PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

In recent years, the Brazilian Health Ministry and the World Health Organization have supported research into new technologies that may contribute to the surveillance, new treatments, and control of visceral leishmaniasis within the country. In light of this, the aim of this study was to isolate compounds from plants of the Caatinga biome, and to investigate their toxicity against promastigote and amastigote forms of Leishmania infantum chagasi, the main responsible parasite for South American visceral leishmaniasis, and evaluate their ability to inhibit acetylcholinesterase enzyme (AChE). A screen assay using luciferase-expressing promastigote form and an in situ ELISA assay were used to measure the viability of promastigote and amastigote forms, respectively, after exposure to these substances. The MTT colorimetric assay was performed to determine the toxicity of these compounds in murine monocytic RAW 264.7 cell line. All compounds were tested in vitro for their anti-cholinesterase properties. A coumarin, scoparone, was isolated from Platymiscium floribundum stems, and the flavonoids rutin and quercetin were isolated from Dimorphandra gardneriana beans. These compounds were purified using silica gel column chromatography, eluted with organic solvents in mixtures of increasing polarity, and identified by spectral analysis. In the leishmanicidal assays, the compounds showed dose-dependent efficacy against the extracellular promastigote forms, with an EC50 for scoporone of 21.4µg/mL, quercetin and rutin 26 and 30.3µg/mL, respectively. The flavonoids presented comparable results to the positive control drug, amphotericin B, against the amastigote forms with EC50 for quercetin and rutin of 10.6 and 43.3µg/mL, respectively. All compounds inhibited AChE with inhibition zones varying from 0.8 to 0.6, indicating a possible mechanism of action for leishmacicidal activity.

• Leishmaniasis Dimorphandra gardneriana Platymiscium floribundum scoparone flavonoids acetylcholinestarase inhibition treatment

Abstract in Portuguese:

Nos últimos anos, o Ministério da Saúde do Brasil e a Organização Mundial da Saúde tem apoiado a investigação de novas tecnologias que possam contribuir para a vigilância, novos tratamentos e controle da leishmaniose visceral no país. Assim, o objetivo deste trabalho foi isolar compostos de plantas do bioma Caatinga, e investigar a toxicidade destes compostos contra as formas promastigotas e amastigotas de Leishmania infantum chagasi, principal parasita responsável pela leishmaniose visceral na América do Sul, e avaliar a sua capacidade para inibir a enzima acetil-colinesterase (AChE). Após a exposição aos compostos em estudo, foram realizados testes utilizando a forma promastigota que expressa luciferase e ELISA in situ para medir a viabilidade das formas promastigotas e amastigota, respectivamente. O ensaio colorimétrico MTT foi realizado para determinar a toxicidade destas substâncias utilizando células monocíticas murina RAW 264.7. Todos os compostos foram testados in vitro para as sua propriedade anti-colinesterásica. Um cumarina, escoparona, foi isolada a partir de hastes de Platymiscium floribundum, e os flavonóides, rutina e quercetina, foram isolados a partir de grãos de Dimorphandra gardneriana. Estes compostos foram purificados, utilizando cromatografia em coluna gel eluída com solventes orgânicos em misturas de polaridade crescente, e identificados por análise espectral. Nos ensaios leishmanicidas, os compostos fenólicos mostraram eficácia contra as formas extracelulares promastigotas, com EC50 para escoporona de 21.4µg/mL e para quercetina e rutina 26 e 30.3µg/mL, respectivamente. Os flavonóides apresentaram resultados comparáveis à droga controle, a anfotericina B, contra as formas amastigotas com EC50 para quercetina e rutina de 10.6 e 43.3µg/mL, respectivamente. Os compostos inibiram a enzima AChE com halos de inibição variando de 0,8 a 0,6cm, indicando um possível mecanismo de ação para a atividade leishmanicida.

