PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Argolo Neto N.M., Del Carlo R.J., Monteiro B.S., Nardi N.B., Chagastelles P.C., Brito A.F.S., Reis A.M.S. & Silva L.M.C. 2016. Role of the autologous mesenchymal stem cells compared with platelet rich plasma on cicatrization of cutaneous wounds in diabetic mice. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):617-624. Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinária, Universidade Federal do Piauí, Campus Socopo, Teresina, PI 64049-550, Brazil. E-mail: argolo_napoleao@ufpi.edu.br Chronic cutaneous lesions affect 15% of diabetic human patients and represent a risk 15 to 46 times larger of limb amputations compared to people with normal glycemia. It is assumed that half of these amputations could be prevented by early treatment of wounds, for example, with proper cell therapy. Objectives: In this study, the action of the autologous transplant of mesenchymal stem-cells (MSC) was evaluated compared to the treatment with autologous platelet rich plasma (PRP) in the cicatrization of cutaneous lesions induced in diabetic mice. These animals were previously treated with streptozootocin to induce diabetes mellitus and round wounds of 1.5cm in diameter were created in the posterior region. Diameters of the wounds and healing time were evaluated during 30 days and the results were submitted to variance analysis and Tukey’s test average. It was noticed that the animals treated with MSC presented a more accelerated cicatrization of the cutaneous lesion than the animals treated with PRP. However, the treatment with PRP presented better results than just the daily asepsis of the lesions with saline or covering them with semi-permeable bandage. Besides, the use of semi-permeable bandage kept the cutaneous lesions of diabetic mice did not interfere negatively with cicatrization, proved to be harmless to use, but kept the cutaneous lesions more hydrated than the ones exposed to the environment.

• Cicatrization wound healing mesenchymal stem cells diabetes mellitus cicatrização células-tronco mesenquimais

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Argolo Neto N.M., Del Carlo R.J., Monteiro B.S., Nardi N.B., Chagastelles P.C., Brito A.F.S., Reis A.M.S. & Silva L.M.C. 2016. Role of the autologous mesenchymal stem cells compared with platelet rich plasma on cicatrization of cutaneous wounds in diabetic mice. [Papel das células-tronco mesenquimais autólogas em comparação com plasma rico em plaquetas na cicatrização de feridas cutâneas em camundongos diabéticos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(7):617-624. Departamento de Clínica e Cirurgia Veterinária, Universidade Federal do Piauí, Campus Socopo, Teresina, PI 64049-550, Brazil. E-mail: argolo_napoleao@ufpi.edu.br Lesões cutâneas crônicas afetam 15% dos pacientes diabéticos e humanos representam um risco 15 a 46 vezes maior de amputações de membros em comparação com as pessoas com a glicemia normal. Supõe-se que a metade destas amputações poderia ser evitada por meio do tratamento precoce das feridas cutâneas com, por exemplo, uma adequada terapia celular. Objetivos: Neste estudo, a ação do transplante autólogo de células estaminais mesenquimais (MSC) foi avaliada em comparação com o tratamento com plasma rico em plaquetas autólogo (PRP) na cicatrização de lesões cutâneas induzidas em camundongos diabéticos. Estes animais foram previamente tratados com estreptozotocina para induzir diabetes mellitus e feridas redondas de 1,5 cm de diâmetro foram criadas na região posterior. Os diâmetros dos ferimentos e tempo de cicatrização foram avaliados durante 30 dias e os resultados foram submetidos à análise de variância e média pelo teste de Tukey. Verificou-se que os animais tratados com MSC apresentam uma cicatrização mais acelerada da lesão cutânea que do que os animais tratados com PRP. No entanto, o tratamento com PRP apresentou melhores resultados do que apenas a assepsia das lesões diariamente com solução salina ou cobrindo-os com atadura semi-permeável. Além disso, a utilização de atadura semi-permeável mantidas as lesões cutâneas de camundongos diabéticos não interfere negativamente com a cicatrização, provou ser inofensiva para usar, mas manteve as lesões cutâneas hidratadas mais do que os expostos ao meio ambiente.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Faita T., Silva V.N., Sattin W.R., Pinheiro A.O. & Ambrósio C.E. 2016. [Amniotic membrane: alternative source of mesenchymal stromal cells in several animals species.] Membrana amniótica: fonte alternativa de células-tronco mesenquimais em diversas espécies animais. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):520-525. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade de São Paulo, Rua Duque de Caxias Norte 225, Campus Fernando Costa, USP, Pirassununga, SP 13635-900, Brazil. E-maol: ceambrosio@usp.br The increasing interest for the use of stem cells in regenerative medicine, is based on their self-renewal capacity, tissue repair and immunomodulation. The therapy with stem cells is a science in formation considered a promising therapeutic alternative for the treatment of various degenerative, hereditary and inflammatory disorders. The search for alternative sources of stem cells of easy obtention and isolation has led to the study of various tissues, includng embryonic attachments such as the amniotic membrane. However for effective therapeutic application are needed studies of the characteristics in vitro and preclinical and clinical trials. Thus, the aim of this study was a literature review regarding the characterization and clinical application of stem cells from the amniotic membrane in several domestic animal species.

