Abstract in English:
The extent of antigen interference between Yersinia enterocolitica 0:9 and Bmcella spp was evaluated in 245 bovine serum samples divided into groups according to status of immunization against brucellosis, and in 119 swine serum samples. The specimens were submitted to the plate serum agglutination test, tube serum agglutination test and to the Rose Bengal test for Brucella spp, and to tube sérum agglutination for Y. enterocolitica 0:9. The immune response to Y. enterocolitica was demonstrated and considered significant in terms of its possible effects on the interpretation of serological tests for brucellosis. Agglutinating titers were dose or even similar from a quantitative viewpoint. Since in most cases it was not possible to determine precisely the etiologic agent, it is clearly necessary to set up a laboratory method for the diagnosis of brucellosis that will permit the distinction of specific infections.
Abstract in Portuguese:
O grau de interferência antigênica entre Yersinia enterocolitica 0:9 e Bmcella spp foi analisado em 245 soros de bovinos discriminados quanto ao estado de imunização contra brucelpse, e 119 soros de suínos. Os espécimens foram submetidos às provas de soroaglutinação rápida, soro-aglutinação lenta e antígeno acidificado para Brucella spp e soro-aglutinação lenta para Y. enterocolitica 0:9. A resposta imune a Y. enterocolitica foi evidenciada e considerada significativa em relação aos seus possíveis efeitos na interpretação dos testes sorológicos para brucelose. Os títulos aglutinantes foram aproximados ou mesmo similares do ponto de vista quantitativo. Como não foi possível determinar com precisão, na maioria dos casos, o agente etiológico, é necessário instituir um método laboratorial de diagnóstico de brucelose que permita distinguir as infecções específicas.
Abstract in English:
The purpose of this study was to evaluate the competitive enzyme immunoassay used for the serological diagnosis of bovine brucellosis, comparing the results obtained using a conjugate prepared with monoclonal antibody and a conjugate prepared with policlonal sera. The results were also compareci with those obtained by a microtechnique of complement fixation. Two hundred and seventy-three sera from herds with a history of brucellosis, 205 sera from herds free of brucellosis and without vaccination with Brucella abortus strain 19 and 122 sera from herds without history of infection or vaccination were tested. Among sera from infected herds, the complement fixation test revealed antibody titres in 28.51%, the enzyme immunoassay using monoclonal conjugate in 39.19% and the enzyme immunoassay using policlonal conjugate revealed antibody titres in 37.0% of the sera. The agreement between complement fixation and the enzyme immunoassay using policlonal conjugate was 94.38% and the agreement between both of the enzyme immunoassays was 97.89%. Among the sera from vaccinated herds, the agreement between the complement fixation test and the enzyme immunoassay using policlonal conjugate was 69.39%, and the agreement between the enzyme immunoassays was 90.73%. The complement fixation test did not reveal any antibody titre in 67.86% of the sera from vaccinated herds, the enzyme immunoassay using policlonal conjugate did not reveal titres in 51.22% and the enzyme immunoassay with monoclonal conjugate did not reveal antibody titres in 41.95% of the sera from vaccinated herds. All the 122 sera from herds without infection or vaccination were negative to the three serological tests.
Abstract in Portuguese:
O objetivo do trabalho foi avaliar o comportamento do teste imunoenzimático competitivo quando aplicado ao diagnóstico sorológico da brucelose bovina, comparando-se o desempenho do teste ao usar um conjugado preparado com anticorpos monoclonais e um conjugado preparado com soro policlonal. Os resultados foram também comparados com aqueles obtidos através de uma microtécnica de fixação de complemento. Foram examinados 273 soros provenientes de rebanhos com histórico de brucelose, 205 soros provenientes de rebanhos sem problemas de infecção e que adotam a vacinação das bezerras com Brucella abortus amostra B 19 e 122 soros de bovinos procedentes de rebanhos sem histórico de brucelose e que não adotam a vacinação. Nos soros de rebanhos com histórico de infecção, a reação de fixação de complemento revelou títulos de anticorpos em 28, 51%, o teste imunoenzimático com o conjugado monoclonal revelou títulos em 39,19% e o teste imunoenzimático com o conjugado policlonal revelou títulos em 37,0% dos soros examinados, observando-se uma concordância de 94,38% entre a fixação de complemento e o teste imunoenzimático usando o conjugado policlonal e de 97,89% entre os dois testes imunoenzimáticos. Nos soros de rebanhos vacinados, a concordância entre a fixação de complemento e o teste imunoenzimático com o conjugado policlonal foi de 69,39%, enquanto que a concordância entre os testes imunoenzimáticos foi de 90,73%. Neste caso, a reação de fixação de complemento não revelou qualquer título em 67,86% dos soros examinados, o teste com o conjugado policlonal não revelou títulos em 51,22% dos soros, ao passo que o teste com o conjugado monoclonal não revelou título em 41,95% dos soros. Os 122 soros de rebanhos sem histórico de infecção e vacinação apresentaram resultados negativos nos três testes realizados.
