PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ribeiro E.L., Oliveira A.G.G., Laguardia-Nascimento M., Mata C.P.S.M.N., Reis J.K.P. & Fonseca Jr A.A. 2016. [Comparative study and validation of three quantitative PCR (qPCR) techniques for the diagnosis of African Swine Fever.] Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR quantitativa (qPCR) para diagnóstico de Peste Suína Africana. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):473-478. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Pres. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: jenner@ufmg.br This study evaluated the performance of three real time PCR techniques (qPCR) for the diagnosis of African Swine Fever in tissue samples. The three chosen techniques are based on amplification of viral protein VP72 gene sequences and are recommended by OIE (PSA-OIE), the United States official laboratories (PSA-USDA) and the European Union (PSA-EU). Target sequences of the viral DNA were inserted into synthetic plasmid, which served as a positive control for the standardization of techniques and optimization of reagents, determination of limits of detection and performance verification testing. To gauge repeatability and reproducibility of techniques, standard procedures were repeated on different days by two analysts and by changing mix reagents and equipment, and also by another laboratory. Analytical sensitivity tests were done with reference samples provided by an OIE reference laboratory and analytical and diagnostic specificity were tested with negative samples. The PSA-EU and PSA-USDA techniques were more advantageous to use because of lower concentration of oligos used. There were no significant differences in quantitative results varying the days of tests, analysts, equipment and the mix of reagents. The three techniques had high analytical and diagnostic specificity and sensitivity. The three qPCR techniques were considered equivalent and effective and can be adopted by any laboratory for issuing official diagnosis of African Swine Fever.

• African swine fever Peste Suína Africana

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ribeiro E.L., Oliveira A.G.G., Laguardia-Nascimento M., Mata C.P.S.M.N., Reis J.K.P. & Fonseca Jr A.A. 2016. [Comparative study and validation of three quantitative PCR (qPCR) techniques for the diagnosis of African Swine Fever.] Estudo comparativo e validação de três técnicas de PCR quantitativa (qPCR) para diagnóstico de Peste Suína Africana. Pesquisa Veterinária Brasileira 36(6):473-478. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Escola de Veterinária, Universidade Federal de Minas Gerais, Av. Pres. Antônio Carlos 6627, Pampulha, Belo Horizonte, MG 31270-901, Brazil. E-mail: jenner@ufmg.br Este estudo verificou o desempenho de três técnicas de PCR quantitativa (Real-Time) para o diagnóstico de Peste Suína Africana, uma doença exótica no Brasil, a partir de amostras de tecidos. As três técnicas escolhidas baseiam-se na amplificação de sequências do gene da proteína viral VP72 e são preconizadas, cada uma, por laboratórios oficiais da OIE (PSA-OIE), dos Estados Unidos (PSA-USDA) e da União Europeia (PSA-EU), respectivamente. Oligonucleotídeos iniciadores e sondas de hidrólise marcadas com fluoróforos foram sintetizados conforme a literatura de referência consultada. Sequências-alvo do DNA viral foram inseridos em plasmídeo sintético, os quais serviram de controle positivo para a padronização das técnicas e otimização de reagentes, determinação dos limites de detecção e testes de verificação de desempenho. Para aferição de repetibilidade e reprodutibilidade das técnicas, as técnicas padronizadas foram repetidas em dias diferentes, por um segundo analista, com alteração no mix comercial de reagentes utilizado e em um equipamento diferente, e também por outro laboratório. Realizaram-se, ainda, provas de sensibilidade analítica com amostras de DNA viral de referência e especificidade analítica e diagnóstica, com amostras negativas. As técnicas de PSA-EU e PSA-USDA apresentaram-se mais vantajosas quanto ao consumo de iniciadores. Não houve diferenças significativas nos resultados quantitativos variando-se os dias dos ensaios, os analistas, os equipamentos e o mix de reagentes. As três técnicas apresentaram alta especificidade analítica e diagnóstica e sensibilidade diagnóstica. As três técnicas de qPCR mostraram-se eficazes para serem adotadas por um mesmo laboratório para emissão de diagnósticos oficiais de Peste Suína Africana.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Machado L.S., Santos F.F., Santos L.M.M., Tortelly R., Pimentel J.C., Sesti L., Pereira V.L.A. & Nascimento E.R. 2016. Transmission, serologic and tissue responses in chickens vaccinated with Mycoplasma gallisepticum F strain (MG-F). Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):401-404. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Pública, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal Fluminense, Rua Dr. Vital Brazil Filho 64, Vital Brazil, Niterói, RJ 24230-340, Brazil. E-mail: elmiro@vm.uff.br MG-F protects chickens from MG Mycoplasmosis and monitoring is done by serology (SAR and ELISA) and PCR. Histopathology is used to evaluate bird response to MG. This study evaluated MG-F profile vaccination in SPF chicken. This trial used 100 chickens, being 40 unvaccinated (G1), 40 eye-drop vaccinated at 8 weeks of age with MG-F ( Ceva Animal Health , São Paulo , SP , Brazil ) (G2) and 20 immunized by contact (G3) . Samples were obtained on the 8th, 12th, 15th, 18th, 20th and 24th week for SAR, ELISA and PCR. Fragments of trachea and air sac, for microscopy, were got after necropsies on the 15th and 24th week. Up to 12 weeks there was no significant difference among groups by SAR. SAR reactions appeared from the 15th week with these averages: G1 (1.7, 1.76 , 0.1, 0.15) , G2 (7.81, 7.65, 8.25, 6.29) and G3 (8.1, 8.5, 9.5, 6.16), while by ELISA it occurred after the 18th week with optical densities averages: G1 (0.19, 0.14, 0.16) , G2 (0.47, 0.45, 0.41) and G3 (0.55, 0.51, 0.51) . Positivity in G3 by PCR occurred seven weeks after exposure. At the 15th week the air sac score means were 0.20, 0.55, and 0.32 and 24th week were 0.15, 0.80 and 0.66 (p>0.05). For trachea, G2 (0.48) yielded higher score average than G1 (0.10) and G3 (0.00) on the 15th week. Changes in G3 were seen only at 24th week, being this average (1.00) significantly different (p<0,05) from G1 (0.08) and G2 (0.46). SAR and PCR detected MG-F in G3 earlier than ELISA. Higher tracheal changes for G2 and G3 as compared to G1 could be ascribed to MG-F vaccine infection.