• Stem cells amnion mesenchymal cells células-tronco âmnio células mesenquimais

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Faita T., Silva V.N., Sattin W.R., Pinheiro A.O. & Ambrósio C.E. 2016. [Amniotic membrane: alternative source of mesenchymal stromal cells in several animals species.] Membrana amniótica: fonte alternativa de células-tronco mesenquimais em diversas espécies animais. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):520-525. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade de São Paulo, Rua Duque de Caxias Norte 225, Campus Fernando Costa, USP, Pirassununga, SP 13635-900, Brazil. E-maol: ceambrosio@usp.br O crescente interesse do uso de células-tronco (CTs) na medicina regenerativa, estão baseadas na sua capacidade de autorrenovação, reparação tecidual e imunomodulação. A terapia utilizando células-tronco é uma ciência em formação considerada uma alternativa terapêutica promissora no tratamento de diversas patologias degenerativas, hereditárias e inflamatórias. A busca por fontes alternativas de CTs que possuam características como fácil obtenção e isolamento, tem levado ao estudo dos mais variados tecidos, onde se inclui os anexos embrionários como a membrana amniótica. Porém, para sua efetiva aplicação terapêutica são necessários estudos de suas características “in vitro”, além de testes pré-clínicos e clínicos. Com isso, o objetivo deste trabalho é realizar uma revisão bibliográfica sobre a caracterização e aplicação clínica das células-tronco da membrana amniótica em diversas espécies de animais domésticos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Mansano C.F.M., Pereira M.M., Macente B.I., Makino L.C., Jacintho A.P.P., Nakaghi L.S.O. & De Stéfani M.V. 2016. [Different protein levels in the diet of bullfrog tadpoles (Lithobates catesbeianus) and its effects on the liver tissue.] Diferentes níveis protéicos na dieta de girinos de rã-touro (Lithobates catesbeianus) e seus efeitos sobre o tecido hepático. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):526-532. Centro de Aquicultura, Universidade Estadual Paulista, Via de acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: clebermansano@yahoo.com.br To verify the occurrence of liver morphological changes, bullfrog tadpoles were fed three diets: an experimental diet with 32.68% crude protein and two commercial diets with 37.92% and 57.53% crude protein. Tadpoles were distributed into a completely randomized design (CRD) with three treatments and four replications. Liver samples were collected twice, on the 30th and 60th day of the experiment. Tadpole livers were fixed in Bouin’s solution, then subjected to routine histotechnology procedures, and stained with hematoxylin - eosin (HE). Microscopic evaluation of liver tissue showed several morphological changes like disorganization and vacuolization of hepatocytes; periportal, multifocal and diffuse mononuclear inflammatory infiltrate, eosinophilic inflammatory infiltration, congestion, hemorrhage, hemolysis and necrosis. The liver changes found in this study suggest that diets used for bullfrog tadpoles, did not meet their dietary needs, what affected their homeostasis, thus compromising their health.

