Abstract in English:
Glomerulopathy is an important cause of kidney disease in dogs. Diagnosis is based on anamnesis, clinical examination, and complementary tests and can be complex and costly depending on the stage of the disease. Morphological evaluation of erythrocytes observed during urinalysis is frequently conducted for humans, which may help identify kidney damage in animals with kidney disease – individuals with glomerular disease present with erythrocyte dysmorphism, particularly the presence of erythrocytes recognized as acanthocytes. Animal studies are limited, and their results are often contradictory. Thus, the objective of this study was to identify the different populations of isomorphic and dysmorphic red blood cells (RBCs) present in the urine of dogs and to compare the bright-field and phase-contrast optical microscopy techniques in identifying morphological changes in RBCs during urinalysis. A total of 40 samples were selected from dogs with microscopic or macroscopic hematuria from routine care at Federal Rural University of Pernambuco Veterinary Hospital and were sent to the hospital’s Veterinary Clinical Pathology Laboratory. Physical, chemical, and sediment examinations were conducted. Subsequently, RBCs were evaluated and differentiated using bright-field and phase-contrast microscopy. In dog urine samples, it was possible to identify all populations considered isomorphic and dysmorphic that are described in humans. Among those considered isomorphic, normal RBCs, annulocytes, and echinocytes were observed, whereas stomatocytes, acanthocytes, codocytes, ghost cells, knizocytes and cells with no defined names (other) were found among the dysmorphic forms. No significant difference was observed between the two microscopic techniques used to differentiate and classify erythrocytes. Therefore, it is possible to identify and differentiate the morphological alterations found in RBCs in dogs’ urine. Compared with a phase-contrast microscope, a conventional optical microscope can be used without any detrimental effects, thereby facilitating the use of this technique in the laboratory routine, as it is cost-effective. Further studies should be conducted to evaluate the sensitivity and specificity of the identification of erythrocyte dysmorphism as an early marker of glomerular lesions.
Abstract in Portuguese:
As glomerulopatias são importantes causas de afecções renais em cães. Seu diagnóstico é baseado na anamnese, exame clínico e exames complementares e pode se tornar complexo e oneroso dependendo da fase da doença. Uma avaliação frequentemente utilizada na medicina humana e que pode auxiliar na localização da lesão renal em animais com doença renal é a avaliação morfológica dos eritrócitos observados na urinálise. Indivíduos com doença glomerular apresentam dismorfismo eritrocitário, especialmente com a presença de eritrócitos reconhecidos como acantócitos. Estudos em animais são escassos e seus resultados muitas vezes são contraditórios. Dessa forma, objetivou-se identificar as diferentes populações de hemácias isomórficas e dismórficas presentes na urina de cães e comparar as técnicas de microscopia óptica de campo claro e de contraste de fase na identificação de alterações morfológicas em hemácias durante a realização da urinálise. Foram selecionadas quarenta amostras de urina de cães com hematúria microscópica ou macroscópica, oriundas da rotina de atendimento do Hospital Veterinário da UFRPE e enviadas ao Laboratório de Patologia Clínica Veterinária desta instituição. As amostras passaram por exame físico, químico e do sedimento, sendo posteriormente as hemácias avaliadas e diferenciadas utilizando-se os métodos de microscopia de campo claro e de contraste de fase. Nas amostras de urina de cães, foi possível identificar todas as populações consideradas isomórficas e dismórficas já descritas em humanos. Dentre as consideradas isomórficas foram observadas hemácias normais, anulócitos e equinócitos e dentre as formas dismórficas foram encontradas estomatócitos, acantócitos, codócitos, células fantasmas, nizócitos e células ainda sem nomenclatura definida (outros). Não foi observada diferença significativa entre as duas técnicas microscópicas empregadas na diferenciação e classificação dos eritrócitos. Conclui-se que é possível identificar e diferenciar as alterações morfológicas encontradas nas hemácias de urinas de cães e que o uso de microscópio óptico tradicional convencional, quando comparado ao microscópio de contraste de fase, pode ser empregado sem grande prejuízo para o exame, facilitando a utilização dessa técnica na rotina laboratorial por ser um equipamento mais acessível. Outros estudos devem ser realizados para avaliar a sensibilidade e especificidade do uso da identificação do dismorfismo eritrocitário como um marcador precoce de lesões glomerulares.
