PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ramos C.A.N., Araújo F.R., Souza I.I.F., Guedes Jr D.S., Oliveira R.H.M., Farias T.A., Oliveira J.B., Alves L.C. & Faustino M.A.G. 2010. [Comparison between several antigens for diagnosis of Anaplasma marginale by ELISA.] Comparação entre diversos antígenos para o diagnóstico de Anaplasma marginale por ELISA. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(1):37-41. Laboratório de Doenças Parasitárias, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: carlosanramos@yahoo.com.br Bovine anaplasmosis is a major disease in tropical and subtropical regions of the world by determine economical loss due mortality and productive reduction. The disease is caused by Anaplasma marginale, an intraerythrocytic rickettsia whose control requires, besides an efficient vaccine, the accurate identification of chronically infected cattle. Although the existence of diverse methods of diagnosis of this rickettsia, the serological methods, in particular the enzyme immunosorbent assays (ELISAs), are the most used due to its versatility and practice. However, due to the high number of antigens currently available, an evaluation becomes necessary to define which antigens present the better performance in the diagnosis of anaplasmosis. Sera from cattle positive or negative to A. marginale by PCR, and sera from cattle proceeding from Brazil and Costa Rica, were tested by ELISAs based in recombinant MSP1a, MSP2, and MSP5, a pool of the three recombinant proteins, and initial body lisate antigen (CI). Using sera from A. marginale positive cattle by PCR, the highest sensitivity was shown by CI ELISA. Nevertheless, the highest specificity, with sera from negative cattle by PCR, was shown by recombinants ELISAs. The percentiles of positive cattle from Brazil and Costa Rica were higher with CI ELISA. Reasons for such differences were discussed.

• Anaplasma marginale

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ramos C.A.N., Araújo F.R., Souza I.I.F., Guedes Jr D.S., Oliveira R.H.M., Farias T.A., Oliveira J.B., Alves L.C. & Faustino M.A.G. 2010. [Comparison between several antigens for diagnosis of Anaplasma marginale by ELISA.] Comparação entre diversos antígenos para o diagnóstico de Anaplasma marginale por ELISA. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(1):37-41. Laboratório de Doenças Parasitárias, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: carlosanramos@yahoo.com.br Anaplasmose bovina é uma doença com grande importância nas regiões tropicais e subtropicais do mundo por determinar perdas econômicas devido à mortalidade e redução da produtividade. É causada por Anaplasma marginale, uma riquétsia intraeritrocítica obrigatória cujo controle requer, além de uma vacina eficiente, uma acurada identificação de bovinos cronicamente infectados. Apesar de existirem atualmente diversos métodos de diagnóstico dessa riquétsia, os métodos sorológicos, em particular o ensaio de imunoadsorção enzimática–ELISAs, são os mais utilizados devido à sua versatilidade e praticidade. No entanto, devido ao grande número de antígenos disponíveis, atualmente torna-se necessária uma avaliação para definir quais antígenos apresentam um melhor desempenho no diagnóstico da anaplasmose. Soros de bovinos positivos e negativos para A. marginale por PCR, e soros de animais provenientes do Brasil e Costa Rica, foram testados em ELISAs baseados em MSP1a, MSP2 e MSP5 recombinantes, um pool das três proteínas recombinantes, e antígeno de lisado de corpúsculos iniciais da riquétsia (CI). Utilizando soro de bovinos positivos para A. marginale por PCR, uma maior sensibilidade foi observada no ELISA CI. No entanto, uma maior especificidade, com soro de bovinos negativos a PCR, foi observada com os ELISAs recombinantes. O porcentual de bovinos positivos do Brasil e Costa Rica foi maior com ELISA CI. Razões para essas diferenças são discutidas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Weiss M., Vogel F.S.F., Martins M., Weiblen R., Roehe P.M., Franco A.C. & Flores E.F. 2010. Genital immunization of heifers with a glycoprotein E-deleted, recombinant bovine herpesvirus 1 strain confers protection upon challenge with a virulent isolate. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(1):42-50. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Federal de Santa Maria, 97105-900 Santa Maria, RS, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com Venereal infection of seronegative heifers and cows with bovine herpesvirus type 1.2 (BoHV-1.2) frequently results in vulvovaginitis and transient infertility. Parenteral immunization with inactivated or modified live BoHV-1 vaccines often fails in conferring protection upon genital challenge. We herein report an evaluation of the immune response and protection conferred by genital vaccination of heifers with a glycoprotein E-deleted recombinant virus (SV265gE-). A group of six seronegative heifers was vaccinated with SV265gE- (0,2mL containing 106.9TCID50) in the vulva submucosa (group IV); four heifers were vaccinated intramuscularly (group IM, 1mL containing 107.6TCID50) and four heifers remained as non-vaccinated controls. Heifers vaccinated IV developed mild, transient local edema and hyperemia and shed low amounts of virus for a few days after vaccination, yet a sentinel heifer maintained in close contact did not seroconvert. Attempts to reactivate the vaccine virus in two IV vaccinated heifers by intravenous administration of dexamethasone (0.5mg/kg) at day 70 pv failed since no virus shedding, recrudescence of genital signs or seroconversion were observed. At day 70 pv, all vaccinated and control heifers were challenged by genital inoculation of a highly virulent BoHV-1.2 isolate (SV-56/90, 107.1TCID50/animal). After challenge, virus shedding was detected in genital secretions of control animals for 8.2 days (8-9); in the IM group for 6.2 days (4-8 days) and during 5.2 days (5-6 days) in the IV group. Control non-vaccinated heifers developed moderate (2/4) or severe (2/4) vulvovaginitis lasting 9 to 13 days (x: 10.7 days). The disease was characterized by vulvar edema, vulvo-vestibular congestion, vesicles progressing to coalescence and erosions, fibrino-necrotic plaques and fibrinopurulent exudate. IM vaccinated heifers developed mild (1/3) or moderate (3/4) genital lesions, lasting 10 to 12 days (x: 10.7 days); and IV vaccinated heifers developed mild and transient vulvovaginitis (3/4) or mild to moderate genital lesions (1/4). In the IV group, the clinical signs lasted 4 to 8 days (x: 5.5 days). Clinical examination of the animals after challenge revealed that vaccination by both routes conferred some degree of protection, yet IV vaccination was clearly more effective in reducing the severity and duration of clinical disease. Furthermore, IV vaccination reduced the period of virus shedding in comparison with both groups. Taken together, these results demonstrate that SV265gE- is sufficiently attenuated upon IV vaccination in a low-titer dosis, is not readily reactivated after corticosteroid treatment and lastly, and more importantly, confers local protection upon challenge with a high titer of a virulent heterologous BoHV-1 isolate. Therefore, the use of this recombinant for genital immunization may be considered for prevention of BoHV-1-associated genital disease in the field.