• Leishmaniose Dimorphandra gardneriana Platymiscium floribundum escoparona flavonoides inibição acetil-colinestarase tratamento

Abstract in English:

ABSTRACT.- Ribeiro R.R., Silva M.E., Silva S.M., Fulgêncio G.O., Pena H.F.J., Frézard F., Michalick M.S.M. & Gennari S.M. 2011. Occurrence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii antibodies in dogs with visceral leishmaniasis. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(6):527-532. Centro de Ciências Agrárias Ambientais e Biológicas, Universidade Federal do Recôncavo da Bahia, Campus Universitário Cruz das Almas s/n, Cruz das Almas, BA 44380-000, Brazil. E-mail: raul@ufrb.edu.br Uninfected dogs and those naturally infected with Leishmania chagasi exhibiting different clinical forms of disease were evaluated for the presence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii antibodies. Blood samples were collected from 110 mongrel dogs. Sera were tested using the indirect fluorescent antibody test (IFAT), and the animals with visceral leishmaniasis (VL) (n=60) were classified clinically. Out of the 110 sera investigated, 5 (4.5%) were positive for N. caninum (IFAT³50) and 36 (32.7%) for T. gondii (IFAT³16). Anti-L. chagasi antibody titers in asymptomatic dogs (n=10) were found to be significantly lower (P<0.05) than those in oligosymptomatic ones (n=22), which were in turn significantly lower (P<0.05) than those in symptomatic ones (n=28). No association between Leishmania and N. caninum infections was observed. Among dogs infected with L. chagasi, a tendency (P=0.053) towards an association between the infection with T. gondii and the appearance of VL symptoms was observed, suggesting that the clinical manifestation of VL in dogs may enhance their susceptibility to T. gondii. The possible influence of the immunosuppressive status of canine leishmaniasis in the different clinical forms of the disease is discussed.

• Leishmaniasis Leishmania chagasi Toxoplasma gondii Neospora caninum leishmaniose visceral

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Ribeiro R.R., Silva M.E., Silva S.M., Fulgêncio G.O., Pena H.F.J., Frézard F., Michalick M.S.M. & Gennari S.M. 2011. Occurrence of anti-Neospora caninum and anti-Toxoplasma gondii antibodies in dogs with visceral leishmaniasis. [Ocorrência de anticorpos anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii em cães com leishmaniose visceral.] Pesquisa Veterinária Brasileira 31(6):527-532. Centro de Ciências Agrárias Ambientais e Biológicas, Universidade Federal do Recôncavo da Bahia, Campus Universitário Cruz das Almas s/n, Cruz das Almas, BA 44380-000, Brazil. E-mail: raul@ufrb.edu.br A presença de anticorpos anti-Neospora caninum e anti-Toxoplasma gondii foi avaliada em cães não infectados e naturalmente infectados com Leishmania chagasi manifestando diferentes formas clínicas da enfermidade. Amostras de sangue foram coletadas de 110 cães sem raça definida. Os soros foram avaliados por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI) e os animais com leishmaniose visceral (LV) (n=60) foram classificados clinicamente. Dos 110 soros analisados, 5 (4,5%) foram reativos para N. caninum (RIFI³50) e 36 (32,7%) para T. gondii (RIFI³16). Os títulos de anticorpos anti-L. chagasi em cães assintomáticos (n=10) foram significativamente (P<0,05) mais baixos que aqueles verificados em oligossintomáticos (n=22), que por sua vez foram significativamente menores (P<0,05) que em cães sintomáticos (n=28). Não foi observada associação entre infecções por Leishmania e N. caninum. Entre os cães infectados com L. chagasi, verificou-se uma tendência de associação (P=0.053) entre infecção com T. gondii e aparecimento de sinais clínicos da LV, o que sugere que a manifestação clínica da LV em cães pode aumentar sua susceptibilidade ao T. gondii. A provável influência do quadro de imunossupressão em diferentes formas clínicas da leishmaniose canina é abordada.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Benites A.P., Fernandes C.E., Brum K.B. & Abdo M.A.G.S. 2011. [Presence of amastigotes forms the Leishmania chagasi and profile the leucocytes cells in the reproductive tract of dogs.] Presença de formas amastigotas de Leishmania chagasi e perfil leucocitário no aparelho reprodutivo de cães. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(1):72-77. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Cidade Universitária, Caixa Postal 549, Campo Grande, MS 79070-900, Brazil. E-mail: arianebenites@hotmail.com Visceral leishmaniasis (VL) is a zoonosis caused by Leishmania (Leishmania) chagasi. Canine visceral leishmaniasis (VLC) is most important. The infection occurs usually between the invertebrate host and vertebrate host; however, transmission in the absence of the vector has been reported. The aim of this study was to identify the presence of amastigote forms, quantify the leucocyte cells and to estimate the presence (odds ratio) of the amastigotes in the reproductive tract of dogs serologically positive with and without clinical signs. Sexually mature Mongrel dogs, serologically tested to VLC (symptomatic, n=25; asymptomatic, n=25), were used. After euthanasia, testes, epidydimal (caput, corpus and cauda) and prostate gland fragments (randomized) were recovered and impressed on slides. Twenty animals serologically negative and asymptomatic were used as control group. Samples of spleen were included as parasitological positive controls. Lymphocyte percentages were higher (P<0.05) in the corpus and caudal region of epididymis, similar to the testes in the symptomatic group. Macrophage percentage was higher (P<0.05) in the corpus and caudal epididymis regions. The presence of amastigote forms was associated with different regions of the reproductive tract. In the symptomatic group, the variation was between 0.50 and 0.80, and in the symptomatic between 0.79 and 0.95. The odds ratio for amastigote forms in the testicle of the symptomatic dogs was 6.5 in relation to asymptomatic dogs. The results demonstrate the epidemic potential of venereal transmission of the disease, specifically in areas where control programs of VLC do not consider this transmission route.