Abstract in English:
Toxoplasma gondii can be eliminated in bovine semen. Cryopreserved semen is often used due to the fact that artificial insemination in dairy and beef cattle provides benefits in terms of production. However, little is known regarding the viability and infectivity of T. gondii tachyzoites in cryopreserved bovine semen. In the present study, cattle semen negative for T. gondii were contaminated with 1 x 106 tachyzoites (RH strain) and cryopreserved with and without different cryoprotectants, such as DMSO (concentrations of 2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% and 10.0%) and glycerol (2.25%, 2.5%, 3.0%, 5.0%, 7.5% and 10.0%), followed by freezing in liquid nitrogen (-196°C). After 24 hours, the samples were thawed and inoculated in 10 mice per cryoprotectant concentration. The mice were evaluated for clinical signs of toxoplasmosis (rough coat, diarrhea, hypoactivity and sudden death) as well as serum titers of IgM and IgG and the presence of tachyzoites in the peritoneal lavage. The results revealed that T. gondii remained infective in all samples. Clinical signs of toxoplasmosis were observed in the mice beginning with the 6th day post-inoculation (DPI) and 100% lethality was found between the 7th and 9th DPI. Viable tachyzoites were recovered from peritoneal exudate of dead mice (except for the control group), with higher mean of tachyzoite counts in the intraperitoneal lavage for 5% DMSO (±3.32 x 106), 8% DMSO (±3.53 x 106), 3% glycerol (±4.75 x 106), 7.5% glycerol (±6.26 x 106) and the absence of cryoprotectant (±3.11 x 106). Seroconversion occurred in the treated groups, with titers of IgG from 1:16 to 1:128 and IgM from 1:16 to 1:512. T. gondii viability and infectivity were maintained in cattle semen during 24 hours of cryopreservation at -196°C with and without cryoprotectant. However, further studies are necessary to determine whether cryopreserved semen contributes to the spread of toxoplasmosis through artificial insemination.
Abstract in Portuguese:
Sabe-se que Toxoplasma gondii pode ser eliminado no sêmen bovino. A inseminação artificial em bovinos leiteiros e de corte proporcionou avanços e benefícios nas produções e para isso o sêmen criopreservado é frequentemente utilizado. No entanto, pouco se sabe sobre a viabilidade e infectividade dos taquizoítos de T. gondii em sêmen bovino criopreservado. Para isso o sêmen bovino, negativo para T. gondii, foi contaminado com 1x106 taquizoítos (cepa RH), criopreservados com ou sem diferentes crioprotetores como DMSO (2.5%, 5.0%, 7.5%, 8.0% e 10.0%) e Glicerol (2.25%, 2.5%, 3.0%, 5.0%, 7.5% e 10.0%) e congelados em nitrogênio líquido (-196°C). Após 24 horas, essas amostras foram descongeladas e inoculadas em 10 camundongos por diluente de concentração de crioprotetor. Os camundongos foram avaliados quanto a sinais clínicos de toxoplasmose (pele áspera, diarreia, hipoatividade e morte súbita), títulos séricos de IgM e IgG e presença de taquizoítos no lavado peritoneal. Os resultados mostraram que T. gondii se manteve infectante em todas as amostras, inclusive naquelas sem crioprotetor. Sinais clínicos de toxoplasmose foram observados nos camundongos a partir do 6º dia pós-inoculação (DPI) e 100% de letalidade foi verificada entre o 7º ao 9º DPI. Nos camundongos mortos, exceto no grupo controle, taquizoítos viáveis foram recuperados do exsudato peritoneal, com maior média de taquizoítos quantificados na lavagem intraperitoneal para DMSO a 5% (±3.32x106), 8% (±3.53x106) e glicerol 3% (±4.75x106), 7,5% (±6.26x106) e livre de crioprotetor (±3.11x106). A soroconversão ocorreu nos grupos tratados com títulos de IgG (1:16 a 1:128) e IgM (1:16 a 1:512). A viabilidade e infectividade do T. gondii no sêmen bovino durante as 24 horas de criopreservação a -196°C foram mantidas com ou sem crioprotetor. No entanto, mais estudos são necessários para verificar se o sêmen criopreservado contribui para a disseminação da toxoplasmose na inseminação artificial.