• Bovine herpesvirus BoHV-1.2 vulvovaginitis

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Weiss M., Vogel F.S.F., Martins M., Weiblen R., Roehe P.M., Franco A.C. & Flores E.F. 2010. Genital immunization of heifers with a glycoprotein E-deleted, recombinant bovine herpesvirus 1 strain confers protection upon challenge with a virulent isolate. [Imunização genital de bezerras com uma cepa recombinante do herpesvírus bovino tipo 1 defectiva na glicoproteína E confere proteção frente a desafio com um isolado virulento.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(1):42-50. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Federal de Santa Maria, 97105-900 Santa Maria, RS, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com A infecção genital de novilhas ou vacas soronegativas pelo herpesvírus bovino tipo 1.2 (BoHV-1.2) pode resultar em vulvovaginite e infertilidade temporária. As vacinas atenuadas ou inativadas administradas pela via parenteral freqüentemente conferem proteção incompleta frente a desafio pela via genital. Este estudo relata uma avaliação da resposta imunológica e proteção conferida pela vacinação genital de bezerras soronegativas com uma cepa recombinante do BoHV-1 defectiva na glicoproteína E (SV265gE-). Um grupo de seis bezerras foi vacinado com a cepa SV265gE- (0,2mL contendo 106,9TCID50) na submucosa da vulva (grupo IV); quatro bezerras foram vacinadas pela via intramuscular (IM; dose 107,6TCID50) e quatro bezerras permaneceram como controles não-vacinadas. As bezerras vacinadas pela via IV apresentaram edema e hiperemia leve e transitório na vulva e excretaram vírus em títulos baixos por alguns dias após a vacinação, porém uma bezerra soronegativa mantida em contato não soroconverteu. Administração de dexametasona pela via intravenosa no dia 70pv (0,5mg/kg) em duas bezerras vacinadas pela via IV não resultou em excreção viral, recrudescência clínica ou soroconversão. No dia 70pv, as bezerras vacinadas e as controle foram desafiadas pela inoculação genital da cepa de BoHV-1.2 altamente virulenta SV-56/90 (107.1TCID50/animal). Após o desafio, excreção viral nas secreções genitais das bezerras controle foi detectada por 8,2 dias (8-9); no grupo IM durante 6,2 dias (4-8 dias) e durante 5,2 dias (5-6) nas bezerras do grupo IN. As bezerras do grupo controle desenvolveram vulvo-vaginite moderada (2/4) a severa (2/4) que duraram entre 9 e 13 dias (x: 10,7 dias). A doença se caracterizou por edema vulvar, congestão vulvo-vestibular, formação de vesículas/pústulas que coalesceram, erosões, placas fibrino-necróticas e exsudato fibrino-purulento. As bezerras do grupo IM desenvolveram lesões genitais leves (1/3) a moderadas (3/4), com duração de 10 a 12 dias (x: 10,7 dias). No grupo IV, as bezerras desenvolveram vulvovaginite leve e transitória (3/4) ou lesões moderadas (1/4), com duração de 4 a 8 dias (x: 5,5 dias). O exame clínico desses animais após o desafio demonstrou que a vacinação, independentemente da via de administração, conferiu proteção e que, a vacinação IV mostrou-se mais efetiva na redução da severidade e duração da doença clínica. A vacinação IV também determinou uma redução significativa no período de excreção viral após desafio, em comparação com os grupos controle e IM. Esses resultados demonstram que a cepa SV265gE- administrada pela via IV confere proteção satisfatória frente a desafio local com um isolado heterólogo de BoHV-1 altamente virulento. Além disso, a cepa vacinal é atenuada para vacinação IV em baixos títulos e não é reativada facilmente após administração de dexametasona. Assim, a utilização da cepa recombinante para imunização genital pode se constituir em alternativa para prevenir a infecção e doença reprodutiva associada com o BoHV-1.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Cantón G., Campero C., Villa M. & Odriozola E. 2010. Acute and chronic nervous signs in cattle associated with Phalaris angusta poisoning in Argentina. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(1):63-66. INTA EEA Balcarce, CC 276, (7620) Balcarce, Argentina. E-mail: gcanton@balcarce.inta.gov.ar Phalaris angusta is a South American natural grass that produces poisoning in sheep and cattle in Argentina and Brazil. Phalaris spp. can produce unrelated forms of poisoning in ruminants, acute and chronic syndromes. The objective of this paper was to describe an outbreak of acute and chronic Phalaris nervous syndrome in 53 of 980 fattening steers and heifers in a farm of Buenos Aires province. On September of 2006 the animals developed nervous signs and died after 3-5 days. The herd was removed to a phalaris-free pasture. Three months later (on December) 15 new clinical cases developed in the herd. Necropsy performed in one affected calf showed neither grossly nor microscopic changes. Microscopically, there were no major alterations in tissues. Nervous signs had been described in some field cases where neither pigment deposition nor axonal degeneration could be detected. Clinical findings displayed by affected cattle after consumption of Phalaris angusta pastures resemble those observed by other authors in Phalaris staggers. This is the first report in Argentina where both syndromes were seen in the same herd.

