã, São Paulo, SP 05508-270. E-mail: viviani.gomes@usp.br O objetivo desta pesquisa foi avaliar a influência das células do colostro no desenvolvimento imune em bezerras leiteiras durante os primeiros 28 dias de vida. Os animais foram distribuídas em 2 grupos: COL+ (n=9) recebeu colostro fresco de suas próprias mães; e COL- (n=10) recebeu pool de colostro congelado sem células viáveis oriundo de vacas doadoras. Estas bezerras foram avaliadas antes da ingestão do colostro (D0); às 48 horas (D2) e semanalmente entre o D7 e D28. O desenvolvimento da imunidade foi avaliada pela fenotipagem das subpopulações celulares do sangue e produção de citocinas pelas células mononucleares sanguíneas após 72 horas de estimulação com concanavalina A (ConA), Staphylococcus aureus (S. aureus) e Escherichia coli (E. coli) inativadas. O histórico clínico das bezerras foi marcado por elevada frequência de diarreias em ambos os grupos. Entretanto, COL- apresentou maior intensidade de diarreia (escore de fezes ~ 3 de 4) e maior temperatura retal no D7 do que as bezerras COL+. Além disso, broncopneumonia (n=1) e inflamações umbilicais foram diagnosticadas apenas nas bezerras COL-. O grupo COL- apresentou menor concentração de ferro sérico e maior número de linfócitos no D7 do que o grupo COL+. COL- também apresentou maior frequência de anemias que o grupo COL+ no D21 e D28. Em geral, a fração das subpopulações celulares foram semelhantes entre os dois grupos ao longo do tempo estudado, exceto na semana 1, onde as bezerras COL- apresentaram maior proporção de CD45RO+ (P=0.07). Observou-se um constante aumento de CD45RO+ com declínio concomitante de CD45RO- ao longo do estudo, indicando o desenvolvimento da resposta imune. A proporção de células CD14MHCII+ aumentou de acordo com a idade (P≤0.05). As medianas das citocinas produzidas a partir do PBMC não estimuladas apresentaram valores abaixo do nível de detecção em ambos os grupos. O PBMC do COL+ estimulado com ConA secretou elevada concentração de IL17 na semana 2 (COL+=2060.0pg/mL e COL-=0.0pg/ml, P=0.00). PBMC do COL+ estimuladas com S. aureus inativado (P=0.05) e E. coli inativada (P=0.05) secretaram níveis mais elevados de IL17 que as bezerras COL- na semana 4. Outros picos de IL17 foram observados no COL+ na semana 2, porém não foi possível detectar diferenças estatísticas entre os grupos. Conclui-se que as bezerras alimentadas com colostro fresco e congelado apresentaram perfil similar entre as proporções das subpopulações celulares. O aumento de células expressando os marcadores de memória CD45RO+ e CD14MHCII+ demonstram, ao longo do experimento, o amadurecimento do sistema imune específico das bezerras após estimulação natural por patógenos após o nascimento. A maior secreção de IL17 pelas células das bezerras COL+ indica que as células maternas podem modular resposta imune Th17 direcionada aos antígenos bacterianos. Este mecanismo poderia ser responsável pela rápida e eficiente quimiotaxia de neutrófilos e eliminação dos microrganismos bacterianos. Os diferentes perfis de citocinas podem ser responsáveis pelos diferentes históricos clínicos relatados para as bezerras COL+ e COL-.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Krabbe A.A., Gonçalves M.A., Silveira C.S., Morais R.M., Quevedo L.S., Ribeiro P.V.R. & Anjos B.L. 2017. [Epidemiological, clinical and pathological aspects and early diagnosis of bovine seneciosis in the Western region of Rio Grande do Sul, Brazil.] Aspectos epidemiológicos, clínico-patológicos e diagnóstico precoce da seneciose bovina no Oeste do Rio Grande do Sul. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1423-1429. Laboratório de Patologia Veterinária, Universidade Federal do Pampa, Uruguaiana, RS 97500-970, Brazil. E-mail: anjosbl@gmail.com The ingestion of Senecio spp. (ragwort) is perhaps the leading cause of death of cattle in central and southern Rio Grande do Sul, Brazil. Considering the limited information about this condition in the Western region of Rio Grande do Sul, Brazil, this paper describes main epidemiological clinical and pathological aspects of seneciosis in cattle. The assessments were made through questionnaires on 16 rural properties which had suspected cases of poisoning in cattle, from August 2011 to March 2014. During the visits were evaluated epidemiological aspects of poisoning and performed sample collection of Senecio plants for botanical identification, as well as collection of liver samples using transthoracic biopsy for confirmation of the poisoning. Senecio species most common on farms were S. brasiliensis and S. heterotrichius. From 88 cattle that failed to thrive on nine different farms, 69 animals (about 80%) were positive for chronic seneciosis with periportal fibrosis (78% of cases), megalocytosis (76% of cases) and with bile duct proliferation (68% of cases). Lesions were classified as mild, moderate or marked. The current study confirms the occurrence of this poisoning, even in cattle without evident clinical signs. The use of liver biopsy enabled the early diagnosis of poisoning and helped farmers carefully to dispose affectd cattle, as well as to recognize the real situation of poisoning in the herd and minimize economic losses.