Abstract in English:
Seven hundred twenty cases of oral cavity lesions in dogs were diagnosed from 2015 to 2020 in Distrito Federal, Brazil. Four hundred thirty-two (60%) lesions were neoplastic, and 288 (40%) were non-neoplastic. Of the neoplasms, 229 (53%) were considered malignant and 203 (47%) benign, affecting mainly males, of 43 different breeds, with an average age of 9.4 years, mainly the gum and lip. Melanoma was the most (96/432, 22.2%) commonly diagnosed neoplasm, followed by peripheral odontogenic fibroma (68/432, 15.7%), papilloma (63/432, 14.5%) and squamous cell carcinoma (SCC) (56/432, 12.9%). Non-neoplastic lesions also affected males predominantly, from 41 different breeds, with an average age of 8.9 years, mainly in the gums, lip, and tongue. These lesions were diagnosed as inflammatory (230/288, 79.8%), hyperplastic (47/288, 16.3%) and other lesions (11/288, 3.8%).
Abstract in Portuguese:
Foram estudados 720 casos de lesões na cavidade oral em cães diagnosticados entre 2015 e 2020, no Distrito Federal. Dessas alterações, 432 (60%) foram neoplásicas e 288 (40%) não neoplásicas. Dentre os neoplasmas, 229 (53%) foram consideradas malignos e 203 (47%) benignos, acometendo principalmente machos, de 43 raças diferentes, com idade média 9,4 anos, afetando principalmente gengiva e lábio. Melanoma foi o neoplasma mais comumente diagnosticado (96/432; 22,2%), seguido do fibroma odontogênico periférico (68/432; 15,7%), papiloma (63/432; 14,5%) e carcinoma de células escamosas (56/432; 12,9%). As lesões não neoplásicas também acometeram predominantemente machos, de 41 raças diferentes, com idade média 8,9 anos, afetando principalmente gengiva, lábio e língua. Essas lesões foram diagnosticadas como inflamatórias (230/288; 79,8%), hiperplásicas (47/288; 16,3%) e como outras alterações (11/288; 3,8%).
Abstract in English:
This study collected samples from 50 Holstein cows, most intensively bred, and from the Campos Gerais region, Paraná, with an average milk production of 30.21L/day. Samples of the liver, spleen and lymph nodes were collected to determine the levels of copper, cobalt, iron, molybdenum and zinc. Spleen and lymph nodes were subjected to histological analysis and evaluation of the degree of hemosiderosis. The average concentrations of copper (495.05ppm), molybdenum (4.19ppm), and zinc (274.49ppm) were higher than those established for the bovines. For cobalt 26% of the animals presented levels below the established level, which characterized cobalt deficiency. Only iron (299.12ppm) exhibited an adequate average level. Histopathologically hemosiderosis was observed mainly in the spleen (78%) and less frequently in the lymph nodes (20%). The observation of hemosiderin in the spleen and lymph nodes is not related to copper deficiency. Still it may be related to high levels of molybdenum, zinc, iron, or other undetermined causes.