• Phalaris angusta poisonous plants plant poisining

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Cantón G., Campero C., Villa M. & Odriozola E. 2010. Acute and chronic nervous signs in cattle associated with Phalaris angusta poisoning in Argentina. [Sinais nervosos agudos e crônicos em bovinos na Argentina associados à intoxicação por Phalaris angusta.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(1):63-66. INTA EEA Balcarce, CC 276, (7620) Balcarce, Argentina. E-mail: gcanton@balcarce.inta.gov.ar Phalaris angusta é uma gramínea originária da América do Sul, que causa intoxicação em ovinos e bovinos na Argentina e Brasil. A intoxicação pode ocasionar quadros nervosos agudos ou crônicos, independentes um do outro. O objetivo deste trabalho é descrever ambos os quadros (agudo e crônico) da intoxicação por Phalaris em um rebanho de 980 garrotes em engorda na província de Buenos Aires. Em setembro de 2006, 53 animais desenvolveram sinais nervosos e morreram após um curso clínico de 3-5 dias. O rebanho foi trocado para uma pastagem sem Phalaris. Em dezembro, alguns animais apresentaram diarréia, depressão e perda progressiva de peso. Quando eram forçados a se movimentar, os sinais progrediam para incoordenação dos membros torácicos, impossibilidade de se manter em pé e decúbito lateral. Havia perda de peso e os animais morriam após um curso clínico de 5-7 dias. Não foram observadas lesões macroscópicas nem histológicas nos animais com as duas formas da doença. Os sinais clínicos observados são semelhantes aos observados em outros surtos de intoxicação aguda ou crônica por Phalaris angusta.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Cardinal S.G., Aniz A.C., Santos B.S., Carvalho N.M. & Lemos R.A.A. 2010. [Perinatal lesions caused in lambs by feeding Tetrapterys multiglandulosa (Malpighiaceae) to sheep at different stages of their pregnancy.] Lesões perinatais em ovinos causadas pela ingestão de Tetrapterys multiglandulosa (Malpighiaceae) em diferentes estágios de gestação. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(1):73-78. Departamento de Medicina Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Av. Filinto Müller s/n, Cidade Universitária, Campo Grande, MS 79070-900, Brazil. E-mail: eqrural@nin.ufms.br In order to verify the effects of non-lethal doses of Tetrapterys multiglandulosa on ovine fetuses, experimental poisoning in sheep at different days of pregnancy was performed. Green leaves of shooting plants were administered to 9 pregnant ewes divided into three experimental groups. Sheep from Group 1 received four doses of 5g/kg of fresh leaves for 4 days; those from Group 2 received 10g/kg for 2 days; Group 3 sheep received a dose of 20g/kg for one day, and sheep from Group 4 did not receive the plant and served as negative controls. To check the plant toxicity, a male sheep (positive control) received 5g/kg until the onset of clinical signs. No signs of poisoning were observed in pregnant ewes; three lambs died 1-5 days after birth, and a fourth lamb died within 3 months after have been born. The positive control died after 38 days of daily consumption of the plant, presenting tachypnea, tachycardia, drowsiness, incoordination, weakness and sudden death. All four dead lambs and the positive control sheep were necropsied. The gross lesions were whitish areas in the myocardium, increased lobular pattern of the liver, dark red lungs, metabolization of pericardial fat, and ruminal distention with free gas. Histological findings were cardiac fibrosis, cardiomyocyte necrosis, pulmonary congestion and edema, and spongy degeneration in subcortical cerebral white matter. Tetrapterys multiglandulosa resulted toxic for ovine fetuses at doses that were not suffient to induce clinical signs in the pregnant ewes, demonstrating that the poisoning may be a cause of death of lambs soon after birth, even several months after the ingestion of the plant has been discontinued.