• Bullfrog Lithobates catesbeianus liver rã-touro fígado

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Mansano C.F.M., Pereira M.M., Macente B.I., Makino L.C., Jacintho A.P.P., Nakaghi L.S.O. & De Stéfani M.V. 2016. [Different protein levels in the diet of bullfrog tadpoles (Lithobates catesbeianus) and its effects on the liver tissue.] Diferentes níveis protéicos na dieta de girinos de rã-touro (Lithobates catesbeianus) e seus efeitos sobre o tecido hepático. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):526-532. Centro de Aquicultura, Universidade Estadual Paulista, Via de acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: clebermansano@yahoo.com.br ara verificação da ocorrência de alterações morfológicas no fígado, foram coletados dez animais de cada dieta, no 30º dia (1º período experimental) e no 60º dia (2º período experimental), sendo esse, o último dia do período experimental e início do clímax da metamorfose. Os girinos foram distribuídos em delineamento experimental inteiramente casualizado (DIC) com três tratamentos: dieta experimental com 32,68% de proteína bruta e duas dietas comerciais com 37,92% e 57,53% de proteína bruta. Os órgãos coletados foram fixados em solução de Bouin e depois submetidos às práticas da rotina histotecnológica e coradas com hematoxilina – Eosina (HE). Na avaliação microscópica do fígado foram encontradas diversas alterações morfológicas como: Desorganização e vacuolização de hepatócitos, infiltrado inflamatório mononuclear periportal, multifocal e difuso, infiltrado inflamatório eosinofílico, congestão, hemorragia, hemólise e necrose. As alterações hepáticas encontradas neste estudo sugerem que as dietas utilizadas para os girinos de rã-touro, não atenderam suas necessidades dietéticas, afetando a homeostasia dos mesmos, comprometendo assim, sua sanidade.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Pinto M.G.F., Favaron P.O., Alcântara D., Anunciação A.R.A., Miglino M.A., Borelli V. & Filho A.F. 2016. Patterns of arterial vascularization in swine hearts. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):417-422. Setor de Anatomia de Animais Domésticos e Selvagens, Departamento de Cirurgia, Faculdade de Medicina Veteronária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, Butantã, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: phelipe.favaron@yahoo.com.br This study aimed to characterize the patterns of arterial vascularization in swine hearts. Ninety swine hearts were submitted to the Spalteholz diaphanization technique in order to dissect the coronary arteries. Three types of arterial vascularization patterns were characterized through the behaviorof the rami circumflexus and interventricularis, namely: balanced, right and left types. The balanced pattern was the most frequently (42.2%); in this case, the rami circumflexus and interventricularis occupied their respective sulci. The right type (40%) was further categorized into three vascularization subtypes. In the first, ramus circumflexus dexter branched from the ramus interventricularis subsinuosus. In the second, the arteria coronaria dextra branched from ramus interventricularis subsinuosus and ramus circumflexus. In the third model, arteria coronaria sinister branched from ramus interventricularis paraconalis. The left type (17.7%) exhibited two subtypes. In the first, ramus interventricularis paraconalis ran through the entire corresponding sulcus and the ventral third of sulcus interventricularis subsinuosus, and ramus interventricularis subsinuosus occupied the dorsal and middle third of its respective sulcus. In the second, ramus interventricularis subsinuosus branched from arteria coronaria dextra and ran through the dorsal and medium thirds of its respective sulcus, and the ventral third was occupied by the collateral branch of ramus circumflexus sinister. Our results reinforce the thesis that the blood distribution system through the coronary artery in swine is similar to human, not only in qualitative but also by a quantitative comparison.

• Heart coronary circulation animal models coração circulaçãoo coronária modelos animais

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Pinto M.G.F., Favaron P.O., Alcântara D., Anunciação A.R.A., Miglino M.A., Borelli V. & Filho A.F. 2016. Patterns of arterial vascularization in swine hearts. [Padrões de vascularização arterial em corações de suínos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):417-422. Setor de Anatomia de Animais Domésticos e Selvagens, Departamento de Cirurgia, Faculdade de Medicina Veteronária e Zootecnia, Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando Marques de Paiva 87, Cidade Universitária, Butantã, São Paulo, SP 05508-270, Brazil. E-mail: phelipe.favaron@yahoo.com.br Este estudo teve como objetivo caracterizar os padrões de vascularização arterial em corações de suínos. Para tanto, 90 corações de suínos foram submetidos à técnica de diafanização de Spalteholz com a finalidade de dissecar as artérias coronárias. Através do comportamento dos rami circumflexus e interventricularis caracterizou-se três modalidades de vascularização arterial do coração de suínos, sendo eles os tipos equilibrado, direito e esquerdo. O equilibrado foi observado com maior frequência (42,2%), neste caso os rami circumflexus e interventricularis das artérias coronárias ocupavam seus respectivos sulcos. O tipo direito (40%) apresentou três subtipos de vascularização. No primeiro o ramus circumflexus dexter ramificava-se formando o ramus interventricularis subsinuosus. No segundo, a arteria coronaria dextra emitia o ramus interventricularis subsinuosus e ramus circunflexus. E no terceiro modelo, da arteria coronaria sinistra emergia o ramus interventricularis paraconalis. O tipo esquerdo (17,7%) apresentou dois subtipos. No primeiro, o ramus interventricularis paraconalis percorria todo o sulco correspondente e o terço ventral do sulcus interventricularis subsinuosus, o ramus interventricularis subsinuosus ocupava os terços dorsal e médio do seu respectivo sulco. No segundo, o ramus interventricularis subsinuosus oriundo da arteria coronaria dextra percorria apenas os terços dorsal e médio do seu respectivo sulco, ficando o terço ventral ocupado por colateral do ramus circumflexus sinister. Nossos resultados reforçam a tese de que a distribuição do suprimento sanguíneo pela artéria coronária em suínos é semelhante ao humano, não apenas de maneira qualitativa, mas também do ponto de vista quantitativo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Eleotério R.B., Sepúlveda R.V., Reis E.C.C., Valente F.L. & Borges A.P.B. 2016. Isolation, expansion and differentiation of mesenchymal stromal cells from rabbits’ bone marrow. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):423-430. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Rua Peter Henry Rolphs s/n, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: andrea@ufv.br Tissue engineering has been a fundamental technique in the regenerative medicine field, once it permits to build tri-dimensional tissue constructs associating undifferentiated mesenchymal cells (or mesenchymal stromal cells - MSCs) and scaffolds in vitro. Therefore, many studies have been carried out using these cells from different animal species, and rabbits are often used as animal model for in vivo tissue repair studies. However, most of the information available about MSCs harvesting and characterization is about human and murine cells, which brings some doubts to researchers who desire to work with a rabbit model in tissue repair studies based on MSCs. In this context, this study aimed to add and improve the information available in the scientific literature providing a complete technique for isolation, expansion and differentiation of MSCs from rabbits. Bone marrow mononuclear cells (BMMCs) from humerus and femur of rabbits were obtained and to evaluate their proliferation rate, three different culture media were tested, here referred as DMEM-P, DMEM´S and α-MEM. The BMMCs were also cultured in osteogenic, chondrogenic and adipogenic induction media to prove their multipotentiality. It was concluded that the techniques suggested in this study can provide a guideline to harvest and isolate MSCs from bone marrow of rabbits in enough amount to allow their expansion and, based on the laboratory experience where the study was developed, it is also suggested a culture media formulation to provide a better cell proliferation rate with multipotentiality preservation.