Abstract in Portuguese:
Para este estudo foram coletadas amostras de 50 vacas, da raça Holandesa, a maior parte criada intensivamente e oriunda da região dos Campos Gerais/PR, com média individual de produção de leite de 30,21L/dia. Foram coletadas amostras de fígado, baço e linfonodos para determinação dos níveis de cobre (Cu), cobalto (Co), ferro (Fe), molibdênio (Mo) e zinco (Zn). Baço e linfonodo foram submetidos à análise histológica e avaliação do grau de hemossiderose. A média das concentrações de Cu (495,05ppm), Mo (4,19ppm) e Zn (274,49ppm) encontrava-se acima dos níveis estabelecidos para bovinos. Para o Co, observou-se que 26% dos animais apresentaram níveis abaixo do estabelecido, o que caracterizou deficiência de Co. Apenas o Fe (299,12ppm) apresentou níveis médios adequados. Na histopatologia, hemossiderose foi observada, principalmente no baço (78%) e com menos frequência nos linfonodos (20%). A observação de hemossiderina no baço e linfonodos não está relacionada à deficiência de Cu, porém pode estar relacionada a elevados níveis de Mo, Zn e Fe ou a outras causas não determinadas.
Abstract in English:
Laminitis is a disease that affects the dermis and epidermis of the bovine hoof, generating changes in the hoof capsule. This study evaluated the effects of clinical laminitis diagnosed after the adaptation phase to confinement on the morphology, density, and mineral composition of the hoof of Nellore cattle after finishing. The animals were separated in the first weeks of confinement into a sick group (SG), with clinical laminitis, and a healthy group (HG). SG animals had higher heel length, dorsal wall length, toe height, and diagonal hoof length (p<0.05) than healthy animals. The dermal laminae had similar measurements for thickness, length, and spacing between them between SG and HG. Animals with laminitis showed congestion, hemorrhage, and basement membrane irregularities on histology. Computed microtomography (µCT) revealed that the hoof density of sick animals is lower than healthy ones. According to the mineral composition by energy-dispersive X-ray fluorescence (ED-XRF) spectrometry, the hooves of animals with laminitis (SG) and healthy ones (HG) were not biochemically different. Therefore, the occurrence of clinical laminitis in Nellore cattle in the first weeks of confinement causes an increase in the morphometric parameters of the hoof capsule and a reduction in the density of the abaxial hoof wall evaluated after the finishing period. This disease does not promote changes in the histomorphometric parameters of the dermal laminae and the percentage of minerals in the abaxial hoof wall.
Abstract in Portuguese:
A laminite é uma doença que afeta a derme e epiderme do casco de bovinos gerando alterações no estojo córneo. O estudo avaliou os efeitos da laminite clínica diagnosticada após a fase de adaptação ao confinamento na morfologia, densidade e composição mineral do casco de bovinos da raça Nelore após terminação. Nas primeiras semanas de confinamento, os animais foram separados em um grupo doente (GD) com laminite clínica e em um grupo saudável (GS). Os animais do GD apresentaram maior comprimento de talão, comprimento da parede dorsal, altura da pinça e comprimento diagonal do casco (p<0,05) do que os saudáveis. As lâminas dérmicas tiveram medidas semelhantes para espessura, comprimento e espaçamento entre elas entre GD e GS. Animais doentes apresentaram congestão, hemorragia e irregularidades da membrana basal na histologia. A microtomografia computadorizada (µCT) revelou que a densidade do casco de animais doentes é menor do que o saudável. Para a composição mineral por meio da espectrometria de fluorescência de raio-X por dispersão de energia (ED-XRF), o casco dos animais doentes (GD) e dos saudáveis (GS), não se mostraram diferentes bioquimicamente. Conclui-se que a ocorrência de laminite clínica em bovinos da raça Nelore nas primeiras semanas de confinamento ocasiona aumento de parâmetros morfométricos do estojo córneo e redução da densidade da parede abaxial do casco, avaliados após o período de terminação. Essa enfermidade não promove modificações nos parâmetros histomorfométricos das lâminas dérmicas e na porcentagem de minerais da parede abaxial do casco.