• Poisonous plants hepatopathy pyrrolizidine alkaloids plant poisoning toxicoses plantas tóxicas hepatopatia alcaloides pirrolizidínicos intoxicação por planta

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Krabbe A.A., Gonçalves M.A., Silveira C.S., Morais R.M., Quevedo L.S., Ribeiro P.V.R. & Anjos B.L. 2017. [Epidemiological, clinical and pathological aspects and early diagnosis of bovine seneciosis in the Western region of Rio Grande do Sul, Brazil.] Aspectos epidemiológicos, clínico-patológicos e diagnóstico precoce da seneciose bovina no Oeste do Rio Grande do Sul. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1423-1429. Laboratório de Patologia Veterinária, Universidade Federal do Pampa, Uruguaiana, RS 97500-970, Brazil. E-mail: anjosbl@gmail.com A ingestão de Senecio spp. (maria-mole) é, possivelmente, a principal causa de morte de bovinos por agentes tóxicos nas regiões central e sul do Rio Grande do Sul. Ao considerar a limitação de informações acerca dessa condição no Oeste do Rio Grande do Sul, esse trabalho objetiva descrever os principais aspectos epidemiológicos e clínico-patológicos da seneciose em bovinos nessa região. O estudo foi realizado por meio da aplicação de questionários em 16 propriedades rurais de municípios da região que apresentaram casos suspeitos da intoxicação em bovinos, de agosto de 2011 a março de 2014. Durante as visitas as propriedades foram coletadas plantas do gênero Senecio para identificação botânica, bem como se procedeu a coleta de fragmentos de fígado através de biópsia transtorácica para confirmação da intoxicação. As espécies de Senecio mais frequentes nas propriedades foram S. brasiliensis e S. heterotrichius. De um total de 88 bovinos, de nove propriedades distintas, que apresentaram falha no ganho de peso, 69 animais (aproximadamente 80%) foram positivos para seneciose crônica por apresentarem lesões características da intoxicação, tais como fibrose periportal (78% dos casos), megalocitose (76% dos casos) e proliferação de ductos biliares (68% dos casos), classificadas entre discretas e acentuadas. O trabalho confirmou a ocorrência da doença, mesmo em bovinos sem sinais clínicos evidentes. Os resultados obtidos nessas avaliações foram fundamentais para orientar proprietários e técnicos quanto às principais características da doença e às formas de controle a serem adotadas. O emprego da biópsia hepática possibilitou o diagnóstico precoce da intoxicação e auxiliou os criadores quanto ao descarte mais criterioso de bovinos e a real situação da intoxicação no rebanho, minimizando as perdas econômicas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Maioli M.A. & Nogueira G.P. 2017. [Standardization of ELISA for the measurement of Insulin-Like Growth Factor I (IGF-I) in bovine plasm.] Padronização da quantificação do fator de crescimento semelhante a insulina I (IGF-I) em plasma bovino por ELISA. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1545-1553. Departamento de Apoio a Produção e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária de Araçatuba, Universidade Estadual Paulista, Unesp-Araçatuba, Rua Clóvis Pestana 793, Araçatuba, SP 16050-680, Brazil. E-mail: maioli_marcos@hotmail.com This study aimed to standardize an in house competitive enzyme-linked immunosorbent assay (cELISA) to determine plasma concentrations of total insulin-like growth factor I (IGF-I) for the bovine specie using the amplification biotin-streptavidin peroxidase system. The IGF-I was extracted from insulin-like growth factor binding proteins (IGFBPs) using the acidified glycine buffer followed by the pH neutralization with sodium hydroxide. The microplates were coated with anti-rabbit IgG, thereafter the measurements were carried out using two approaches, one with a prior incubation of samples with the anti-h-IGF-I antibody and another without previous incubation (simultaneous addition of IGF-I and biotinylated sample). The best results were obtained using the method without the prior incubation, using the following combination of reagents: microplates were coated with 0.25µg/well of anti-rabbit IgG, the specific antibody at a dilution of 1:250,000 and 0.06ng/well of biotinylated IGF-I. The in house methodology showed sensitivity of 50ng/ml, a correlation between doses of 0.945 when compared to a commercial method. In addition, after 33 assays (quantification of 1114 samples) the proposed methodology presented a good precision, with inter-assay variation coefficients of 12.94% and 20.71% for the high and low controls, respectively. Finally, we concluded that ELISA method for the quantification of total IGF-I using the system biotin-streptavidin-peroxidase amplification in a competitive assay is established and is presented as a useful tool for studies aimed at monitoring the IGF-I concentrations.

• Insulin-like growth factor I plasm hormone fator de crescimento insulina I plasma hormônio

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Maioli M.A. & Nogueira G.P. 2017. [Standardization of ELISA for the measurement of Insulin-Like Growth Factor I (IGF-I) in bovine plasm.] Padronização da quantificação do fator de crescimento semelhante a insulina I (IGF-I) em plasma bovino por ELISA. Pesquisa Veterinária Brasileira 37(12):1545-1553. Departamento de Apoio a Produção e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária de Araçatuba, Universidade Estadual Paulista, Unesp-Araçatuba, Rua Clóvis Pestana 793, Araçatuba, SP 16050-680, Brazil. E-mail: maioli_marcos@hotmail.com Esse estudo teve como objetivo a padronização de um ensaio imunoenzimático competitivo (cELISA) in house para a determinação das concentrações plasmáticas do fator de crescimento semelhante a insulina I (IGF-I) total para a espécie bovina, utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase. O IGF-I foi extraído das proteínas ligadoras do fator de crescimento semelhante a insulina I (IGFBP), utilizando o tampão glicina acidificado seguido de neutralização do pH com hidróxido de sódio. As microplacas foram sensibilizadas com anti IgG de coelho, e as dosagens realizadas utilizando duas abordagens, um método com incubação prévia das amostras com o anticorpo anti-h-IGF-I e outro sem incubação prévia (adição simultânea de IGF-I biotilinado e amostra). Os melhores resultados foram obtidos utilizando o método sem incubação prévia, com a sensibilização da placa com 0,25μg/poço de anti-IgG de coelho, o anticorpo específico na diluição 1:250.000 e 0,06ng/poço de IGF-I biotinilado. O ensaio in house apresentou um limite inferior de detecção de 50ng/mL, uma correlação de 0,945 entre doses quando comparado a uma metodologia comercial. Os coeficientes de variação inter-ensaio de 12,94% (345,8ng/mL) para os controles alto e 20,71% (131,6ng/mL) para o baixo. Dessa forma, conclui-se que a metodologia imunoenzimática para quantificação de IGF-I total utilizando o sistema de amplificação biotina-estreptavidina peroxidase em um ensaio competitivo está estabelecida e apresenta-se como uma ferramenta útil para estudos que visem o monitoramento das concentrações de IGF-I.