• Mycoplasma gallisepticum F strain transmissibility serology Mycoplasma gallisepticum cepa F MG-F transmissão sorologia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Machado L.S., Santos F.F., Santos L.M.M., Tortelly R., Pimentel J.C., Sesti L., Pereira V.L.A. & Nascimento E.R. 2016. Transmission, serologic and tissue responses in chickens vaccinated with Mycoplasma gallisepticum F strain (MG-F). [Transmissão, resposta sorológica e tecidual de poedeiras vacinadas com Mycoplasma gallisepticum cepa F.] Pesquisa Veterinária Brasileira 36(5):401-404. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Saúde Pública, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal Fluminense, Rua Dr. Vital Brazil Filho 64, Vital Brazil, Niterói, RJ 24230-340, Brazil. E-mail: elmiro@vm.uff.br Mycoplasma gallisepticum cepa F (MG-F) é altamente utilizada em vacinação de poedeiras. MG-F confere bons níveis de proteção às galinhas, deslocando MG de campo ou diminuindo o número deles no trato respiratório. Soroaglutinação Rápida (SAR), ELISA e PCR são testes no monitoramento da micoplasmose, enquanto a histopatologia, mesmo não sendo rotineira, é usada para avaliar a resposta das aves à infecção por MG. O objetivo deste estudo foi avaliar a transmissibilidade, soroconversão e alterações teciduais de MG-F em galinhas. Um total de 100 galinhas SPF foi utilizado, sendo 40 delas não vacinadas (G1), 40 vacinadas na 8ª semana de idade com MG-F (Ceva Saúde Animal, São Paulo/SP, Brasil) (G2) e 20 imunizadas por contato com aves do G2 (G3). Soros e suabes traqueais foram obtidos na 8ª, 12ª, 15ª, 18ª, 20ª, 24ª semana para monitoramento por SAR, ELISA e PCR. Fragmentos de traqueia e saco aéreo, para microscopia, foram feitas após necropsias na 15ª e 24ª semana. Até a 12ª semana não houve diferença significativa entre os grupos pela SAR. Houve reação a SAR a partir da 15ª semana com as seguintes médias: G1 (1,7; 1,76; 0,1; 0,15), G2 (7,81; 7,65; 8,25; 6,29) e G3 (8,1; 8,5; 9,5; 6,16), enquanto por ELISA a soroconversão ocorreu a partir da 18ª semana com médias de densidades óticas de G1 (0,19; 0,14; 0,16), G2 (0,47; 0,45; 0,41) e G3 (0,55; 0,51; 0,51). Todas as aves do G3 apresentaram positividade pela PCR sete semanas após exposição. Não houve diferença significativa entre as medias dos escores de saco aéreo entre os grupos, na 15ª semana (0,20; 0,55; 0,32) e 24ª semana (0,15; 0,80 e 0,66). Em relação à traqueia, G2 apresentou média maior na 15ª semana (0,48) que G3 (0,00) e G1 (0,10). Alterações em G3 foram observadas somente na 24ª semana onde as médias foram de 0,08(G1); 0,46 (G2) e 1,00 (G3), havendo significância (p<0,05) entre G1 e G3. SAR e PCR foram capazes de detectar a transmissão de MG-F de forma precoce em relação ao ELISA. Em relação ao G1 (controle negativo) as reações teciduais para os grupos vacinados foram mais intensas na 24ª semana, o que tudo indica sendo resposta à vacinação.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Gouveia L.N.F., Maciel M.V., Soares P.C., Neto I.F.S., Gonçalves D.N.A., Batista A.M.V. & Carvalho F.F.R. 2015. [Substitution of Tifton 85 hay by hay or silage maniçoba in diets based on spineless cactus on metabolic profile of sheep.] Perfil metabólico de ovinos em crescimento alimentados com dietas constituídas de feno ou silagem de maniçoba e palma forrageira. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(Supl.1):5-9. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Manuel de Medeiros, Dois Irmãos, Recife, PE 52171-030, Brazil. E-mail: psoares@dmv.ufrpe.br Aiming to evaluate the effect of addition of cactus pear associated with maniçoba in the diet of sheep on the profile of biochemical indicators of energy metabolism and protein, we performed a randomized block design was used in which 24 male sheep without defined breed (SPRD), mean weight of 19.77±1.95 kg and average age of six months, divided equally into three treatments: concentrate + Tifton hay, concentrate + maniçoba hay and concentrate + maniçoba silage, and similar parts of cactus pear. There were four blood samples, which were repetitions at intervals of 15 days (0d, 15d, 3d and 45d). Then proceeded to the analysis of the following biochemical parameters: serum creatinine, urea, total protein, albumin, globulin, glucose, fructosamine, aspartate aminotransferase, alkaline phosphatase, gamma glutamyl transferase, sodium, potassium, chlorine, calcium and phosphorus. Higher dry matter intake was observed in the group with maniçoba hay. Treatment with maniçoba silage showed statistical differences (P<0.05) in the consumption of neutral detergent fiber. Significant variations were found in the concentration of urea in the animals fed the diet composed of maniçoba hay. Both hay and silage maniçoba, up to 30%, can replace the Tifton 85 hay for feeding finishing animals, effectively keeping the dry matter intake, carcass yield, the protein metabolism, energy and mineral, plus be a good alternative for feeding sheep.