• Mesenchymal stromal cells bone marrow stem cells cell therapy regenerative medicine células tronco mesenquimais medula óssea terapia celular medicina regenerativa

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Eleotério R.B., Sepúlveda R.V., Reis E.C.C., Valente F.L. & Borges A.P.B. 2016. Isolation, expansion and differentiation of mesenchymal stromal cells from rabbits’ bone marrow. [Isolamento, expansão e diferenciação de celulas tronco mesenquimais oriundas da medula óssea de coelhos.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):423-430. Departamento de Veterinária, Universidade Federal de Viçosa, Rua Peter Henry Rolphs s/n, Campus Universitário, Viçosa, MG 36570-000, Brazil. E-mail: andrea@ufv.br A engenharia de tecidos tem sido uma técnica fundamental no campo da medicina regenerativa, uma vez que permite a criação de peças teciduais tri-dimensionais por meio da associação de células mesenquimais indiferenciadas (ou células estromais mesenquimais - CEMs) e moldes de biomateriais in vitro. Assim, muitos estudos têm sido realizados utilizando estas células oriundas de diferentes espécies animais, e os coelhos são frequentemente utilizados como um modelo animal para estudos in vivo de reparação tecidual. No entanto, a maioria das informações disponíveis sobre a coleta e caracterização de CEMs referem-se às células humanas e murinas, o que traz algumas dúvidas para pesquisadores que desejam trabalhar com coelhos em estudos de reparação de tecidos baseados em CEMs. Neste contexto, o presente estudo objetivou contribuir e aprimorar as informações disponíveis na literatura científica fornecendo uma técnica completa para o isolamento, expansão e diferenciação das MSCs de coelhos. Células mononucleares da medula óssea (CMMOs) do úmero e fêmur de coelhos foram obtidas e, para avaliar sua taxa de proliferação, três meios de cultura diferentes foram testadas, aqui referidos como DMEM-P, DMEM’S e α-MEM. As CMMOs também foram cultivadas em meios de indução osteogênico, condrogênico, e linhagens adipogênico para provar a sua multipotencialidade. Concluiu-se que as técnicas sugeridas neste estudo podem fornecer um guia para a coleta e isolamento de CEMs da medula óssea de coelhos em quantidade suficiente para permitir a sua expansão e, com base na experiência de laboratório onde o estudo foi desenvolvido, é também sugerida uma formulação de meio de cultivo para proporcionar uma melhor taxa de proliferação celular com preservação da multipotencialidade.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Farias T.H.V., Pereira N.L., Pádua S.B., Alves L.O., Sakabe R., Belo M.A.A. & Pilarski F. 2016. Na2EDTA anticoagulant impaired blood samples from the teleost Piaractus mesopotamicus. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):431-435. Centro de Aquicultura da Universidade Estadual Paulista, Rodovia Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: lapoa_caunesp@hotmail.com The present study aimed to evaluate the effects of Na heparin and Na2EDTA on blood of Piaractus mesopotamicus (360.7±42.4g, 26.4±1.0cm). Twenty fishes were sampled in two experiment trials, ten for erythrocyte fragility analysis and ten for hematologic and plasma biochemical study. The blood collected by venous-caudal puncture was fractioned and stored in anticoagulants solution: Na2EDTA 10%, Na2EDTA 3%, Na heparin 5000 IU and Na heparin 100 IU. Plasmatic levels of calcium presented in the Na2EDTA stored samples were about 80% lower than both heparin groups. Blood samples of P. mesopotamicus stored with Na2EDTA demonstrated increase in the hematocrit and MCV, and decrease in MCHC. The dose-response effect was observed in this study. The results are reinforced by the higher levels of plasmatic protein and hemolysis presented in the Na2EDTA 10% stored blood, confirming the deleterious effect of this anticoagulant treatment on the quality of blood samples. Na2EDTA is not indicated to store P. mesopotamicus blood samples, but sodium heparin at 100 IU is the most recommended anticoagulant, since this treatment presented the lower rate of alterations in the stored blood.