Abstract in English:
The samples were taken from 106 cows with various-looking lesions on their teats and ranged in age from 2 to 8 years. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) antigen (Ag) positive for the bovine papillomavirus (BPV) was found in 59 (55.7%) blood serum samples. PCR using FAP59/64 primers was positive for 24 (22.6%) samples. BPV-2 (40, 37.7%), BPV-6 (28, 26.4%), BPV-8 (30, 28.3%), BPV-9 (36, 34%), BPV-10 (32, 30.3%), and BPV-12 (22, 20.8%) were found in a PCR type-specific analysis of single and mixed type teat warts. The highest positivity was observed in BPV-2, BPV-9 and BPV-10 in flat and round forms, BPV-6, BPV-10, BPV-12, and mixed types in rice grain-cauliflower forms, BPV-9 and mixed types in filiform in the distribution of types based on the macroscopic appearance of teat lesions. As for the distribution of BPV types according to age, the most BPV-2 types were found in the age group of two years, the most BPV-10 types in the age group of three years, the most BPV-9 types in the age group of four years, the most BPV-8+BPV-12 types in the age group of five years, and the most mixed types between the ages of six and eight years. The existence of the virus was then checked using electron microscopy on the chosen samples (at least one investigation was conducted), and it was positively identified using BPV type-specific primers. The authors concluded that BPV detection using an ELISA (Ag) test from blood serum samples was shown to be less sensitive than BPV type-specific PCR from wart samples.
Abstract in Portuguese:
The samples were taken from 106 cows with various-looking lesions on their teats and ranged in age from 2 to 8 years. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) antigen (Ag) positive for the bovine papillomavirus (BPV) was found in 59 (55.7%) blood serum samples. PCR using FAP59/64 primers was positive for 24 (22.6%) samples. BPV-2 (40, 37.7%), BPV-6 (28, 26.4%), BPV-8 (30, 28.3%), BPV-9 (36, 34%), BPV-10 (32, 30.3%), and BPV-12 (22, 20.8%) were found in a PCR type-specific analysis of single and mixed type teat warts. The highest positivity was observed in BPV-2, BPV-9 and BPV-10 in flat and round forms, BPV-6, BPV-10, BPV-12, and mixed types in rice grain-cauliflower forms, BPV-9 and mixed types in filiform in the distribution of types based on the macroscopic appearance of teat lesions. As for the distribution of BPV types according to age, the most BPV-2 types were found in the age group of two years, the most BPV-10 types in the age group of three years, the most BPV-9 types in the age group of four years, the most BPV-8+BPV-12 types in the age group of five years, and the most mixed types between the ages of six and eight years. The existence of the virus was then checked using electron microscopy on the chosen samples (at least one investigation was conducted), and it was positively identified using BPV type-specific primers. The authors concluded that BPV detection using an ELISA (Ag) test from blood serum samples was shown to be less sensitive than BPV type-specific PCR from wart samples.
Abstract in English:
In this retrospective study, the clinical and anatomopathological findings of fungal diseases in dogs and cats in Northeastern Brazil are described. During the study period, 6,827 histopathological examinations (4,090 necropsies and 2,737 biopsies) of companion animals were reviewed, and fungal infections were diagnosed in 54 cases. Of these, 32 cases were diagnosed in cats and 22 in dogs. Sporotrichosis was the most prevalent mycosis (19/54), followed by dermatophytosis (9/54), cryptococcosis (8/54), candidiasis (7/54), and phaeohyphomycosis (4/54). Other diseases had two cases each, including aspergillosis, mucormycosis, and histoplasmosis, whereas coccidioidomycosis occurred once. Mycoses were diagnosed through microscopic lesions associated with the histomorphological characteristics of the agent, as evidenced by routine and special histochemical stains. They were occasionally confirmed by immunohistochemistry and microbiological cultivation. This retrospective study showed that despite being uncommon, fungal diseases are important causes of death in dogs and cats in the region, with cats being the most affected species and sporotrichosis being the most prevalent mycosis. Clinical signs were correlated with the portal of entry of the infection associated with localized or disseminated superficial and deep skin lesions or affecting parenchymal organs, especially in systemic infections. Microscopic lesions were mainly characterized by pyogranulomatous inflammation associated with fungal structures. In dogs, mycoses occurred mainly owing to an immunological impairment secondary to canine distemper virus co-infection.