• Tifton 85 hay Manihot silage Manihot hay Opuntia fícus-indica palma forrageira feno de maniçoba silagem de maniçoba

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Gouveia L.N.F., Maciel M.V., Soares P.C., Neto I.F.S., Gonçalves D.N.A., Batista A.M.V. & Carvalho F.F.R. 2015. [Substitution of Tifton 85 hay by hay or silage maniçoba in diets based on spineless cactus on metabolic profile of sheep.] Perfil metabólico de ovinos em crescimento alimentados com dietas constituídas de feno ou silagem de maniçoba e palma forrageira. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(Supl.1):5-9. Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Manuel de Medeiros, Dois Irmãos, Recife, PE 52171-030, Brazil. E-mail: psoares@dmv.ufrpe.br Objetivando-se avaliar o efeito da adição de palma forrageira associado à maniçoba na dieta de ovinos sobre o perfil de indicadores bioquímicos do metabolismo energético e proteico, foi realizado um delineamento em blocos casualizados onde foram utilizados 24 ovinos machos, sem padrão racial definido, com peso corporal médio de 19,77±1,95 kg e idade média de seis meses, divididos igualmente em três tratamentos: concentrado + feno Tifton 85, concentrado + feno de maniçoba e concentrado + silagem de maniçoba, e semelhantes partes de palma forrageira. Realizaram-se quatro coletas de sangue, que constituíram as repetições, com intervalos de 15 dias (0d, 15d, 3d0 e 45d). Em seguida, procederam-se as análises dos seguintes indicadores bioquímicos: creatinina sérica, ureia, proteína total, albumina, globulina, glicose, frutosamina, aspartato aminotransferase, fosfatase alcalina, gama glutamiltransferase, sódio, potássio, cloro, cálcio e fósforo. Maior consumo de matéria seca foi observado no grupo com feno de maniçoba. O tratamento com silagem de maniçoba apresentou diferença (P<0,05) no consumo de fibra em detergente neutro. Houve variações significativas na concentração de ureia nos animais que receberam a dieta composta de feno de maniçoba. Tanto o feno como a silagem de maniçoba, em até 30%, pode substituir o feno de Tifton 85 na alimentação de ovinos em terminação, mantendo efetivamente o consumo de matéria seca, rendimento de carcaça, os metabolismos proteico, energético e mineral, além de ser uma boa alternativa para a alimentação de ovinos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Trindade M.M., Perdoncini G., Sierra-Arguello Y.M., Lovato M., Borsoi A. & Nascimento V.P. 2015. [Detection of the genes encoding the toxin CDT, and research factors which influence the production of hemolysin in Campylobacter jejuni from poultry products.] Detecção dos genes codificantes da toxina CDT, e pesquisa de fatores que influenciam na produção de hemolisinas em amostras de Campylobacter jejuni de origem avícola. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(8):709-715. Laboratório Central de Diagnóstico de Patologia Aviária, Curso de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Santa Maria, Campus Universitário, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: michyvet@gmail.com Thermophilic members of the Campylobacter genus are recognized as important enteropathogenics for humans and animals. The great variety of ecological habitats, such as water, food and milk, may promote new virulence factors. To detect the encoding genes distending cytolethal toxin (CDT) by PCR and study the hemolytic activity with influence of chelation solutions and ions, 45 Campylobacter jejuni samples from poultry production origin were used to perform the hemolytic research. To check the influence of chelation agents and solution of ions in the hemolytic activity, samples of C. jejuni strains were grown in tryptone soy broth TSB containing chelation agents separately EDTA, acetic acid, CaCl2, MgCl2 and FeCl3 ions solutions in microaerophilic atmosphere and then streaked on 5% sheep blood tryptic soy agar (TSA). To perform the detection of cdtA, cdtB and cdtC genes the technique of Polymerase Chain Reaction (PCR) was used in 119 samples of C. jejuni from poultry production origin. We found 40% of samples showing hemolysis after growing with TSB. Only the acetic acid showed reduction in hemolysis. The prevalent gene profile was cdtABC in 37.8 % of the samples. It was observed that the results showed the presence of C. jejuni strains with virulent potential, due to presence of the CDT toxin genes and the hemolytic activity, which showed in vitro reduced when acetic acid was added.