• Fish hematology blood clotting Heparin Piaractus mesopotamicus hematologia de peixes coagulação sanguínea Heparina pacus

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Farias T.H.V., Pereira N.L., Pádua S.B., Alves L.O., Sakabe R., Belo M.A.A. & Pilarski F. 2016. Na2EDTA anticoagulant impaired blood samples from the teleost Piaractus mesopotamicus. [Anticoagulante Na2EDTA danifica amostras de sangue do teleósteo Piaractus mesopotamicus.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):431-435. Centro de Aquicultura da Universidade Estadual Paulista, Rodovia Paulo Donato Castellane s/n, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: lapoa_caunesp@hotmail.com O presente estudo teve por objetivo avaliar os efeitos da heparina sódica e Na2EDTA no sangue de Piaractus mesopotamicus (360,7±42,4g, 26,4±1,0cm). Foram amostrados vinte peixes em dois ensaios experimentais, sendo dez peixes utilizados para análise da fragilidade dos eritrócitos e dez peixes para análise dos parâmetros hematológicos e estudo bioquímico do plasma. O sangue coletado por punção veno-caudal foi aliquotado e armazenado em diferentes soluções anticoagulantes: Na2EDTA 10%, Na2EDTA 3%, heparina sódica 5.000 UI e heparina sódica 100 UI. Níveis plasmáticos de cálcio apresentados nas amostras armazenados em Na2EDTA diminuíram cerca de 80% em relação aos dois grupos armazenados com heparina. Amostras de sangue de pacus armazenados com Na2EDTA demonstraram aumento do hematócrito e VCM, e diminuição na CHCM. O efeito dose-resposta foi observado neste estudo. Estes resultados são reforçados pelos níveis mais elevados de proteína plasmática e hemólise apresentado no sangue armazenado com Na2EDTA 10%, o que confirma o efeito deletério desse tratamento anticoagulante na qualidade de amostras de sangue. Na2EDTA não é indicada para armazenar amostras de sangue de P. mesopotamicus, e heparina sódica a 100 UI é o anticoagulante mais recomendado, uma vez que este tratamento apresentou a menor taxa de alterações no sangue armazenado.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Vieira L.G., Santos A.L.Q., Moura L.R., Orpinelli S.R.T., Pereira K.F. & Lima F.C. 2016. Morphology, development and heterochrony of the carapace of Giant Amazon River Turtle, Podocnemis expansa (Testudines, Podocnemidae). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):436-446. Laboratório de Ensino e Pesquisa em Animais Silvestres, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Uberlândia, Av. Amazonas 2245, Jardim Umuarama, Uberlândia, MG 38405-302, Brazil. E-mail: luceliabio@yahoo.com.br With aim to report the ontogeny of the osseous elements of the carapace in Peurodiras, 62 embryos and 43 nestlings of Podocnemis expansa were collected and submitted to the clearing and staining technique of bones and cartilages and study of serial histological slices. The carapace has mixed osseous structure of endo and exoskeleton, formed by 8 pairs of costal bones associated with ribs, 7 neural bones associated with neural arches, 11 pairs of peripheral bones, 1 nuchal, 1 pygal and 1 suprapygal. This structure begins its formation in the beginning of stage 16 with the ossification of the periosteal collar of the ribs. With exception of the peripheral bones, the other ones begin their ossification during the embrionary period. In histologic investigation it was found that the costal bones and neural bones have a close relation to the endoskeleton components, originating themselves as intramembranous expansions of the periosteal collar of the ribs and neural arches, respectively. The condensation of the mesenchyme adjacent to the periosteal collar induces the formation of spikes that grow in trabeculae permeated by fibroblasts below the dermis. The nuchal bone also ossifies in an intramembranous way, but does not show direct relation to the endoskeleton. Such information confirms those related to the other Pleurodira, mainly with Podocnemis unifilis, sometimes with conspicuous variations in the chronology of the ossification events. The formation of dermal plates in the carapace of Pleurodira and Criptodira follow the same pattern.

• Carapace Giant Amazon River Turtle Podocnemis expansa Testudines Podocnemidae shell ontogeny carapaça Tartagura da Amazônia casco ossificação tartaruga