Abstract in English:
An epidemiological survey on dairy goats in the state of Pernambuco, Brazil, was carried out to determine the prevalence of caprine arthritis-encephalitis virus (CAEV) infection. A total of 397 serum samples was examined by the agar gel immunodiffusion test using Maedi/Visna virus antigen. The prevalence was 17.6% (70/397), with at least one positive sample in 19 of 40 studied flocks. Significant differences (X2; p<0.05) were found between the rates of positivity recorded in pure bred (21.1%) (Saanen, Toggemburg and Alpine) and crossbred (9.8%) goats; also between animals older (40.0%) or younger (15.1-16.1%) than 4 and a half years. No differences were observed when the sampled population was grouped according to sex or flock composition (bucks, dams and kids).
Abstract in Portuguese:
Com o objetivo de determinar a prevalência da artrite-encefalite caprina em criações de caprinos leiteiros no Estado de Pernambuco, amostras de soro foram testadas pela imunodifusão em ágar gel, utilizando-se antígeno do vírus Maedi/Visna. A prevalência observada foi de 17,6% (70/397), ocorrendo pelo menos um animal positivo em 19 das 40 criações estudadas. Foi observada maior frequência (X2; p<0,05%) de soropositivos nos animais puros (21,1 %) (Saanen, Toggemburg e Parda Alpina) que nos mestiços (9,8%), bem como o estrato de idade superior a 4 anos e meio (40%) que nos mais jovens (15,1-16,1%). Não houve diferença significativa entre as frequências observadas nos estratos formados segundo os critérios sexo e composição do rebanho (reprodutor, matriz e cabrito(a)).
Abstract in English:
A competitive enzyme immunoassay was evaluated using as conjugate monoclonal antibodies B M-38 and B M-40, prepared from mice immunized with Brucellea melitensis 16 M. The competitive enzyme immunoassay was compared with the complement fixation test and an indirect enzyme immunoassay, regarding their efficiency and differential capacity to diagnose brucellosis in cattle vaccinated with B. abortus strain 19. Four hundred and twenty-one sera of vaccinated female calves, obtained between 15 days and 6 months after vaccination, were examined. The competitive enzyme immunoassay using conjugate BM-38 revealed a greater number of positive results (44,18%) than the complement fixation test (35,98%) and the competitive enzyme immunoassay using conjugate BM-40 (29,69%). This last test allowed a higher degree of differentiation than the others, since it revealed a lower number of reactors.
Abstract in Portuguese:
Foi avaliado o teste imunoenzimático competitivo, usando como conjugado os anticorpos monoclonais BM-38 e BM-40, preparados a partir da imunização de camundongos com Brucella melitensis 16 M, em comparação com a reação de fixação de complemento e com o teste imunoenzimático indireto, para diferenciar anticorpos da infecção natural dos induzidos pela vacina B19. Foram testados 421 soros de bezerras vacinadas com B. abortus amostra B 19 e colhidos em intervalos de 15 dias a 6 meses após a vacinação. O teste competitivo usando o conjugado BM-38 apresentou menor capacidade de discriminação que o teste com o conjugado BM-40 (44,18% contra 29,69% de soros com títulos de anticorpos) e que a reação de fixação de complemento (44,18% contra 35,98%) e resultados próximos aos do teste imunoenzimático indireto (54,89% contra 56, 17%), enquanto que o teste competitivo usando o conjugado BM-40 apresentou maior capacidade de discriminação do que os outros testes estudados, uma vez que acusou um menor número de reagentes: 28,9% contra 37, 6% revelados pela reação de fixação de complemento, 29,69% contra 44,18% revelados pelo teste com o conjugado BM-38 e 43,15% contra 56,85% revelados pelo teste imunoenzimático indireto.