• Campylobacter jejuni

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Trindade M.M., Perdoncini G., Sierra-Arguello Y.M., Lovato M., Borsoi A. & Nascimento V.P. 2015. [Detection of the genes encoding the toxin CDT, and research factors which influence the production of hemolysin in Campylobacter jejuni from poultry products.] Detecção dos genes codificantes da toxina CDT, e pesquisa de fatores que influenciam na produção de hemolisinas em amostras de Campylobacter jejuni de origem avícola. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(8):709-715. Laboratório Central de Diagnóstico de Patologia Aviária, Curso de Medicina Veterinária, Universidade Federal de Santa Maria, Campus Universitário, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: michyvet@gmail.com Membros termofílicos do gênero Campylobacter são reconhecidos como importantes enteropatógenos para o ser humano e animais. A grande diversidade ecológica destes micro-organismos em diferentes habitats tais como água, animais e alimentos predispõem ao aparecimento de novos fatores de virulência. Este trabalho teve por objetivo detectar os genes codificantes da Toxina Distensiva Citoletal (CDT) por meio da técnica de PCR, pesquisar a atividade de hemolisinas e a influência de soluções quelantes e de íons nesta atividade. Foram utilizadas 45 amostras de Campylobacter jejuni de origem avícola para pesquisa de atividade hemolítica, cultivadas em Caldo Triptona de Soja (TSB). Após o crescimento bacteriano, as amostras foram semeadas em Ágar tríptico de soja (TSA) contendo 5% de sangue de ovino. Para verificar a influência de agentes quelantes e solução de íons na atividade hemolítica, as amostras de C. jejuni foram cultivadas em TSB contendo separadamente os quelantes EDTA, ácido acético, soluções de íons CaCl2, MgCl2 e FeCl3, em atmosfera de microaerofilia. Quanto à atividade de hemolisina de C. jejuni em placas de TSA - sangue ovino foi possível observar que houve hemólise em 40% das amostras analisadas apenas com caldo TSB. Somente o ácido acético apresentou ação quelante sobre a atividade de hemolisinas em amostras de C. jejuni semeadas em placas de TSA - sangue ovino. Para detecção dos genes cdtA, cdtB e cdtC através da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) foram utilizadas 119 amostras de C. jejuni de origem avícola. Foi possível observar que 37,8% possuíam o perfil de genes cdtABC. Os resultados demonstraram em amostras avícolas a presença de cepas de C. jejuni com potencial virulento, devido à presença dos genes da toxina CDT e potencial hemolítico, que apresentou ação reduzida in vitro com ácido acético.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Frasão B.S., Côrtes L.R., Nascimento E.R., Cunha N.C., Almeida V.L. & Aquino M.H.C. 2015. [Detection of fluoroquinolone resistance in Campylobacter strains from organic poultry.] Detecção de resistência às fluoroquinolonas em Campylobacter isolados de frangos de criação orgânica. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(7):613-619. Departamento de Tecnologia de Alimentos, Universidade Federal Fluminense, Rua Vital Brasil Filho 64, Niterói, RJ 24230-340, Brazil. E-mail: beatrizfrasao@id.uff.br Studies have shown that resistance to quinolones in Campylobacter strains is related with Threonine-86-Isoleucine mutation. In order to investigate the presence of this mutation in sensitive and resistant Campylobacter strains to ciprofloxacin and enrofloxacin, the cecal contents of 80 broilers from organic raising chickens, slaughtered under State Inspection Service (S.I.S) of the State of Rio de Janeiro, were collected and tested for the presence of Campylobacter. The determination of ciprofloxacin and enrofloxacin susceptibility was done by disk diffusion and agar dilution methods for determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC). The detection of mutation in Quinolone Resistance Determinant Region (QRDR) in gyrA gene was done by sequencing. Campylobacter was isolated from 100% of the samples, being 68.75% C. jejuni and 31.25% C. coli. By the disk diffusion method, resistance to ciprofloxacin was observed in all isolates and 56.25% of the strains were resistant to enrofloxacin. By agar dilution method, all strains were resistant to ciprofloxacin (MIC &#8805; 16µg/mL to &#8805; 64µg/mL) and full and intermediate resistance to enrofloxacin was detected in 42.50% (MIC &#8805; 4-32&#956;g/mL) and 38.75% (MIC =2&#956;g/mL) of the strains, respectively. Mutation Thr-86-Ile was observed in 100% of the isolates investigated. In addition to this mutation, others no silent mutations (Val-73-Glu, Ser-114-Leu, Val-88-Asp, Ala-75-Asp, Gly-119-Ser, Arg-79-Lys) and silent mutations (His-81-His, Ser-119-Ser, Ala-120-Ala, Phe-99-Phe, Ala-122-Ala, Gly-74-Gly, Ile-77-Ile, Ala-91-Ala, Leu-92-Leu, Val-93-Val, Ile-106-Ile, Thr-107-Thr, Gly-113-Gly, Ile-115-Ile, Gly-110-Gly) were detected. All the enrofloxacin-sensitive strains by the phenotypic methods had the Thr-86 to Ile substitution, which suggests other mechanisms contributing to enrofloxacin resistance in Campylobacter.