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Vieira L.G., Santos A.L.Q., Moura L.R., Orpinelli S.R.T., Pereira K.F. & Lima F.C. 2016. Morphology, development and heterochrony of the carapace of Giant Amazon River Turtle, Podocnemis expansa (Testudines, Podocnemidae). [Morfologia, desenvolvimento e heterocronia da carapaça da Tartagura da Amazônia, Podocnemis expansa (Testudines, Podocnemidae).] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):436-446. Laboratório de Ensino e Pesquisa em Animais Silvestres, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Uberlândia, Av. Amazonas 2245, Jardim Umuarama, Uberlândia, MG 38405-302, Brazil. E-mail: luceliabio@yahoo.com.br Com objetivo de relatar a ontogenia dos elementos ósseos da carapaça em Pleurodiras, coletaram-se 62 embriões e 43 filhotes de Podocnemis expansa que foram submetidos à técnica de clareamento e coloração dos ossos e cartilagens e pelo estudo cortes histológicos seriados. A carapaça possui estrutura óssea mista de endo e exoesqueleto, sendo formada por 8 pares de ossos costais associados às costelas, 7 ossos neurais associados aos arcos vertebrais, 11 pares de ossos periféricos, 1 nucal, 1 pigal e 1 supra-pigal. Esta estrutura começa sua formação no início do estágio 16 com a ossificação do colar periostal das costelas. Com exceção dos ossos periféricos, os demais iniciam sua ossificação durante o período embrionário. A investigação histológica explicitou que os ossos costais e neurais possuem uma estreita relação com componentes do endoesqueleto, originando-se como expansões intramembranosas do colar periostal das costelas e dos arcos neurais, respectivamente. A condensação do mesenquima adjacente ao colar periostal induz a formação de espiculas que crescem em trabéculas permeadas por fibroblastos abaixo da derme. O osso nucal, também se ossifica de maneira intramembranosa mas não apresenta relação direta com o endoesqueleto. Tais informações corroboram àquelas relatadas para os demais Pleurodiras, principalmente com Podocnemis unifilis, outrora com variações conspícuas na cronologia dos eventos de ossificação. A formação das placas dérmicas da carapaça em Pleurodira e Criptodira seguem um mesmo padrão.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Souza L.A., Silva L.A.F., Oliveira B.J.N.A., Lacerda E.P.S., Beletti M.E., Lima A.P., Dias T.A. & Eurides D. 2016. [Immunomagnetic method associated with MesenCult® medium to obtain bone marrow mononuclear cells from rabbits negative for CD45 monoclonal antibody.] Método imunomagnético associado ao meio MesenCult® na obtenção de células mononucleares da medula óssea de coelhos negativas para o anticorpo monoclonal CD45. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):339-344. Departamento de Medicina Veterinária, Escola de Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Goiás, Campus Samambaia, Avenida Esperança s/n, Campus Samambaia, Goiânia, GO 74690-900, Brazil. E-mail: souza_vet@yahoo.com.br The objective of this study was to describe guidelines for the isolation of bone marrow mononuclear cells from rabbits, followed by cell purification by negative depletion with CD45 monoclonal antibody, and further expansion in MesenCult® medium. Ten adult male New Zealand White rabbits, age average of 1.0±0.2 years and weighting 3.5±0.24kg, were used to obtain a standardized method. The mononuclear cells of the bone marrow were isolated with Ficoll-paque® density gradient centrifugation, and the cell purification and acquisition was completed by negative depletion with CD45 monoclonal antibody in immunomagnetic base. The cell population obtained was expanded in MesenCult® medium. Through isolation with Ficoll-paque® density gradient was possible to obtain an average yield of 7.31x106 cells/mL. After purification and acquisiton of potential mesenchymal stem cells by the immunomagnetic base, there was a yield decrease to 2.28x106 cells/mL; however the expansion process was increased in cell culture. The results indicated that cells obtained from the mononuclear fraction of bone marrow and cultivated in vitro were capable to generate adherent cells 24 hours after culture, with predominance of fibroblastoid cells suggestive of mesenchymal stem cells. It can be concluded that mesenchymal stem cells can be achieved with purified rabbit bone marrow mononuclear cells through the immunomagnetic method, as the MesenCult® medium provides a suitable environment for a quick in vitro expansion, and the number of passages exerts negative influence on the morphological characteristics.