Abstract in Portuguese:
Neste estudo retrospectivo, são descritos os achados clínicos e anatomopatológicos das doenças fúngicas em cães e gatos no Nordeste do Brasil. Durante o período de estudo, foram revisados 6.827 exames histopatológicos (4.090 necropsias e 2.737 biópsias) de animais de companhia e diagnosticados 54 casos de infecções fúngicas. Destes, 32 casos foram diagnosticados em gatos e 22 em cães. A esporotricose foi a micose mais prevalente (19/54), seguida pela dermatofitose (9/54), criptococose (8/54), candidíase (7/54) e feo-hifomicose (4/54). Outras doenças tiveram dois casos cada, incluindo aspergilose, mucormicose e histoplasmose, enquanto a coccidioidomicose ocorreu uma vez. As micoses foram diagnosticadas por meio das lesões microscópicas associadas às características histomorfológicas do agente, evidenciadas pelas colorações de rotina e histoquímicas especiais, e ocasionalmente confirmadas pela imuno-histoquímica e cultivo microbiológico. Esse estudo retrospectivo demonstrou que apesar de incomuns, as doenças fúngicas são importantes causas de morte em cães e gatos da região, sendo os gatos a espécie mais afetada e a esporotricose, a micose mais prevalente. Os sinais clínicos estavam correlacionados com a porta de entrada da infecção, associados a lesões cutâneas localizadas ou disseminadas superficiais e profundas ou afetando órgãos parenquimatosos, especialmente em infecções sistêmicas. As lesões microscópicas eram caracterizadas principalmente por inflamação piogranulomatosa associada a estruturas fúngicas. Nos cães, as micoses ocorreram principalmente devido ao comprometimento imunológico secundária a coinfecção pelo vírus da cinomose canina.
Abstract in English:
Mast cell tumors are one of the most common neoplasia in dogs and cytopathology and/or histopathology examinations are used for diagnosis. Histologic grading is considered the gold standard test to predict the prognosis of this neoplasia. However, studies have been conducted using the cytological grading system to provide similar information in a faster, less invasive, and more accessible way. This study aimed to investigate cytological graduation and correlate it with histological grading and the survival time of dogs diagnosed with cutaneous mast cell tumors at the Veterinary Hospital of “Universidade Federal de Uberlândia” over five years. For that, cytological and histological slides from 72 animals were reviewed. The statistical methods used were the kappa test for agreement between grading systems, the Kaplan–Meier for survival time, Cox regression for comparison of cytological and histological grades and survival time. The cytological grading when compared to the two-tier histologic grading, high and low grades, had a moderate agreement (kappa 0.566). When the correlation between survival time and the cytological grade was evaluated, there was a higher death rate in the group with high-grade mast cell tumors compared to low grade, pointing to a correlation between survival time and cytological grade (p=0.009). In conclusion, the cytological grade is useful to treatment planning and providing prognostic information that precedes tumor removal, showing a good correlation with the two-tier histologic grading and with the survival time of the animals.