• Fluoroquinolone resistance Campylobacter strains fluoroquinolonas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Frasão B.S., Côrtes L.R., Nascimento E.R., Cunha N.C., Almeida V.L. & Aquino M.H.C. 2015. [Detection of fluoroquinolone resistance in Campylobacter strains from organic poultry.] Detecção de resistência às fluoroquinolonas em Campylobacter isolados de frangos de criação orgânica. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(7):613-619. Departamento de Tecnologia de Alimentos, Universidade Federal Fluminense, Rua Vital Brasil Filho 64, Niterói, RJ 24230-340, Brazil. E-mail: beatrizfrasao@id.uff.br Estudos têm revelado que a resistência às quinolonas em cepas de Campylobacter está relacionada à presença da mutação Treonina-86 para Isoleucina. Com o objetivo de investigar a presença dessa mutação em cepas de Campylobacter sensíveis e resistentes à ciprofloxacina e enrofloxacina, o conteúdo cecal de 80 frangos de corte de criação orgânica, abatidos sob Serviço de Inspeção Estadual (S.I.E.) do Estado do Rio de Janeiro, foram coletados e investigados para a presença de Campylobacter. A determinação da resistência à ciprofloxacina e enrofloxacina foi feita pela técnica de difusão em disco e de diluição em ágar para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM). A detecção da mutação na Região Determinante de Resistencia às Quinolonas (RDRQ) no gene gyrA foi realizada através de sequenciamento. Campylobacter foi isolado a partir de 100% das amostras avaliadas, sendo 68,75% correspondente à C. jejuni e 31,25% à C. coli. No teste de difusão em disco, 100% das cepas foram resistentes à ciprofloxacina e 56,25% das cepas foram resistentes à enrofloxacina. No teste de diluição em ágar, todas as cepas foram resistentes à ciprofloxacina apresentando CIM variando de &#8805; 16-64µg/mL, e resistência ou resistência intermediaria à enrofloxacina foi detectada em 42,50% (CIM &#8805; 4-32µg/mL) e 38,75% (CIM = 2&#956;g/mL) das cepas, respectivamente. A mutação Tre-86-Ile, foi observada em 100% das cepas analisadas. Além dessa mutação, foram observadas outras mutações não silenciosas (Val-73-Glu, Ser-114-Leu, Val-88-Asp, Ala-75-Asp, Ser-119-Gli, Arg-79-Lis) e mutações silenciosas (His-81-His, Ser-119-Ser, Ala-120-Ala, Fen-99-Fen, Ala-122-Ala, Gli-74-Gli, Ile-77-Ile, Ala-91-Ala, Leu-92-Leu, Val-93-Val, Ile-106-Ile, Tre-107-Tre, Gli-113-Gli, Ile-115-Ile, Gli-110-Gli). A observação de que cepas sensíveis à enrofloxacina pelos testes fenotípicos apresentavam a substituição Tre-86 para Ile sugere que outros mecanismos podem contribuir para a resistência à enrofloxacina em Campylobacter.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Sierra-Arguello Y.M., Morgan R.B., Perdoncini G., Lima L.M., Gomes M.J.P. & Nascimento V.P. 2015. Resistance to &#946;-lactam and tetracycline in Campylobacter spp. isolated from broiler slaughterhouses in southern Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(7):637-642. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: yuli_melisasierra@yahoo.com The study was carried out to screen and analyze the genetic characteristics of antimicrobial resistance in Campylobacter spp. from poultry sources. A total of 141 strains of Campylobacter isolated from samples of broilers of slaughterhouses in southern Brazil was identified by phenotypic and genotypic methods. Campylobacter isolates were evaluated for its antimicrobial susceptibility and the presence of resistance genes. The strains were investigated for antimicrobial susceptibility against two agents (ampicillin and tetracycline) by disk diffusion method. PCR assay was used to confirm the specie and the presence of ampicillin (blaOXA-61), tetracycline tet(O), and the energy-dependent multi-drug efflux pump (cmeB) genes. Campylobacter jejuni was the most ubiquitous; its presence was determined in 140 samples out of 141 (99.3%), whereas Campylobacter coli was found only in one of the contaminated samples (0.70%). The results obtained showed 65% and 35.5% of Campylobacter isolates resistant to &#946;-lactams and tetracyclines, respectively. The cmeB gene responsible for multidrug resistance was detected in 26 isolates out 141 strains (18.5%). Moreover, 36 out of 141 Campylobacter strains (25.6%) were found to be resistant to at least two different antimicrobia resistance markers (&#946;-lactams and tetracyclines).