Abstract in English:
Three strains of A/equi 2 virus isolated during outbreaks of equine influenza observed in Brazil during 1969, 1985 and 1987 were compared antigenically, performing hemagglutination inhibition (HI) and serum neutralization (SN) tests. Hyperimmune rooster sera and post-infeccion 21-day-old chicken sera were used. The results of the tests showed minor differences among the strains studied. The two more recent strains (1985 and 1987) are elosely related and both equally different from the 1969 one. This strain showed essentially no difference with the prototype strain (A/equi 2/Miami/1/63). The results suggest that a slight antigenic variation occurred in the hemagglutinin of A/equi 2 virus over the years 1969 to 1985.
Abstract in Portuguese:
Descreve-se um estudo comparativo das características antigênicas de três amostras de vírus de influenza equina (IE) A/equi 2, isoladas no Brasil em 1969, 1985 e 1987, utilizando-se as provas de inibição de hemoaglutinação (IHA) e soroneutralização (SN) em ovos embrionados. Soros de galos imunizados conforme técnica preconizada pela OMS e soros de pintos que sofreram infecção virai foram empregados. Os resultados dessas provas indicaram existir uma ligeira variação antigênica entre as amostras estudadas. As dilas amostras mais recentes (1985 e 1987) estão estreitamente relacionadas e ambas igualmente distanciadas da amostra de 1969 que por sua vez se apresentou mais próxima da cepa protótipo do vírus - A/equi 2/Miami/l/63. Os resultados das provas de IHA são melhor evidenciados com os soros de pintos, sangrados 21 dias pós infecção, que apresentam títulos inibidores mais elevados. As provas de SN confirmaram os achados obtidos com IHA e como seus resultados são expressos em valores maiores, sua análise e interpretação ficam mais fácil de serem demonstradas. Em ambos os tipos de prova, os resultados obtidos sugerem que uma ligeira variação antigênica da hemaglutinina do vírus A/equi 2 ocorreu entre os anos de 1969 e 1985.
Abstract in English:
The six month serologic and allergic monitoring of 26 experimentally infected goats, by intradermic inoculation of 5, 20 and 100 Corynebacterium pseudotuberculosis cells, showed the development of both humoral and cellular imune responses at the sarne time. Only one goat did not develop antibodies, but showed a strong allergic reaction, during 22 weeks post-infection. The antibodies, investigated by the synergistic hemolysis inhibition test (Knight 1978), were first detected at the 3rd week and were most elevated at the 7th week post-infection. In 8 animals the antitoxins were persistent until the 29th week; in 7 animals the antibodies could not be detected between the 12th and the 24th week and in other 9 goats between the 5th and 8th week post-infection. Three animals did not show antibodies in any phase after the infection. The allergic reaction, evaluated by the lymphadenization test (Langenegger et al. 1987) in six-week intervals, showed the highest value between the 4th and the 6th week post-infection and then decreased slowly, following generally the antibody level. One third of the infected goats lost the antitoxin titre and the allergic reaction at the 9th and 10th week, having selfcures. A gradual decrease of the antitoxins titre and the allergic sensitization was observed until the total disappearance in some goats with chronic lymphnode abscesses which did not ulcerate, despite live C. pseudotuberculosis still being in the lesion.