• Bone marrow stem cells medula óssea células-tronco mesenquimais

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Souza L.A., Silva L.A.F., Oliveira B.J.N.A., Lacerda E.P.S., Beletti M.E., Lima A.P., Dias T.A. & Eurides D. 2016. [Immunomagnetic method associated with MesenCult® medium to obtain bone marrow mononuclear cells from rabbits negative for CD45 monoclonal antibody.] Método imunomagnético associado ao meio MesenCult® na obtenção de células mononucleares da medula óssea de coelhos negativas para o anticorpo monoclonal CD45. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(4):339-344. Departamento de Medicina Veterinária, Escola de Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Goiás, Campus Samambaia, Avenida Esperança s/n, Campus Samambaia, Goiânia, GO 74690-900, Brazil. E-mail: souza_vet@yahoo.com.br O objetivo detse artigo é de descrever um protocolo de isolamento das células mononucleares da medula óssea de coelhos, seguido de purificação celular por depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 e posterior expansão em meio de cultura MesenCult®. Dez coelhos machos adultos, da raça Nova Zelândia, com idade média de 1,0±0,2 anos e peso médio 3,5±0,24kg, foram utilizados para padronização da metodologia. O isolamento das células mononuclares da medula óssea foi realizado pelo gradiente de densidade Ficoll-paque® e a purificação e obtenção das células- pela depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 em base imunomagnética. A população celular obtida foi expandida posteriormente em meio de cultura MesenCult®. No isolamento pelo gradiente de icoll-Paque® foi obtido um rendimento médio de 7,31x106 células/mL. Após purificação e obtenção das possíveis células-tronco mesenquimais pela base imunomagnética, houve um decréscimo do rendimento para 2,28x106 células/mL, mas o processo de expansão foi incrementado pelo cultivo celular. Os resultados indicaram que as células obtidas da fração mononuclear da medula óssea, cultivadas in vitro foram capazes de gerar células aderentes 24 horas após o cultivo, com predominância de células fibroblastóides sugestivas de células-tronco mesenquimais. Concluiu-se que a obtenção de células-tronco mesenquimais pode ser alcançada após purificação das células mononucleares da medula óssea de coelhos pelo método imunomagético, o meio de cultura MesenCult® proporciona um ambiente adequado para a rápida expansão in vitro e o número de passagens exerce influência negativa sobre as características morfológicas das células.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Soares M.P., Pavarini S.P., Barros S.S., Adrien M.L., Quevedo P.S., Schild A.L. & Driemeier D. 2016. Ultrastructural lesions in the myocardium and kidneys of rabbits in experimental acute Amorimia exotropica poisoning. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):161-166. Laboratório Regional de Diagnóstico, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Pelotas, Campus Capão do Leão, Pelotas, RS 96010-900, Brazil. E-mail: gmpsoares@gmail.com Amorimia exotropica is an important plant associated with sudden death in cattle in Southern Brazil. In order to understand the mechanisms by which A. exotropica causes acute lesions in the heart and kidney of intoxicated animals, an experiment was conducted to determine the histopathology and ultrastructure of myocardial and renal lesions of intoxicated rabbits. After receiving 18g/kg of dried plant, six rabbits died suddenly. At necropsy, the liver was swollen and no other macroscopic lesions were observed. Histologically, centrolobular and midzonal hepatocytes were vacuolated. These vacuoles were strong PAS stained positive, suggesting that they corresponded to glycogen accumulations. In some regions of the ventricular septum and ventricles were found vacuoles of different sizes and the kidneys of two rabbits showed vacuolar degeneration on distal convoluted tubules. Ultrastructurally, the myocardium had cardiomyocytes swelling with separation of myofibrils bundles and rupture and disorganization of the sarcomeres. The mitochondria displayed swelling, disorganization, disruption of the mitochondrial cristae, and electron-dense matrix. Some mitochondria exhibited eccentric projections of their membranes with disruption of both outer and inner membranes. The sarcoplasmic reticulum had no alterations, whereas the T-tubule system was occasionally dilated and ruptured. The kidneys had mitochondrial swelling with disorganization and disruption of the mitochondrial cristae. The vacuoles result from the swelling of the endoplasmatic reticulum and usually were located between two basolateral infoldings and mitochondria, occurring preferentially around the nucleus. The myocytes and T system damages induced by A. exotropica result in acute heart failure and death. Furthermore, this mechanism of cardiotoxicity may be common to all plant containing monofluoroacetate.

• Poisonous plants Amorimia exotropica monofluoroacetate plant poisoning sudden death plantas tóxicas monofluoroacetato intoxicação por plantas morte súbita