• Campylobacter tetracycline β-lactam tetraciclinas β-lactâmicos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Sierra-Arguello Y.M., Morgan R.B., Perdoncini G., Lima L.M., Gomes M.J.P. & Nascimento V.P. 2015. Resistance to &#946;-lactam and tetracycline in Campylobacter spp. isolated from broiler slaughterhouses in southern Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(7):637-642. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: yuli_melisasierra@yahoo.com O presente estudo foi realizado para examinar e analisar as características genéticas de resistência antimicrobiana de Campylobacter spp. a partir de fontes avícolas. Um total de 141 amostras de Campylobacter isolados em matadouros-frigoríficos de aves do estado do Rio Grande do Sul, Brasil, foi identificado por métodos fenotípicos e genotípicos. Foi analisada a susceptibilidade antimicrobiana e a presença de genes de resistência. As cepas foram testadas para detectar sensibilidade frente a dois antimicrobianos (ampicilina e tetraciclina) pelo método de difusão em disco. A seguir, usando a reação em cadeia da polimerase foi confirmada a espécie e a presença dos genes de resistência à ampicilina (blaOXA-61) e tetraciclina tet(O), assim como a detecção da bomba de efluxo (cmeB). Campylobacter jejuni foi a espécie mais isolada, sua presença foi determinada em 140 amostras (99,3%), e Campylobacter coli foi encontrada em uma única amostra (0,70%). Os resultados obtidos mostraram 65% e 35,5% de Campylobacter isolados resistentes a &#946;-lactâmicos e tetraciclinas, respectivamente. O gene cmeB responsável pela resistência a múltiplos antimicrobianos foi detectado em 26 amostras (18,5%). Neste contexto, 36 das 141 amostras (25,6%) foram consideradas resistentes a dois grupos diferentes de antimicrobianos (&#946;-lactâmicos e tetraciclinas).

Abstract in English:

ABSTRACT.- Perdoncini G., Sierra-Arguello Y.M., Lima L.M., Trindade M.M., Gomes M.J.P., Santos L.R., Schmidt V. & Nascimento V.P. 2015. Occurrence of Campylobacter jejuni and C. coli on broiler carcasses after chilling in southern Brazil. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):349-352. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: gustavo.perdoncini@yahoo.com Campylobacter jejuni and C. coli have been associated with gastrointestinal disorders in human beings, due mainly to the consumption of chicken meat. Despite control measures for reducing contamination by these bacteria, the detection of Campylobacter in carcasses after chilling remains high. A total of 105 carcasses were assessed by the horizontal detection method in five federally inspected slaughterhouses in southern Brazil in 2012 and in the first three months of 2013. Campylobacter was isolated in 37.1% of the carcasses, of which 97.5% contained C. jejuni and 2.5% were infected by C. coli. The rate of positive carcasses across the slaughterhouses ranged from 0 to 71.4%. Determining the occurrence of Campylobacter among flocks is crucial for estimating the microbial load at specific points along the slaughtering process and for minimizing the risk of contamination of end products by Campylobacter.

• Campylobacter jejuni Campylobacter coli campylobacteriosis campilobacteriose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Perdoncini G., Sierra-Arguello Y.M., Lima L.M., Trindade M.M., Gomes M.J.P., Santos L.R., Schmidt V. & Nascimento V.P. 2015. Occurrence of Campylobacter jejuni and C. coli on broiler carcasses after chilling in southern Brazil. [Campylobacter jejuni e C. coli em carcaças de frangos após a refrigeração por imersão no sul do Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(4):349-352. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: gustavo.perdoncini@yahoo.com Campylobacter jejuni e C. coli têm sido associados a problemas gastroentéricos em seres humanos principalmente devido ao consumo de carne de frango. Embora medidas de controle sejam realizadas para reduzir a contaminação por estas bactérias, a identificação de Campylobacter em carcaças após a refrigeração por imersão é alto. Foram analisadas 105 carcaças pelo método de detecção horizontal em cinco abatedouros sob Inspeção Federal no sul do Brasil em 2012 e nos três primeiros meses de 2013. Campylobacter foi isolada em 37,1% das carcaças analisadas, as quais 97,5% foram identificados como C. jejuni e 2,5% como C. coli. A ocorrência de carcaças positivas entre matadouros variou de zero a 71,4%. O conhecimento sobre a ocorrência de Campylobacter entre os lotes é fundamental para estimar a extensão da carga microbiana em pontos específicos do abate e consequentemente minimizar o risco de contaminação por Campylobacter em produtos finais de frangos.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Santos L.A., Mion L., Marotzki M., Parizotto L., Rodrigues L.B., Nascimento V.P. & Santos L.R. 2015. [Miniaturized most probable number and conventional microbiology for isolation of Salmonella spp. in poultry slaughterhouses.] Número mais provável miniaturizado e microbiologia convencional para isolamento de Salmonella spp. em abatedouros de frangos de corte. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(3):223-229. Curso de Medicina Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Passo Fundo, BR-285, Bairro São José, Passo Fundo, RS 99052-900, Brazil. E-mail: luruschel@upf.br Poultry products can be important modes of transmission of Salmonella spp. to humans and, among several parameters used to determine food quality, microbiological characteristics play an essential role. The aim of this study was to determine and quantify Salmonella spp. at broiler slaughtering facilities. This was done by conventional microbiology and by the miniaturized most probable number (mMPN) methods. Three federally-inspected slaughterhouses were visited, where samples were collected in triplicate from six sites: reception of live birds (cloacal swabs and sponge samples from transport cages before and after sanitation) and carcass processing (after pre-chiller, after dripping, and before primary packaging and refrigeration at -12oC for 24h), totaling 108 samples. Three of the six surveyed sites and two of the three slaughterhouses were contaminated with Salmonella spp., showing an infection rate of 5.5% independently of the method used, and revealing that transport cages were contaminated after sanitation. No correlation could be established between the results of conventional microbiology and mMPN methods, and contamination along the slaughtering line could not quantified. This indicates the importance of combining qualitative and quantitative methods for the enumeration of Salmonella when detection rates are lower than the proposed mMPN limit (0.13 MPN/mL). Typhimurium, Panama, Lexington and Rissen, which are paratyphoid organisms and are potentially infectious to humans, were identified. However, these serovars were isolated at the reception of live birds (from cloacal swabs and from transport cages) rather than from the end products. Given that Salmonella spp. was detected in transport cages after sanitation, it is paramount that automated washing procedures currently used in slaughterhouses be reassessed and adjusted.