Abstract in Portuguese:
O monitoramento sorológico e alérgico de 26 caprinos infectados experimentalmente por inoculação intradérmica de 5, 20 e 100 bactérias de Corynebacterium pseudotuberculosis, durante 6 meses, revelou que as respostas imunológicas humoral e celular desenvolveram-se paralelamente, exceto em um animal no qual não foram detectadas antitoxinas, porém forte reação alérgica até a 22ª semana pós-infecção. A pesquisa de antitoxinas feita através da técnica da Inibição da Hemálise Sinérgica (Knight 1978), revelou a presença de anticorpos a partir da 3ª e atingiu maior concentração na 7ª semana pós-infecção. Em 8 animais a presença destas persistiu até a 29ª semana; em 7 desapareceu entre a 12ª e 24ª e em 9 entre a 5ª e 8ª semana. Três animais não reagiram com título igual ou superior à diluição 1:20. A linfadenização (Langenegger et al. 1987), feita em intervalos de 6 semanas, revelou reações maiores entre a 4ª e 6ª semana pós infecção. Depois a sensibilidade alérgica decrescia, pouco a pouco, acompanhando grosseiramente o declínio do nível das antitoxinas. Em um terço dos animais houve autocuras a julgar pela regressão total das antitoxinas e perda da sensibilidade alérgica a partir da 9ª e 10ª semana pós-infecção. Em alguns caprinos cujas lesões ganglionares se tornavam crônicas sem ulcerar, observou-se também progressiva regressão, tanto das antitoxinas quanto da reação alérgica, até o seu desaparecimento, apesar da presença de C. pseudotuberculosis na lesão.
Abstract in English:
Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was developed for detection of botulinum type D toxin. The double antibody sandwich ELISA was performed with reference to botulinum type D antitoxin (Statens Seruminstitut, Denmark) as in the solid phase, to sensitize plastic surface, as in the production of the immunoenzymatic conjugate. The sensitivity of ELISA was evaluated by using various dilutions of botulinum type D toxin added to liquid culture or a pool of normal bovine serum. The reactivity was, respectively, 15.6 LD50\ml and 31.2 LD50\ml for mice, with absorbance measured spectrophotometrically at 450 nm using an ELISA microreader. The specificity was demonstrated by the absence of reactivity with botulinum type A, B and E, tetanic and diphteric toxins. However, botulinum type C toxin indicated a partial cross-reactivity dueto comparable common antigenic determinants between type C and D toxins. Considering the results presented in this paper it can be concluded that the assay is particulary useful as a sensitive, fast and efficient screening method for detection of botulinum type D toxin, but it has the sarne limitations for the direct diagnosis of botulism in cattle as encountered with the bioassay in mice, because of the low concentration of circtilating toxin.
Abstract in Portuguese:
Foi desenvolvido um teste imunoenzimático (ELISA) capaz de detectar toxina botulínica tipo D. A técnica empregada foi a de Duplo Anticorpo (ELISA "Sandwich") utilizando-se antitoxinas botulínicas tipo D de referência (Statens Seruminstitut, Dinamarca) tanto na fase de sensibilização das microplacas de polivinilcloreto como para a produção do conjugado imunoenzimático (antisoro botulínico tipo D ligado à peroxidase). A sensibilidade do teste foi verificada através de titulações de toxina botulínica tipo D em fluidos de cultura e adicionada a "pool" de soro bovino normal, resultando em reatividade correspondendo respectivamente a 15,6 DL50\ml e 31,2 DL50\ml para camundongos, determinada espectrofotometricamente em leitor de microplacas. A especificidade, por sua vez, foi demonstrada pela ausência de reatividade com os diferentes tipos de toxinas botulínicas A, B e E, toxinas tetânica e diftérica. Entretanto, foi observado reatividade cruzada parcial com a toxina botulínica tipo C, devido às semelhanças antigênicas entre as toxinas tipos C e D. A partir dos resultados obtidos, concluiu-se que o referido teste pode ser utilizado como um método de triagem, sensível, rápido e eficaz para a detecção de toxina botulínica tipo D, embora, especificamente para o diagnóstico direto do botulismo do bovino, o método tem as mesmas limitações do bioensaio em camundongos por causa da baixa concentração de toxina circulante.
Abstract in English:
Thirty-three strains of Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae biovar 1 were isolated from swine lungs with acute or chronic lesions of swine pleuropneumonia, with one exception, which was isolated from the nasal cavity of a pig from a problem herd. These strains originated from 14 herds, ten located in the State of Santa Catarina, three in Rio Grande do Sul and one in São Paulo. Serotyping was done by rapid slide agglutination (RSA), immunofluorescence (IF), counterimmunoelectrophoresis (CIE) and immunodiffusion (ID). Twenty-two (66%) of the 33 strains could be serotyped, 19 belonged to serotype 5 and three to serotype 3. All serotype 3 strains together with those not possible to be serotyped originated from swine of the sarne herd, Santa Catarina, one in which serotype 5 was also isolated. The IF and CIE were the most sensitive tests, while the ID was the least sensitive. Three strains could not be serotyped by the RSA because they auto-agglutinated.