• Leishmania chagasi leishmaniasis leishmaniose

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Benites A.P., Fernandes C.E., Brum K.B. & Abdo M.A.G.S. 2011. [Presence of amastigotes forms the Leishmania chagasi and profile the leucocytes cells in the reproductive tract of dogs.] Presença de formas amastigotas de Leishmania chagasi e perfil leucocitário no aparelho reprodutivo de cães. Pesquisa Veterinária Brasileira 31(1):72-77. Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia, Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, Cidade Universitária, Caixa Postal 549, Campo Grande, MS 79070-900, Brazil. E-mail: arianebenites@hotmail.com A leishmaniose visceral (LV) é uma zoonose causada pelo protozoário Leishmania (Leishmania) chagasi. A leishmaniose visceral canina (LVC) é a doença de maior relevância zoonótica. Usualmente, a infecção ocorre entre um hospedeiro invertebrado para um hospedeiro vertebrado, entretanto, a transmissão na ausência do vetor já é conhecida. O objetivo principal deste estudo foi identificar a presença de formas amastigotas, quantificar as células leucocitárias, estimar o risco relativo da presença de formas amastigotas no aparelho reprodutivo de cães sorologicamente positivos com e sem sinais clínicos. Para isso, foram utilizados cães sem raça definida, sexualmente maduros e testados sorologicamente para LVC (com sinais clínicos, n=25; sem sinais clínicos, n=25), que após eutanásia, tiveram fragmentos de testículo, epidídimo (cabeça, corpo e cauda) e glândula prostática (selecionados ao acaso) impressos em lâminas. Um grupo de 20 cãs sorologicamente negativos e sem sinais clínicos foi usado como controle. Amostras do baço foram incluídas como controle parasitológico positivo. O percentual de linfócitos foi superior (P<0,05) no corpo e cauda do epidídimo, assim como no testículo. Macrófagos foram superiores (P<0,05) apenas nas regiões do corpo e cauda epididimais. A presença de amastigotas correlacionou-se entre as distintas regiões do aparelho reprodutivo. Nos sintomáticos variaram entre 0,50 a 0,80 e entre 0,79 a 0,95 nos assintomáticos. A presença de amastigotas no testículo dos cães sintomáticos foi 6,5 vezes superior aos cães assintomáticos. Os resultados obtidos demonstram o potencial epidemiológico da transmissão venérea da doença, principalmente em áreas onde os programas de controle da LVC não consideram esta forma de transmissão, que pode ser importante em populações caninas não esterilizadas.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Julião F.S., Souza B.M.P.S., Freitas D.S.,Oliveira L.S., Larangeira D.F., Dias-Lima A.G.,Souza V.M.M., Barrouin-Melo S.M., Moreira Jr E.D., Paule B.J.A. & Franke C.R. 2007. [Investigation of risk areas as complemental methodology for the control of canine visceral leishmaniasis.] Investigação de áreas de risco como metodologia complementar ao controle da leishmaniose visceral canina. Pesquisa Veterinária Brasileira 27(8):319-324. Laboratório de Infectologia Veterinária, Escola de Medicina Veterinária, Universidade Federal da Bahia, Av. Adhemar de Barros 500, Ondina, Salvador, BA 40170-110, Brazil. E-mail: franke@ufba.br Risk areas of canine visceral leishmaniasis in the city of Camaçari, Bahia, Brazil, were investigated. A total of 278 dogs from 141 homes pertaining to 20 investigated risk areas was serologically screened (ELISA). The general seroprevalence was 21.7% (56/258) after exclusion of 20 dogs used at the beginning of the survey to limit the study area. The respective results of the univariated and multivariated analysis of factors related to infection of dogs by Leishmania chagasi, to vector distribu-tion pattern in the area and to the methodology used to localize the canine focuses are discussed.