• Poisonous plants Tetrapterys multiglandulosa Malpighiaceae planta poisoning

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Cardinal S.G., Aniz A.C., Santos B.S., Carvalho N.M. & Lemos R.A.A. 2010. [Perinatal lesions caused in lambs by feeding Tetrapterys multiglandulosa (Malpighiaceae) to sheep at different stages of their pregnancy.] Lesões perinatais em ovinos causadas pela ingestão de Tetrapterys multiglandulosa (Malpighiaceae) em diferentes estágios de gestação. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(1):73-78. Departamento de Medicina Veterinária, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Av. Filinto Müller s/n, Cidade Universitária, Campo Grande, MS 79070-900, Brazil. E-mail: eqrural@nin.ufms.br Foi realizada a intoxicação experimental em ovelhas em diferentes dias de gestação, 12 ovelhas foram dividas em quatro grupos. As ovelhas do Grupo 1 consumiram quatro doses de 5g/kg de folhas verdes durante quatro dias; ovinos do Grupo 2 consumiram duas doses de 10g/kg durante dois dias, o Grupo 3 consumiu uma dose de 20g/kg em um único dia e os ovinos do Grupo 4 não consumiram a planta (controle-negativo). Para testar a toxicidade da planta um ovino macho consumiu 5g/kg até manifestação dos sintomas. Não foram observados sinais clínicos da intoxicação nas ovelhas, mas três cordeiros tiveram morte perinatal, e um cordeiro morreu com três meses de idade; o ovino controle-positivo morreu após 38 dias de consumo diário da planta e os sinais clínicos foram taquipnéia, taquicardia, sonolência, incoordenação e fraqueza. Todos os quatro cordeiros e o ovino controle-positivo foram necropsiados e os achados de necropsia foram áreas esbranquiçadas no miocárdio, evidenciação do padrão lobular do fígado, pulmão vermelho enegrecido e rúmen acentuadamente distendido com presença de gases livres. Os achados histopatológicos foram fibrose cardíaca, necrose dos cardiomiócitos, congestão e edema pulmonar, congestão hepática centrolobular e degeneração esponjosa na região subcortical do encéfalo. Tetrapterys multiglandulosa demonstrou ser tóxica para os fetos ovinos em dosagens que não foram suficientes para induzir sinais clínicos nas ovelhas prenhes, e que a intoxicação pode ocorrer com morte de cordeiros logo após o parto, mesmo após meses de ter cessada a ingestão da planta.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Fonteque J.H., Kohayagawa A., Mattoso C.R.S., Lopes S.T.A., Paes P.R.O., Cassetari M.L. & Langoni H. 2010. [Electrophoretic profile and concentration of immunoglobulins G (IgG) in blood serum of Saanen goats with experimental mastitis induced by Staphylococcus aureus suplemented with vitamin E.] Perfil eletroforético e concentração de imunoglobulinas G (IgG) do soro sanguíneo de cabras Saanen com mastite experimental induzida por Staphylococcus aureus suplementadas com vitamina E. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(1):79-86. Departamento de Medicina Veterinária, Hospital de Clínica Veterinária, Centro de Ciências Agroveterinárias, Universidade do Es-tado de Santa Catarina, Lages, SC 88520-000, Brazil. E-mail: fonteque@cav.udesc.br The objective was to evaluate the electrophoretic profile of proteins and serum concentration of immunoglobulin G (IgG) in Saanen goats with mastitis experimentally induced by Staphylococcus aureus (dl-a-tocopherol acetated). 14 adult goats, (supplemented with vitamin E DL-a-tocopherol) primiparous pregnant, seronegative for caprine arthritis encephalitis (CAEV), clinically healthy, were divided into two groups of seven animals: Not supplemented group (G1) and group supplemented with 2.000 UI of DL-a-tocopherol (G2 Vit E), by intramuscular injection on the day of the parturition and seven days later. At the 9th day after delivery 300 UFCs of the S. aureus ATCC 225923 strain were inoculated into the left half of the mammary gland of each animal. The mastitis was determined through collection of milk samples for evidence of infection by means of bacteriological examination, somatic cell count (SCC) and California Mastitis Test (CMT). Then samples were collected after 12, 24, 48 and 72 hours, antimicrobial intra-mammary gland treatment was initiated, with new evaluation 48 hours after treatment. The electrophoretic profile of serum protein of the goats, showed five fractions, as follows: albumin and globulin (a, b1, b2 e g-globulin). There was an increase in the production of g-globulin and lower production of b2-globulin fraction 12 hours after infection, and faster decrease in the supplemented group, showing the influence of vitamin E in the production of acute phase proteins. There was no influence of vitamin E in the serum concentration of immunoglobulin G (IgG) in supplemented animals. The supplementation with vitamin E increased the concentration of immunoglobulin and decreased the production of acute phase proteins, probably the antioxidant effect minimizing the tissue injury during the inflammatory process in the mammary gland.