• Salmonella spp.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Santos L.A., Mion L., Marotzki M., Parizotto L., Rodrigues L.B., Nascimento V.P. & Santos L.R. 2015. [Miniaturized most probable number and conventional microbiology for isolation of Salmonella spp. in poultry slaughterhouses.] Número mais provável miniaturizado e microbiologia convencional para isolamento de Salmonella spp. em abatedouros de frangos de corte. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(3):223-229. Curso de Medicina Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade de Passo Fundo, BR-285, Bairro São José, Passo Fundo, RS 99052-900, Brazil. E-mail: luruschel@upf.br Os produtos de origem avícola podem ser importantes veículos de transmissão de Salmonella spp. para humanos e, dentre os vários parâmetros que determinam a qualidade de um alimento, destacam-se os que definem suas características microbiológicas. Objetivou-se detectar e quantificar Salmonella spp. na tecnologia de abate de frangos de corte por microbiologia convencional (MC) e número mais provável miniaturizado (mNMP). As coletas foram realizadas em duas visitas a três abatedouros sob Inspeção Federal e em seis pontos de coleta em triplicata, definidos como: recepção das aves (swabs de cloaca e esponjas de gaiolas de transporte antes e após a higienização) e carcaças (após pré resfriamento em chiller, após o gotejamento e antes da embalagem primária e congeladas a -12oC por 24 horas), totalizando 108 amostras. Identificou-se Salmonella spp. em três dos seis pontos do fluxograma de abate e em dois dos três estabelecimentos amostrados, independentemente do método utilizado, perfazendo 5,5% de positividade, onde destaca-se a contaminação nas gaiolas de transporte das aves após a higienização. Não foi possível correlacionar os resultados da microbiologia convencional e do mNMP ou mesmo quantificar a contaminação ao longo da tecnologia de abate, o que indica a necessidade de se utilizar um método qualitativo aliado ao método de quantificação quando Salmonella estiver presente em quantidades inferiores ao limite de detecção do mNMP proposto (0,13 NMP/mL). Os sorovares identificados foram Typhimurium, Panama, Lexington e Rissen, consideradas paratíficos e, portanto, potencialmente capazes de causar infecções em humanos, embora estes sorovares não tenham sido isolados em produtos finais e sim na chegada dos frangos aos abatedouros (swabs de cloaca e gaiolas de transporte). A identificação de Salmonella spp. nas gaiolas de transporte após a higienização é um indicativo da necessidade de revisão e adequação dos métodos automatizados de lavagem atualmente utilizados nos abatedouro

Abstract in English:

ABSTRACT.- Faveri J.C., Murakami A.E., Potença A., Eyng C., Marques A.F.Q. & Santos T.C. 2015. [Performance and morphology of the intestinal mucosa of broilers during growth, with or without nucleotides, at different protein levels.] Desempenho e morfologia intestinal de frangos de corte na fase de crescimento, com e sem adição de nucleotídeos na dieta, em diferentes níveis protéicos. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(3):291-296. Departamento de Zootecnia, Programa de Pós-Graduação em Zootecnia, Universidade Estadual de Maringá, Av. Colombo 5790, Maringá, PR 87020-900, Brazil. E-mail: jufaveri@yahoo.com.br The experiment was conducted to evaluate the performance and intestinal morphology of growing broilers, with and without addition of nucleotides in the diet at different protein levels. A total of 868 21-day-old male Cobb broiler chicks were used in a completely randomized design. The diets were: control with high crude protein (18.86%) and low crude protein (16.80%), both without nucleotides, meeting the requirement of 1.062% digestible lysine; and five treatments with the addition of 0.5 kg of nucleotides/ton of feed, with different levels of digestible lysine (1.262%, 1.162%, 1.062%, 0962% and 0.862%), all formulated based on the low-protein diet (16.80%), with four replications each. Feed intake (g) decreased linearly (P&#8804;0.05) in the period from 20 to 27, 20 to 35, and 20 to 42 days of age; feed intake decreased by increasing levels of lysine in the diet. Feed-to-gain ratio showed a quadratic effect (P&#8804;0.05) for birds of the period from 20 to 27, 20 to 35 and 20 to 42 days of age, decreasing as levels of digestible lysine increased, with minimum levels reaching 1.119%, 1.187% and 1.132% digestible lysine, respectively. The diet with 1.062% of lysine did not differ (P>0.05) from the negative control for villus height and crypt depth in the duodenum.