• Visceral leishmaniasis Leishmania infantum Lutzomyia longipalpis control dogs epidemiology Brazil

Abstract in Portuguese:

ABSTRACT.- Julião F.S., Souza B.M.P.S., Freitas D.S.,Oliveira L.S., Larangeira D.F., Dias-Lima A.G.,Souza V.M.M., Barrouin-Melo S.M., Moreira Jr E.D., Paule B.J.A. & Franke C.R. 2007. [Investigation of risk areas as complemental methodology for the control of canine visceral leishmaniasis.] Investigação de áreas de risco como metodologia complementar ao controle da leishmaniose visceral canina. Pesquisa Veterinária Brasileira 27(8):319-324. Laboratório de Infectologia Veterinária, Escola de Medicina Veterinária, Universidade Federal da Bahia, Av. Adhemar de Barros 500, Ondina, Salvador, BA 40170-110, Brazil. E-mail: franke@ufba.br Risk areas of canine visceral leishmaniasis in the city of Camaçari, Bahia, Brazil, were investigated. A total of 278 dogs from 141 homes pertaining to 20 investigated risk areas was serologically screened (ELISA). The general seroprevalence was 21.7% (56/258) after exclusion of 20 dogs used at the beginning of the survey to limit the study area. The respective results of the univariated and multivariated analysis of factors related to infection of dogs by Leishmania chagasi, to vector distribu-tion pattern in the area and to the methodology used to localize the canine focuses are discussed.

Abstract in English:

Recent reports on human cases with a clinical diagnosis of visceral Leishmaniasis in Corumbá, Mato Grosso do Sul state, where the agent had never been demonstrated parasitologically, caused a more thorough investigation of the local epidemiological situation of the dog population, one of the main reservoirs of the protozoa in question. Amastigotes were observed in parasitological examinations of skin and viscera in 7 out of 30 animals with clinical symptoms of kala-azar. The isolated parasites from infected dogs were identified as Leishmania donovani by biochemical methods. A serological survey was also carried out on 481 dogs from the urban area, by collecting blood on filter paper for indirect immunofluorescence and passive hemagglutination tests: The serological prevalence of the infection in the dog population studied was 8.7%, of which only 19% showed clinical signs of kala-azar. The remaining 81% was suggestive of being potential carriers without, however, ruling out the possibility of cross reactions with other animal protozoa. The canine infection. is dissiminated in practically all of the town.

• Visceral Leishmaniasis canine infection epidemiology

Abstract in Portuguese:

Recentes relatos sobre casos humanos com diagnóstico clínico de leishmaniose visceral em Corumbá, Mato Grosso do Sul, onde o agente nunca havia sido demonstrado parasitologicamente, levou a uma melhor investigação epidemiológica local sobre a situação da população canina, um dos principais reservatórios do parasita. Formas amastigotas foram observadas através de exame parasitológico da pele e de vísceras de 7 entre 30 animais com sintomas clínicos de calazar. Os parasitas isolados de cães infectados foram identificados bioquímicamente como sendo Leishmania donovani. Inquérito sorológico foi também realizado em 481 cães da área urbana, através das reações de imunofluorescência indireta e hemaglutinação passiva, utilizando-se sangue coletado em papel de filtro. Sorologicamente, a prevalência da infecção na população canina estudada foi de 8,7%, dos quais, apenas 19% apresentavam sinais clínicos de calazar e o restante, 81 %, eram sugestivos de serem portadores em potencial, sem contudo, poder ser excluída a possibilidade de reações cruzadas com outros protozoários. A infecção canina encontra-se praticamente disseminada por toda a cidade.

• Leishmaniose visceral infecção canina epidemiologia