• Staphylococcus aureus mastitis vitamin E

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Fonteque J.H., Kohayagawa A., Mattoso C.R.S., Lopes S.T.A., Paes P.R.O., Cassetari M.L. & Langoni H. 2010. [Electrophoretic profile and concentration of immunoglobulins G (IgG) in blood serum of Saanen goats with experimental mastitis induced by Staphylococcus aureus suplemented with vitamin E.] Perfil eletroforético e concentração de imunoglobulinas G (IgG) do soro sanguíneo de cabras Saanen com mastite experimental induzida por Staphylococcus aureus suplementadas com vitamina E. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(1):79-86. Departamento de Medicina Veterinária, Hospital de Clínica Veterinária, Centro de Ciências Agroveterinárias, Universidade do Es-tado de Santa Catarina, Lages, SC 88520-000, Brazil. E-mail: fonteque@cav.udesc.br O objetivo do trabalho foi avaliar o perfil eletroforético das proteínas e a concentração sérica de imunoglobulina G (IgG) em cabras da raça Saanen com mastite induzida experimentalmente por Staphylococcus aureus e suplementadas com vitamina E (acetato de dl-a-tocoferol). Utilizaram-se 14 cabras adultas, gestantes, primíparas, com sorologia negativa para Artrite Encefalite Caprina (CAEV), clinicamente sadias, divididas em dois grupos experimentais de sete animais. Grupo não suplementado (G1) e grupo suplementado com 2.000 U.I. de acetato de dl-a-tocoferol (G2 Vit E) via intramuscular no dia do parto e sete dias após o parto. Ao nono dia do pós-parto foram inoculados 300 UFCs da cepa de S. aureus ATCC 225923, na metade esquerda da glândula mamária de cada animal. A mastite foi determinada pela colheita das amostras de leite para a comprovação da infecção, por meio de exames bacteriológicos, contagem de células somáticas (CCS) e California Mastitis Test (CMT), a partir deste momento foram efetuadas colheitas às 12, 24, 48 e 72 horas, sendo posteriormente instituído o tratamento intramamário com antimicrobiano e nova avaliação 48 horas após o tratamento. O perfil eletroforético em gel de agarose das proteínas séricas das cabras, apresentaram cinco frações, sendo: albumina e globulinas (a, b1, b2 e g). Houve aumento na produção de g-globulina e menor produção da fração b2-globulina 12 horas após a infecção, com os valores reduzindo mais rapidamente no grupo suplementado, evidenciando a influência da vitamina E na diminuição da produção das proteínas de fase aguda. Não houve influência da vitamina E na concentração sérica de imunoglobulina G (IgG) nos animais suplementados. A suplementação com vitamina E aumentou a concentração de imunoglobulinas e diminuiu a produção de proteínas de fase aguda, provavelmente pelo efeito antioxidante minimizando a lesão tecidual durante o processo inflamatório localizado na glândula mamária.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Silva W.B., Machado C., Goldberg D.W., Moreira S.B., Silva L.C.C.P., Freire I.M.A., Maciel P.O. & Almosny N.R. 2009. [Assessment of blood inflammatory response in BCG stimulated rattlesnakes (Crotalus durissus Linnaeus, 1758).] Avaliação da resposta hematológica em cascavéis (Crotalus durissus Linnaeus, 1758) inoculadas com BCG. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(12):985-992. Programa de Pós-Graduação em Clínica e Reprodução Animal, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal Fluminense, Rua Vital Brazil Filho 64, Niterói, RJ 24230-360, Brazil. E-mail: wellban@yahoo.com.br The high demand for anti-venom production in response to the increased number of cases of snakebite envenomation highlights the importance of raising and breeding venomous snakes in captivity. Knowledge of types of venoms and anti-venoms is of great interest to public health. The maintenance of venomous serpents in captivity started in the early twentieth century, but still nowadays it is a challenge to manage and prevent diseases in captive fauna. Hematology is commonly used for general health assessment and illness detection. However, data on serpent blood analysis are still scarce. Alterations in hematological parameters were experimentally induced in rattlesnakes by the inoculation of BCG. Based on this, hemograms can be used as a health auxiliary diagnosis method for bacterial diseases in this species. In this study, blood samples were taken from 10 healthy specimens of rattlesnakes (Crotalus durissus) born and bred in captivity in the Herpetological Division of Vital Brazil Institute. Animals were divided into two groups (group 1 and 2) with similar live weight and sex proportion, and were then inoculated subcutaneously with BCG (Bacillus Calmette-Guérin). Blood samples were taken before and after inoculation at three experimental times (days 3, 5 and 7 for group 1 and days 11, 17 and 21 for group 2). Hematological analysis was performed through semi-direct technique, blood samples were diluted in Natt and Herrick solution and smears were stained by Giemsa. Serpents from group 1 developed discrete anemia due to the inflammatory syndrome, and showed significant decrease of MCH and MCHC. Granulocytes were characterized by the presence of rough granules. The azurophils varied in shape and size and showed large amount of cytoplasmic vacuoles. The thrombocytopenia observed in group 2 suggests that these cells participate in the inflammatory process. A single individual from group 1 showed granulocytosis and a few animals showed a discrete azurophilia. In general, BCG inoculation unleashes hematological inflammatory responses characterized by the presence of thrombocytes, azurophils and granulocytes cells.