Abstract in Portuguese:
O mastocitoma é uma das neoplasias cutâneas mais comum nos cães e os exames citopatológicos e/ou histopatológicos são utilizados para diagnóstico. A graduação histológica é considerada padrão ouro para prever o prognóstico dessa neoplasia. Contudo, estudos têm sido realizados visando utilizar graduação citológica para fornecer informações semelhantes de maneira rápida, menos invasiva e mais acessível. Esse trabalho objetivou realizar graduação citológica e correlacionar com as graduações histológicas e com a sobrevida de cães diagnosticados com mastocitoma cutâneo no Hospital Veterinário da Universidade Federal de Uberlândia durante 5 anos. Para isso, lâminas de citologia e histologia de mastocitomas de 72 animais foram revisadas. Os métodos estatísticos utilizados foram teste kappa para concordância entre os sistemas de graduação, método Kaplan-Meier para tempo de sobrevida dos animais, e análise pela regressão de Cox para comparação do grau citológico e grau histológico e o tempo de sobrevida global. A graduação citológica quando comparada com a histológica de dois níveis, alto grau e baixo grau, obteve uma concordância moderada (kappa 0,566). Na avaliação da correlação entre sobrevida e grau citológico, houve maior taxa de óbito no grupo de cães com mastocitoma de alto grau, comparado aos de baixo grau, sendo observada correlação entre a sobrevida e o grau citológico (p=0,009). Esse estudo concluiu que o grau citológico é útil para o planejamento do tratamento e para fornecer informações prognósticas que antecedem a exérese do tumor, tendo boa correlação com a graduação histológica de dois níveis e com a sobrevida dos animais.
Abstract in English:
The objective of the present study was to detect the genetic diversity of Anaplasma marginale strains in naturally infected calves from a rural property located in the northeastern region of the state of Pará, Eastern Amazon, which has a history of mortality due to anaplasmosis. Fourteen calves positive for A. marginale were selected using a semi-nested polymerase chain reaction for the target msp1α gene, with asymptomatic (n=3) and symptomatic (n=11) infections. After sequencing the samples, two genotypes were verified in the E and C regions and the structures in tandem repeats were determined. Nine different strains were found: eight related to the E genotype (α-β-β-Γ = one animal, asymptomatic; 16-F-17-F-F = two animals, symptomatic; α-β-F-F-F-F = one animal, asymptomatic; 31-62-62-61 = one animal, symptomatic; τ-10-3 = three animals, two symptomatic and one asymptomatic; α-β-β-β = one animal, symptomatic; τ-22 -13-18 = two animals, both symptomatic; β-β-β-BRA1-31 = two animals, both symptomatic), and one related to genotype C (23-24-25-31-27-27 = one animal, asymptomatic). Genotype E was predominant in 92.86% of the samples (13/14), followed by genotype C (7.14%). This study made it possible to detect the genetic diversity of A. marginale in calves from the selected dairy farm, in addition to identifying the BRA1 sequence in the animals of the present study, which was recently diagnosed in Minas Gerais, demonstrating the dispersion of A. marginale strains in herds from different Brazilian states. Genetic diversity of A. marginale was observed in both symptomatic and asymptomatic calves. There were no significant differences when clinical signs were compared to the genotype verified in the infected animals. The prevalence of pathogenicity was not observed.
Abstract in Portuguese:
O objetivo do presente trabalho foi detectar a diversidade genética de cepas de Anaplasma marginale em bezerros naturalmente infectados oriundos de uma propriedade rural localizada na região nordeste do estado do Pará, Amazônia Oriental, a qual apresentava histórico de mortalidade devido à anaplasmose. Foram selecionados 14 bezerros positivos para A. marginale pela técnica de semi-nested PCR (nPCR) para o alvo no gene msp1α, com infecção assintomática (n=3) e sintomáticos (n=11). Após o sequenciamento das amostras foram verificados dois genótipos nas regiões E e C, e determinadas as estruturas em tandem repeats. Nove diferentes estirpes foram encontradas, sendo oito relacionadas ao genótipo E (α-β-β-Γ = um animal, assintomático; 16-F-17-F-F = dois animais, sintomáticos; α-β-F-F-F-F = um animal, assintomático; 31-62-62-61 = um animal, sintomático; τ-10-3 = três animais, dois sintomáticos e um assintomático; α-β-β-β = um animal, sintomático; τ-22-13-18 = dois animais, sintomáticos; β-β-β-BRA1-31 = dois animais, sintomáticos) e uma relacionada ao genótipo C (23-24-25-31-27-27 = um animal, assintomático). O genótipo E foi predominante em 92,86% das amostras (13/14), seguido pelo genótipo C (7,14%). O estudo possibilitou a detecção da diversidade genética de A. marginale em bezerros dessa propriedade leiteira, além de identificar a sequência BRA1 nos animais do presente estudo, a qual foi diagnosticada recentemente em Minas Gerais, o que demonstra a dispersão das estirpes de A. marginale nos rebanhos de diferentes estados brasileiros. A diversidade genética de A. marginale foi observada tanto em bezerros sintomáticos quanto em assintomáticos e não houve diferença significativa quando se comparou os sinais clínicos ao genótipo verificado no animal infectado, não observando a prevalência de patogenicidade de estirpes.