Abstract in Portuguese:
Isolaram-se 33 amostras de Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae, biovar 1, sendo que 32 originaram-se de pulmões de suínos com lesões macroscópicas agudas ou crônicas de Pleuropneumonia Suína (PPS) e uma amostra da cavidade nasal de um suíno de granja problema. Estas amostras foram coletadas em 14 propriedades, sendo dez localizadas no Estado de Santa Catarina, três no Rio Grande do Sul e uma em São Paulo. Para a sorotipagem utilizaram-se as técnicas de soroaglutinação rápida (SAR), imunofluorescência (IF), imunoeletroosmoforese (IEOF) e imunodifusão (ID). Das 33 amostras, 22 (66%) foram sorotipadas e, entre estas, 19 pertenciam ao sorotipo 5 e três ao sorotipo 3. As amostras do sorotipo 3 e aquelas não sorotipadas originaram-se de suínos de uma mesma propriedade do Estado de Santa Catarina, onde também isolou-se o sorotipo 5. Os testes de IF e IEOF foram os mais sensíveis e o de ID apresentou a menor sensibilidade. Três amostras não puderam ser sorotipadas pelo teste de SAR porque auto-aglutinavam.
Abstract in English:
In an attempt to determine the most suitable screening test for the identification of antibodies to Aujeszky's disease vírus in large scale, immunoelectrosmophoresis (IEOP), serum neutralization in microtitre plates (SN) and agar gel immunodiffusion (MID) were adapted to our working conditions and compared. For the comparison between IEOP and SN, 575 field sera of swine from the states of Paraná, Santa Catarina and Rio Grande do Sul were used. The IEOP detected 358 (100%) positive sera, whereas SN detected 293 (81,84%) positives and 35 (9,78%) negatives. In 30 (8,38%) samples no results could be obtained with SN due to contamination or cell culture toxicity. In 217 (100%) samples negative by IEOP, 199 (91,7%) were negative by SN. The remainder 18 (8,29%) allowed no SN result. MID was included in the comparison by testing 386 sera by the three methods. From 285 (100%) IEOP positive sera, SN detected 226 (79,3%) positives, 31 (10,9%) negatives and 28 (9,8%) without result. MID detected 193 (67,7%) positives, 84 (29,5%) negatives and 8 (2,8%) allowed no conclusive result. In 101 (100%) IEOP negative sera, a11 were also negative by MID; 95 (94,05%) were negative by SN and 6 (5,94%) gave no result. Considering the SN results as standard, the IEOP has shown to be a useful technique for screening particularly for laboratories where cell culture facilities are not available. The positive sera heve, however, to be retested either by SN or ELISA, in order to be sure of its positivity, since about 10% of samples were false positives. The MID, despite simpler than IEOP, showed 15,79% false negatives, what might compromise its use as a preliminary test for massive serology.
Abstract in Portuguese:
Com o objetivo de determinar o teste de triagem mais eficaz para a identificação de anticorpos contra o vírus da Doença de Aujeszky em larga escala, imunoeletrosmoforese (IEOF), soroneutralização em microtécnica (SN) e imunodifusão em gel de agar foran1 adaptados às nossas condições de trabalho e comparados. Para a comparação entre IEOF e SN, 575 soros de campo de suínos dos Estados de Paraná, Santa Catarina e Rio Grande do Sul foram utilizados. A IEOF detectou 358 (100%) soros positivos, enquanto a SN detectou 293 (81,84%) positivos e 35 (9,78%) negativos. Em 30 (8,38%) amostras, nenhum resultado pôde ser obtido com a SN devido a contaminação ou toxicidade aos cultivas celulares. Em 217 (100%) amostras negativas por IEOF, 199 (91,7%) foram negativas por SN. As 18 (8,29%) restantes não permitiram resultado por SN. MIO foi incluída na comparação através da testagem comparativa de 386 soros pelos três métodos. De 285 (100%) soros IEOF positivos, a SN detectou 226 (79,3%) positivos, 31 (10,9%) negativos e em 28 (9,8%) não foi obtido resultado. A MIO detectou 193 (67,7%) positivos, 84 (29,5%) negativos e 8 (2,8%) soros não permitiram um resultado conclusivo. Em 101 (100%) soros IEOF negativos, todos foram também negativos por MID; 95 (94,05%) foram negativos por SN e 6 (5,94%) não permitiram resultado. Considerando os resultados da SN como padrão, a IEOF mostrou ser uma técnica útil para triagem, particularmente em laboratórios onde não são trabalhadas técnicas de cultivo celular. Os soros positivos necessitam, no entanto, ser retestados por SN ou ELISA, a fim de serem confirmados resultados positivos, uma vez que em torno de 10% das amostras foram falsos positivos, A MID, apesar de se constituir em uma técnica mais simples que a IEOF, mostrou 15,79% de falsos negativos, o que pode comprometer seu uso como um teste preliminar para sorologia em larga escala.