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Soares M.P., Pavarini S.P., Barros S.S., Adrien M.L., Quevedo P.S., Schild A.L. & Driemeier D. 2016. Ultrastructural lesions in the myocardium and kidneys of rabbits in experimental acute Amorimia exotropica poisoning. [Lesões ultra-estruturais no miocárdio e rins de coelhos na intoxicação experimental aguda por Amorimia exotropica.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):161-166. Laboratório Regional de Diagnóstico, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal de Pelotas, Campus Capão do Leão, Pelotas, RS 96010-900, Brazil. E-mail: gmpsoares@gmail.com Amorimia exotropica é uma importante planta associada à morte súbita em bovinos no Sul do Brasil. Visando compreender os mecanismos pelos quais a A. exotropica provoca lesões agudas no coração e rins de animais intoxicados, foi conduzido uma intoxicação experimental em coelhos para determinar a histopatologia e ultraestrutura da lesão miocárdica e renal. Depois de receber 18g/kg de planta seca, seis coelhos morreram subitamente. Na necropsia, o fígado apresentava acentuação do padrão lobular. Os demais órgãos não apresentaram alterações macroscópicas. Histologicamente, os hepatócitos centrolobulares e mediozonais estavam vacuolizados e coraram-se fortemente com PAS. Em algumas regiões foram observados vacúolos de diferentes tamanhos no septo ventricular e ventrículos e os rins de dois coelhos mostraram degeneração vacuolar nos túbulos contorcidos distais. Ultraestruturalmente, o miocárdio apresentou cardiomiócitos tumefeitos com separação das bandas de miofibrilas e ruptura e desorganização dos sarcômeros. As mitocôndrias estavam tumefeitas exibindo desorganização das cristas mitocondriais, e a matriz estava eletrodensa. Algumas mitocôndrias exibiam projecções excêntricas das suas membranas com ruptura das membranas externas e internas. O retículo sarcoplasmático não tinha alterações, e os túbulos T estavam ocasionalmente dilatados e rompidos. Os rins apresentavam tumefação mitocondrial com desorganização e ruptura das cristas mitocondriais. Os vacúolos resultam da expansão do retículo endoplasmático e foram localizados geralmente entre duas invaginações basolaterais e as mitocôndrias, ocorrendo preferencialmente ao redor do núcleo. A lesão nos miócitos e o dano no sistema T induzido pela A. exotropica resultam na insuficiência cardíaca aguda e morte. Este mecanismo de cardiotoxicidade pode ser comum a todas as plantas contendo monofluoroacetato.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Silva M.C.R., Arandas M.J.G., Lima-Junior N.B., Amanajás-Júnior F.C.A. & Santos K.R.P. 2016. [Histomorphometric analysis of cardiomyocytes and collagen deposition in the heart muscle of ovariectomized rats.] Análise histomorfométrica dos cardiomiócitos e deposição de colágeno no músculo cardíaco de ratas ooforectomizadas. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):216-220. Área de Morfologia, Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Dois Irmãos, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: julianaarandas@hotmail.com This study aimed to evaluate the effect of oophorectomy on the morphometric variables of cardiomyocytes and quantification collagen in Wistar rats. Twenty rats were used and divided into two groups: GI - ovariectomized and GII - sham-ovariectomized. After recovery from anesthesia the animals were housed in separate cages and under the conditions of light / dark cycle 12/12h for a period of six months. After the experimental period, the animals were anesthetized, the heart removed and immersed in 10% formaldehyde. The fragments of the ventricles were subjected to histological analysis and stained with hematoxylin and eosin. Histomorphometric analysis (cell area and nuclear area and volume) were performed by light microscopy and ImageJ software version 1.44. The data were submitted to ANOVA and when significant, complemented by Student’s t test (p<0.001). There was a significant decrease in cellular and nuclear areas of the GI cardiomyocytes compared to GII and the area occupied by collagen was greater in cardiac muscle GI, when compared to GII. Therefore, it is concluded that the changes observed in the GI group cardiomyocytes, suggest a higher apoptotic activity in this group, due to decreased serum estrogen levels caused by ovariectomy and increased area occupied by collagen in oophorectomized group is associated the cardioprotective effect of estrogen.

• Heart muscle cardiac myocytes collagen coração miócitos cardíacos colágeno

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Silva M.C.R., Arandas M.J.G., Lima-Junior N.B., Amanajás-Júnior F.C.A. & Santos K.R.P. 2016. [Histomorphometric analysis of cardiomyocytes and collagen deposition in the heart muscle of ovariectomized rats.] Análise histomorfométrica dos cardiomiócitos e deposição de colágeno no músculo cardíaco de ratas ooforectomizadas. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(3):216-220. Área de Morfologia, Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros s/n, Dois Irmãos, Recife, PE 52171-900, Brazil. E-mail: julianaarandas@hotmail.com Esse estudo objetivou avaliar o efeito da ooforectomia sob os parâmetros histomorfométricos dos cardiomiócitos e quantificação de colágeno em ratas Wistar. Vinte ratas foram utilizadas e separadas em dois grupos: GI – ooforectomizada e GII – sham-ooforectomizada. Após a recuperação anestésica os animais foram acomodados em gaiolas e separados nas condições de ciclo claro/escuro 12/12h por um período de 6 meses. Passado o período experimental, os animais foram anestesiados, o coração retirado e mergulhado em formaldeído a 10%. Os fragmentos dos ventrículos foram submetidos ao processamento histológico e corados com hematoxilina e eosina. As análises histomorfométricas (área celular e área e volume nuclear) foram realizadas pelo microscópio de luz e software ImageJ versão 1.44. Os dados foram submetidos à análise ANOVA e quando significantes, complementados pelo teste t de student (p<0,001). Observou-se uma diminuição significativa das áreas celular e nuclear dos cardiomiócitos do grupo GI quando comparado ao grupo GII, bem como a área ocupada, pelo colágeno, no músculo cardíaco foi maior em GI, quando comparado a GII. Diante disso, conclui-se que as alterações observadas nos cardiomiócitos do grupo GI, sugerem uma maior atividade apoptótica nesse grupo, devido à diminuição dos níveis séricos do estrógeno provocado pela ooforectomia e o aumento da área ocupada pelo colágeno, no grupo ooforectomizado, está associada ao efeito cardioprotetor do estrógeno.