Abstract in English:
The molecular background of canine mast cell tumors (MCT) has been extensively investigated; however, the dynamic molecular changes that occur during carcinogenesis and metastasis are not fully understood. This study aimed to evaluate the incidence of mutations in the c-KIT proto-oncogene in canine MCTs and relative draining regional lymph nodes. Suspected or confirmed lymph node metastasis was classified accordingly to the HN Weishaar classification. The study included 34 dogs diagnosed with MCT; 19 patients were enrolled prospectively. These dogs had the primary MCT and regional lymph node resected and analyzed simultaneously. The second group was evaluated retrospectively and included fifteen patients resectioning the primary MCT without evaluation of regional lymph node. Analyzes of c-KIT mutation were performed for all primary MCTs and, in the first group, compared between primary MCT and HN-classified metastasis. Internal tandem duplications (ITD) in exon 11 of the c-KIT gene were detected in 20% of patients. Ten of the nineteen patients (52%) in the first group presented mast cell infiltration in the regional lymph node, and ITD in exon 11 of the c-KIT gene was detected in five and two dogs from Groups 1 and 2, respectively. ITD c-KIT mutations are common in canine MCT and may be found in the draining lymph node metastases/mast cell infiltrates in the absence of mutation of the primary tumor. Evaluation of c-KIT mutation in the primary tumor and metastases may be informative for defining both prognosis and therapeutic options in MCT cases.
Abstract in Portuguese:
O perfil molecular do mastocitoma (MCT) tem sido bastante investigado, no entanto as dinâmicas moleculares que ocorrem durante a carcinogênese e metástase desta neoplasia não estão bem esclarecidas. O objetivo desse estudo foi avaliar a incidência de mutações no proto-oncogene c-KIT em MCTs caninos e respectivos linfonodos regionais. Os casos suspeitos ou confirmados de metástase para os linfonodos, foram classificados de acordo com a classificação HN de Weishaar. O estudo incluiu 34 cães diagnosticados com MCT e, desses, 19 pacientes foram avaliados de maneira prospectiva, em que o tumor primário e o linfonodo regional foram ressecados e analisados simultaneamente. O segundo grupo foi avaliado retrospectivamente e incluiu quinze pacientes que tiveram ressecção do MCT primário sem avaliação de linfonodo regional. A análise da mutação c-KIT foi realizada para todos os MCTs primários e, no primeiro grupo, comparados entre MCT primário e metástase classificada pelo sistema HN. Duplicações internas em tandem (DIT), no exon 11 do gene c-KIT, foram detectadas em um total de 20% dos pacientes. Dez dos dezenove pacientes (52%) do primeiro grupo apresentavam infiltração de mastócitos no linfonodo regional, e DIT no exon 11 do gene c-KIT foram identificadas em cinco e dois cães dos Grupos 1 e 2, respectivamente. Mutações do tipo DIT no gene c-KIT são comuns no MCT canino e podem estar presentes nas metástases/infiltrados de mastócitos na ausência de mutação do tumor primário. A avaliação da mutação no gene c-KIT no tumor primário e metástases pode ser informativa para definir tanto o prognóstico quanto as opções terapêuticas em casos de MCT.