Abstract in English:
In 1985, a program was implemented in the State of Santa Catarina to certify reproductive herds as free of Aujeszky's disease vírus (ADV). The program, based on the micro serumneutralization test for ADV antibodies, requires biannual testing of all reproductive and replacement swine of each herd. Certification of freedom from ADV in given after it is shown that 100% of the swine tested are devoid of those antibodies, and is renewed with negative results on sucessive testing. Testing of 20907 sera from the 71 herds registered with the Swine Breeding Association of the State of Santa Catarina, showed 20692 (99.0%) free of ADV antibodies, 211 (1.0%) toxic for the indicator cells, and four (0.02%) positive. The positive sera carne from two farms, whose animals had recently participated in a pig show in another State, where they carne in contact with infected pigs and were returned to their original herds without being subject to quarantine and testing. The testing of 958 reproductive swine for participation in pig shows resulted in 944 (98.5%) negative and 14 (1.5%) toxic sera. Serological surveillance at Stations for the Testing of Reproductive Swine show e d that 481 (99 .6%) of the 483 sera tested were antibody negative, while two (0.4%) were toxic. Limited sampling of fattening units demonst_rated low levels of infection with ADV. Sera were tested from 61 of the approximately 130,000 fattening units existing in the State, and of 4028 sera, 3939 (97.8%) were negative, 33 (0.8%) were positive, and 56 (1.4%) were toxic. The continuation of the serological surveillance program of swine herds in Santa Catarina is the best guarantee for the contrai of Aujeszky's disease in the State.
Abstract in Portuguese:
Em 1985, iniciou-se, no Estado de Santa Catarina, um programa de certificação de granjas de reprodutores suínos livres do vírus da doença de Aujeszky (VDA). O programa, baseado no microteste de soroneutralização para anticorpos do VDA, requer a testagem bianual de todos os suínos reprodutores e de reposição de cada plantel. A certificação de ser livre do VDA é concedida após a demonstração de que 100% dos suínos testados se encontram isentos desses anticorpos, e é renovada com resultados negativos em testagens sucessivas. A análise de 20907 soros, oriundos dos 71 plantéis registrados na Associação Catarinense de Criadores de Suínos (ACCS), mostrou 20692 (99 ,0%) livres de anticorpos para o VDA, 211 (1,0%) tóxicos para as células indicadoras, e quatro (0,02%) positivos. Os soros positivos pertenciam a dois plantéis cujos suínos tinham recentemente participado de exposição em um outro Estado, onde estiveram em contato com suínos infectados e tinham retornado a seus plantéis de origem sem sofrer quarentena e testagem. A testagem de 958 suínos reprodutores que participaram em feiras e exposições resultou em 944 (98,5%) soros negativos e 14 (1 ,5%) tóxicos. A vigilância sorológica realizada em Estações de Teste de Reprodutores mostrou que 481 (99,6%) dos 483 soros testados, foram negativos para anticorpos, enquanto que dois (0,4%) foram tóxicos. A amostragem limitada de plantéis de terminadores evidenciou níveis baixos de infecção com o VDA. Soros de animais oriundos de 61 dos aproximadamente 130.000 plantéis existentes no Estado foram testados e, de um total de 4028 soros, 3939 (97 ,8%) foram negativos, 33 (0,8%) foram positivos e 56 (1,4%) foram tóxicos. A continuação da vigilância sorológica do plantel suíno catarinense se constitui na maior garantia para o controle da doença de Aujeszky, no Estado.