• Cascavel Crotalus durissus

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Silva W.B., Machado C., Goldberg D.W., Moreira S.B., Silva L.C.C.P., Freire I.M.A., Maciel P.O. & Almosny N.R. 2009. [Assessment of blood inflammatory response in BCG stimulated rattlesnakes (Crotalus durissus Linnaeus, 1758).] Avaliação da resposta hematológica em cascavéis (Crotalus durissus Linnaeus, 1758) inoculadas com BCG. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(12):985-992. Programa de Pós-Graduação em Clínica e Reprodução Animal, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal Fluminense, Rua Vital Brazil Filho 64, Niterói, RJ 24230-360, Brazil. E-mail: wellban@yahoo.com.br A criação de serpentes peçonhentas em cativeiro para produção de soros antipeçonhas possui crescente importância para a saúde pública devido ao aumento do número de notificações de acidentes ofídicos a cada ano no Brasil. Iniciado no século XX, ainda hoje essa atividade apresenta alguns desafios como a instalação de doenças no plantel. O hemograma é um exame de triagem clínica que auxilia no diagnóstico de diversas moléstias que acometem diferentes espécies de animais, no entanto ainda pouco estudado em serpentes. A caracterização das alterações hematológicas em cascavéis inoculadas experimentalmente com BCG pode servir de base na utilização deste exame no auxílio ao diagnóstico de infecções bacterianas na espécie. Dessa forma, foram realizados exames hematológicos em 10 serpentes da espécie Crotalus durissus pertencentes ao plantel da Divisão de Herpetologia do Instituto Vital Brazil. Os animais foram divididos em dois grupos (Grupos 1 e 2), homogêneos entre si em relação ao peso e proporção sexual. Os dois grupos foram inoculados com BCG e submetidos à coleta de sangue antes da inoculação e em três momentos pós-inoculação (3º, 5º, e 7º dias para o Grupo 1 e 11º, 17º e 21º dias para o Grupo 2). O hemograma foi realizado por método semidireto pela utilização de líquido de Natt e Herrick e as lâminas foram coradas pelo Giemsa. Observou-se anemia discreta, com redução dos valores de concentração de hemoglobina corpuscular média e da hemoglobina globular média no Grupo 1 que foi relacionada à doença inflamatória. A trombocitopenia observada no Grupo 2 sugeriu a atuação deste tipo celular em processos inflamatórios. Um único animal do Grupo 1 apresentou granulocitose e alguns animais apresentaram discreta azurofilia. Observaram-se alterações morfológicas nos leucócitos. Os granulócitos apresentaram granulações grosseiras e os azurófilos apresentaram aumento de tamanho e grandes vacúolos. De forma geral, a inoculação de BCG em cascavéis desencadeia respostas inflamatórias hematológicas caracterizadas pela participação de trombócitos, granulócitos e azurófilos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ferreira Junior R.S., Siqueira A.K., Campagner M.V., Salerno T., Soares T.C.S., Lucheis S.B., Paes A.C. & Barraviera B. 2009. Comparison of wildlife and captivity rattlesnakes (Crotalus durissus terrificus) microbiota. [Comparação da microbiota de cascavéis (Crotalus durissus terrificus) de vida-livre e cativeiro.]Pesquisa Veterinária Brasileira 29(12):999-1003. Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos, Universidade Estadual Paulista, Fazenda Experimental Lageado, Rua José Barbosa de Barros 1780, Botucatu, SP 18610-307, Brazil. E-mail: rseabra@cevap.org.br The study evaluated and compared the aerobic microbiota from the oral cavity, cloaca and venom of Crotalus durissus terrificus snakes, recently caught from the wild and kept under quarantine (WQ), individual captivity (IC) and collective captivity (CC). Antimicrobial drug effectiveness on isolated agents also was assayed. From group I, II and III were isolated, respectively, 29 (63.04%), 38 (90.48%) and 21 (42.86%) microorganisms from the cloaca; 15 (32.61%), 3 (7.14%) and 25 (51.02%) microorganisms from the oral cavity; and, 2 (4.35%), 1 (2.38%) and 3 (6.12%) microorganisms from venom. The most frequent bacteria were Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris and Morganella morganii, with sensitivity to amikacin, gentamicin, norfloxacin, sulfazotrin and tobramycin. Snakes kept in semi-open captivity exhibited the fewest microorganisms in oral cavities, perhaps due to the environment in captivity, with different temperature gradients, running water, absence of daily handling, circulating air, possibility of moving around, daily cleaning, and sunlight access.

• Cascavel Crotalus durissus terrificus

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ferreira Junior R.S., Siqueira A.K., Campagner M.V., Salerno T., Soares T.C.S., Lucheis S.B., Paes A.C. & Barraviera B. 2009. Comparison of wildlife and captivity rattlesnakes (Crotalus durissus terrificus) microbiota. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(12):999-1003. Centro de Estudos de Venenos e Animais Peçonhentos, Universidade Estadual Paulista, Fazenda Experimental Lageado, Rua José Barbosa de Barros 1780, Botucatu, SP 18610-307, Brazil. E-mail: rseabra@cevap.org.br Este estudo avaliou e comparou a microflora aeróbica da cavidade oral, cloaca e veneno de serpentes Crotalus durissus terrificus recém-capturadas da natureza e mantidas sob quarentena (WQ), mantidas em cativeiro coletivo (CC) e em cativeiro individual (IC). A eficácia de drogas antimicrobianas de agentes isolados foi também avaliada. Foram isolados microorganismos dos grupos I, II e III respectivamente: 29 (63.04%), 38 (90.48%) e 21 (42.86%) da cloaca; 15 (32.61%), 3 (7.14%) e 25 (51.02%) da cavidade oral, e finalmente 2 (4.35%), 1 (2.38%) e 3 (6.12%) do veneno. As bactérias mais frequentes foram Pseudomonas aeruginosa, Proteus vulgaris e Morganella morganii, com sensibilidade para amikacina, gentamicina, norfloxacina, sulfazotrina e tobramicina. Serpentes mantidas no cativeiro semi-aberto mostraram menor número de agentes infecciosos em cavidade oral, talvez devido ao ambiente de cativeiro com diferentes gradientes de temperatura, água corrente, ausência de manejo diário, ampla circulação de ar, possibilidade de movimentação pelos animais, limpeza diária e acesso ao Sol.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Asano K.M, Souza S.P., Silva S.O.S., Richtzenhain L.J. & Brandão P.E. 2009. Rapid detection of bovine coronavirus by a semi-nested RT-PCR. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(11):869-873. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: karen.asano@gmail.com Bovine coronavirus (BCoV) is a member of the group 2 of the Coronavirus (Nidovirales: Coronaviridae) and the causative agent of enteritis in both calves and adult bovine, as well as respiratory disease in calves. The present study aimed to develop a semi-nested RT-PCR for the detection of BCoV based on representative up-to-date sequences of the nucleocapsid gene, a conserved region of coronavirus genome. Three primers were designed, the first round with a 463bp and the second (semi-nested) with a 306bp predicted fragment. The analytical sensitivity was determined by 10-fold serial dilutions of the BCoV Kakegawa strain (HA titre: 256) in DEPC treated ultra-pure water, in fetal bovine serum (FBS) and in a BCoV-free fecal suspension, when positive results were found up to the 10-2, 10-3 and 10-7 dilutions, respectively, which suggests that the total amount of RNA in the sample influence the precipitation of pellets by the method of extraction used. When fecal samples was used, a large quantity of total RNA serves as carrier of BCoV RNA, demonstrating a high analytical sensitivity and lack of possible substances inhibiting the PCR. The final semi-nested RT-PCR protocol was applied to 25 fecal samples from adult cows, previously tested by a nested RT-PCR RdRp used as a reference test, resulting in 20 and 17 positives for the first and second tests, respectively, and a substantial agreement was found by kappa statistics (0.694). The high sensitivity and specificity of the new proposed method and the fact that primers were designed based on current BCoV sequences give basis to a more accurate diagnosis of BCoV-caused diseases, as well as to further insights on protocols for the detection of other Coronavirus representatives of both Animal and Public Health importance.