• Intestinal mucosa protein nucleotides mucosa intestinal nucleotídeos proteína ideal

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Faveri J.C., Murakami A.E., Potença A., Eyng C., Marques A.F.Q. & Santos T.C. 2015. [Performance and morphology of the intestinal mucosa of broilers during growth, with or without nucleotides, at different protein levels.] Desempenho e morfologia intestinal de frangos de corte na fase de crescimento, com e sem adição de nucleotídeos na dieta, em diferentes níveis protéicos. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(3):291-296. Departamento de Zootecnia, Programa de Pós-Graduação em Zootecnia, Universidade Estadual de Maringá, Av. Colombo 5790, Maringá, PR 87020-900, Brazil. E-mail: jufaveri@yahoo.com.br O experimento foi conduzido com o objetivo de avaliar o desempenho e a morfologia intestinal de frangos de corte na fase de crescimento, com e sem adição de nucleotídeos na dieta, em diferentes níveis proteicos. Foram utilizados 868 pintos de cortes machos de 21 dias de idade, da linhagem Cobb, submetidos a um delineamento inteiramente casualizado. As dietas foram compostas por dois controles, de alta e baixa proteína bruta, com 18,86% e 16,80% respectivamente, com a exigência de 1,062% de lisina digestível. Tendo como base a dieta controle de baixa proteína foram traçados mais cinco tratamentos com adição de 0,5 kg de nucleotídeos/ton de ração, e diferentes níveis de lisina digestível: 1,262%, 1,162%, 1,062%, 0962% e 0,862%, com quatro repetições cada. O consumo alimentar (g) diminuiu linearmente (P&#8804;0,05) no período de 20 a 27, de 20 a 35 e de 20 a 42 dias de idade, em que aumentando os níveis de lisina digestível na dieta, observou-se diminuição no consumo de ração. A conversão alimentar teve efeito quadrático (P&#8804;0,05) para as aves do período de 20 a 27, de 20 a 35 e de 20 a 42 dias de idade, diminuindo à medida que os níveis de lisina digestível aumentaram, atingindo o mínimo com 1,119, 1,187 e 1,132% de lisina digestível, respectivamente. A dieta com 1,062% de lisina digestível não diferiu (P>0.05) da dieta controle com alta proteína, para altura das vilosidades e profundidade de cripta, no duodeno, ilustrando então efeito benéfico do uso de nucleotídeos em dietas com baixa proteína bruta.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rocha D.T., Salle F.O., Perdoncini G., Rocha S.L.S., Fortes F.B.B., Moraes H.L.S., Nascimento V.P. & Salle C.T.P. 2015. Classification of antimicrobial resistance using artificial neural networks and the relationship of 38 genes associated with the virulence of Escherichia coli isolates from broilers. Pesquisa Veterinária Brasileira 35(2):137-140. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: cdpa@ufrgs.br Avian pathogenic Escherichia coli (APEC) is responsible for various pathological processes in birds and is considered as one of the principal causes of morbidity and mortality, associated with economic losses to the poultry industry. The objective of this study was to demonstrate that it is possible to predict antimicrobial resistance of 256 samples (APEC) using 38 different genes responsible for virulence factors, through a computer program of artificial neural networks (ANNs). A second target was to find the relationship between (PI) pathogenicity index and resistance to 14 antibiotics by statistical analysis. The results showed that the RNAs were able to make the correct classification of the behavior of APEC samples with a range from 74.22 to 98.44%, and make it possible to predict antimicrobial resistance. The statistical analysis to assess the relationship between the pathogenic index (PI) and resistance against 14 antibiotics showed that these variables are independent, i.e. peaks in PI can happen without changing the antimicrobial resistance, or the opposite, changing the antimicrobial resistance without a change in PI.

• Escherichia coli antimicrobials agents agentes antimicrobianos

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rocha D.T., Salle F.O., Perdoncini G., Rocha S.L.S., Fortes F.B.B., Moraes H.L.S., Nascimento V.P. & Salle C.T.P. 2015. Classification of antimicrobial resistance using artificial neural networks and the relationship of 38 genes associated with the virulence of Escherichia coli isolates from broilers. [Utilização de redes neurais artificiais para a classificação da resistência a antimicrobianos e sua relação com a presença de 38 genes associados a virulência isolados de amostras de Escherichia coli provenientes de frangos de corte.] Pesquisa Veterinária Brasileira 35(2):137-140. Centro de Diagnóstico e Pesquisa em Patologia Aviária, Faculdade de Veterinária, Universidade Federal do Rio Grande do Sul, Av. Bento Gonçalves 8824, Porto Alegre, RS 91540-000, Brazil. E-mail: cdpa@ufrgs.br Escherichia coli patogênica (APEC) para as aves é responsável por vários processos patológicos em aves, sendo considerado como uma das principais causas de morbidade e mortalidade, associado com perdas econômicas para a indústria avícola. O objetivo do presente trabalho foi demonstrar que é possível predizer a resistência antimicrobiana de 256 amostras de APEC utilizando 38 genes responsáveis por distintos fatores de virulência, através de um programa computacional de redes neurais artificiais (RNAs). O segundo objetivo foi verificar por análise estatística a relação entre o índice de patogenicidade (IP) e a resistência aos 14 antimicrobianos. Os resultados demostraram que as RNAs foram capazes de realizar a classificação correta do comportamento das amostras APEC com uma amplitude de 74,22 a 98,44%, desta forma tornando possível predizer a resistência antimicrobiana. A análise estatística realizada para verificar a relação entre o IP e a resistência aos antimicrobianos demostrou que estas variáveis são independentes, ou seja, podem haver picos no IP sem alteração na resistência, ou até mesmo o contrário, alteração na resistência antimicrobiana sem mudança no IP.