• Coronavírus bovino diarréia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Asano K.M, Souza S.P., Silva S.O.S., Richtzenhain L.J. & Brandão P.E. 2009. Rapid detection of bovine coronavirus by a semi-nested RT-PCR. [Detecção rápida do Coronavírus Bovino (BCoV) por meio de uma semi-nested RT-PCR.] Pesquisa Veterinária Brasileira 29(11):869-873. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Animal, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: karen.asano@gmail.com O Coronavírus bovino (BCoV) pertence ao grupo 2 do gênero Coronavirus (Nidovirales: Coronaviridae) e é agente causador de enterites tanto em bezerros como em bovinos adultos, bem como de doença respiratória em bezerros. O presente estudo teve por objetivo desenvolver uma semi-nested RT-PCR para a detecção do BCoV com base em seqüências representativas e recentes do gene do nucleocapsídeo, região conservada do genoma dos coronavírus. Três primers foram desenhados, a primeira amplificação com um fragmento esperado de 463pb e a segunda (semi-nested) com um fragmento esperado de 306pb. A sensibilidade analítica foi determinada pela diluição do BCoV cepa Kakegawa (título HA: 256) na base de 10 em água ultra-pura tratada com DEPC, em soro fetal bovino (SFB) e em uma suspensão fecal negativa para o BCoV, onde foram encontrados resultados positivos até a diluição de 10-2, 10-3 e 10-7, respectivamente. Este resultado sugere que a quantidade total de RNA na amostra influencia na precipitação dos pellets pelo método de extração utilizado. Quando se utiliza amostra fecal, a grande quantidade de RNA total funciona como carreadora do RNA do BCoV, demonstrando elevada sensibilidade analítica e ausência de possíveis substâncias inibidoras da PCR. O protocolo final da semi-nested RT-PCR foi aplicado a 25 amostras fecais de vacas adultas, previamente avaliadas por uma nested RT-PCR RdRp utilizada como teste de referência, resultando em 20 e 17 amostras positivas para o primeiro e segundo teste, respectivamente. Os resultados dos dois sistema de diagnóstico apresentaram concordância substancial (kappa: 0,694). A elevada sensibilidade e especificidade do novo método proposto e o fato de que os primers foram desenhados baseados em sequências atuais do BCoV, oferecem bases para o diagnóstico mais acurado de infecções causadas pelo BCoV, assim como para novas perspectivas em protocolos de detecção de outros Coronavírus de importância tanto em saninade animal quanto em saúde pública.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Silva B.C., Martins M.L., Jatobá A., Buglione Neto C.C., Vieira F.N., Pereira G.V., Jerônimo G.T., Seiffert W.Q. & Mouriño J.L.P. 2009. Hematological and immunological responses of Nile tilapia after polyvalent vaccine administration by different routes. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(11):874-880. Laboratório de Diagnóstico e Patologia em Aqüicultura, Departamento de Aqüicultura, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal de Santa Catarina, Rodovia Ademar Gonzaga 1346, Itacorubi, Florianópolis, SC 88034-001, Brazil. E-mail: bcs85@hotmail.com The efficacy of a polyvalent bacterin vaccine against Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeroginosa and Enterococcus durans administered by different routes in Nile tilapia was assessed by analyzing hematological and immunological parameters 7 and 21 days after vaccination. Treatments consisted of: non-vaccinated tilapia; tilapia vaccinated by intraperitoneal injection with 2x108 formalin-inactivated bacteria·mL-1; tilapia vaccinated orally with 2x107 formalin-inactivated bacteria·g-1, feed for 5 days; tilapia vaccinated by immersion bath in 2x107 formalin-inactivated bacteria·mL-1, for 20 minutes. Vaccinated fish groups presented higher hematocrit, number of erythrocytes and leukocytes than the non-vaccinated group. Serum agglutination titer of intraperitoneally vaccinated fish was higher on both evaluation periods for the three bacteria strains. Only on day 21 post-vaccination fish from the oral and immersion vaccination groups presented higher serum agglutination titer than the non-vaccinated fish for A. hidrophyla and E. durans. Serum antimicrobial activity in vaccinated fish was higher for P. aeroginosa and E. coli than in non-vaccinated fish on both evaluation periods. The different vaccine administration routes stimulated hematological and immunological responses in Nile tilapia 21 days post-vaccination, but intraperitoneal vaccination presented higher total number of leukocytes, lymphocytes and serum agglutination titer.

• Oreochromis niloticus

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Silva B.C., Martins M.L., Jatobá A., Buglione Neto C.C., Vieira F.N., Pereira G.V., Jerônimo G.T., Seiffert W.Q. & Mouriño J.L.P. 2009. Hematological and immunological responses of Nile tilapia after polyvalent vaccine administration by different routes. [Resposta hematológica e imunológica de tilápia do Nilo após administração de vacina polivalente por diferentes vias.] Pesquisa Veterinária Brasileira 29(11):874-880. Laboratório de Diagnóstico e Patologia em Aqüicultura, Departamento de Aqüicultura, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal de Santa Catarina, Rodovia Ademar Gonzaga 1346, Itacorubi, Florianópolis, SC 88034-001, Brazil. E-mail: bcs85@hotmail.com Este estudo avaliou a eficácia da administração de vacina polivalente (bacterina), contra Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeroginosa e Enterococcus durans, por diferentes vias de aplicação em tilápia do Nilo, analisando parâmetros hematológicos e imunológicos no 7º e 21º dia após vacinação. Os tratamentos consistiram de: tilápias não vacinadas; tilápias vacinadas via injeção intraperitoneal (i.p.) contendo 2x108 bactérias inativadas·mL-1; tilápias alimentadas com ração contendo vacina na proporção de 2x107 bactérias inativadas·g-1, durante 5 dias; tilápias vacinadas por banho de imersão em 2x107 bactérias inativadas·mL-1, durante 20 minutos. Os peixes vacinados apresentaram maior porcentagem de hematócrito, número de eritrócitos e leucócitos durante o período do experimento, em relação aos não vacinados. O título de aglutinação do soro dos peixes vacinados intraperitonealmente foi superior nos dois períodos de avaliação para todas as bactérias. Apenas no 21º dia os peixes vacinados oralmente e por imersão apresentaram título de aglutinação superior aos peixes não vacinados para A. hidrophyla e E. durans. O soro dos peixes vacinados apresentou maior atividade antimicrobiana para P. aeroginosa e E. coli, do que os peixes não vacinados, nos dois períodos. As diferentes vias de administração da vacina estimularam a resposta hematológica e imunológica da tilápia do Nilo após 21 dias de vacinadas, sendo que o número total de leucócitos, linfócitos, título aglutinante do soro dos vacinados i.p. foi maior do que os demais.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Langoni H., Sakiyama D.T.P., Guimarães F.F., Menozzi B.D. & Silva R.C. 2009. [Cytological and microbiological aspects of milk in farms with an organic system of production.] Aspectos citológicos e microbiológicos do leite em propriedades no sistema orgânico de produção. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(11):881-886. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-000. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br Nowadays, farmers have great interest in milk production within an organic system due to the consumers’ claim for natural products. The purpose of this paper was to study the cytological and microbiological quality of milk produced by four farms in the county of Botucatu, SP, which use organic system management. A total of 150 mammary gland milk samples were tested by CMT and Somatic Cell Count (SCC/mL milk), microbiological examination, and Colony Former Unit Count (CFU mesophile microrganisms/mL milk). From these individual milk samples, 66 (44.0%) were CMT positive. Corynebacterium bovis was isolated from 37.9% milk samples, Staphylococcus aureus from 18.2%, S. epidermidis from 15.2%, Streptococcus uberis from 3.0%, and S. dysgalactiae from 3.0%. Association of at least two different bacteria species was observed in 7.6% samples. In respect to the whole milk of each farm, the SCC/mL values were in normal limits on three of them (i.e. lower than 400x103), and considering the CFU/mL, on three farms high levels were observed (8,5x105; 1,5x106; 4,1x105). From the individual milk samples, contagious mastitis pathogens were isolated predominantly, but environmental microorganisms were detected from the whole milk, as Escherichia coli and Pseudomonas aeruginosa, probably due to contamination during and/or after milking. The results suggest that more than mastitis problems, the four farms studied have hygienic deficiencies, what strengthens the importance of sanitary education to achieve a better milk hygiene quality.

• Mastite

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Langoni H., Sakiyama D.T.P., Guimarães F.F., Menozzi B.D. & Silva R.C. 2009. [Cytological and microbiological aspects of milk in farms with an organic system of production.] Aspectos citológicos e microbiológicos do leite em propriedades no sistema orgânico de produção. Pesquisa Veterinária Brasileira 29(11):881-886. Departamento de Higiene Veterinária e Saúde Pública, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Estadual Paulista, Campus de Botucatu, Distrito de Rubião Júnior s/n, Botucatu, SP 18618-000. E-mail: hlangoni@fmvz.unesp.br A produção de leite no sistema orgânico tem despertado o interesse dos produtores rurais, pelo aumento de consumo de produtos naturais. Estudaram-se os aspectos citológicos e microbiológicos do leite no sistema orgânico de produção em quatro propriedades no município de Botucatu, SP, utilizando métodos como CMT, exame microbiológico das amostras positivas, contagem de células somáticas (CCS/mL de leite) e Contagem de Unidades Formadoras de Colônias (UFC de microrganismos mesófilos/mL de leite) em amostras individuais de leite em animais com pelo menos um teto positivo ao CMT. Foi também realizado a CCS/mL de leite e UFC/mL de leite, e exame microbiológico de amostras de leite do conjunto (tanque) de cada propriedade. Das 150 glândulas mamárias examinadas, 66 (44,00%) amostras foram positivas ao CMT, com isolamento de Corynebacterium bovis em 37,90%, Staphylococcus aureus (18,20%), S. epidermidis (15,20%), Streptococcus uberis (3,00%) e S. dysgalactiae (3,00%), e isolamento de mais de um agente bacteriano em 7,60% das amostras. Os valores de CCS/mL das amostras do leite de conjunto estiveram dentro dos limites de normalidade em três das quatro propriedades (< 400x103), por outro lado considerando a UFC/mL em três das quatro propriedades observou-se altos índices (8,5x105; 1,5x106; 4,1x105). Obteve-se o isolamento de microrganismos ambientais, como Escherichia coli e Pseudomonas aeruginosa, sugerindo a contaminação do leite durante ou após a ordenha, o que reforça a importância de atividades de educação sanitária para obtenção higiênica do leite.