PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Groff A.C.M., Kirinus J.K., Sá e Silva M., Machado G., Costa M.M. & Vargas A.P.C. 2010. Polymerase chain reaction for the diagnosis of bovine genital campylobacteriosis. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(12):1031-1035. Laboratório de Bacteriologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: agueda.vargas@gmail.com Bovine genital campylobacteriosis is a common venereal disease of cattle; the prevalence of this disease can be underestimated mostly because of the nature of the etiological agent, the microaerobic Campylobacter fetus subspecies venerealis. The purpose of the current study was to evaluate the utilization of polymerase chain reaction (PCR) in the diagnosis of genital campylobacteriosis in samples obtained from bull prepuce aspirate, cow cervical mucus, and abomasum contents of aborted fetuses, collected into enrichment medium. Five different DNA extraction protocols were tested: thermal extraction, lysis with proteinase K, lysis with guanidine isothiocyanate, lysis with DNAzol, and lysis with hexadecyltrimethylammonium bromide (CTAB). The specificity, sensitivity, and technical application of the PCR assay were also evaluated with clinical samples and compared to bacterial isolation by standard culture. DNA extraction by the CTAB protocol provided better results in PCR, and it was able to detect 63 colony-forming units per ml of C. fetus. Out of 277 clinical samples tested, 68 (24%) were positive for Campylobacter fetus using PCR, while only 8 (2.8%) of the samples were positive by bacterial isolation in solid medium, proving the superiority of the PCR technique when compared to the standard isolation method, and providing evidence for its usefulness as a better screening test in cattle for the diagnosis of bovine genital campylobacteriosis.

• Bovine genital campylobacteriosis campylobacteriosis Campylobacter fetus campilobacteriose genital bovina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Groff A.C.M., Kirinus J.K., Sá e Silva M., Machado G., Costa M.M. & Vargas A.P.C. 2010. Polymerase chain reaction for the diagnosis of bovine genital campylobacteriosis. [Reação em cadeia da polimerase para o diagnóstico de campilobacteriose genital bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(12):1031-1035. Laboratório de Bacteriologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: agueda.vargas@gmail.com RESUMO.- [Reação em cadeia da polimerase para o diagnóstico de campilobacteriose genital bovina.] Campilobacteriose genital bovina é uma doença venérea comum em bovinos. A prevalência desta doença pode ser subestimada na maioria das vezes pela natureza microaeróbica do agente etiológico, Campylobacter fetus subspecies venerealis. O propósito do presente estudo foi avaliar a utilização da reação de polimerase em cadeia (PCR) no diagnóstico de campilobacteriose genital em amostras obtidas de aspirado prepucial de touros, muco cervical de vacas e conteúdo abomasal de fetos abortados, coletados em meio enriquecido. Cinco protocolos diferentes de extração de DNA foram testados: termo extração, lise com proteinase K, lise com guanidine isothiocyanate, lise com DNAzol e lise com hexadeciltrimetilamônio brometo (CTAB). A especificidade, sensibilidade e a aplicação da técnica da PCR foram também avaliadas com amostras clínicas e comparadas com bactérias isoladas por cultura padrão. DNA extraído pelo protocolo de CTAB demonstrou os melhores resultados na PCR, e foi capaz de detectar 63 unidades formadoras de colônias de C. fetus por ml de meio. Das 277 amostras clínicas testadas, 68 (24%) foram positivas para Campylobacter fetus pela PCR, enquanto 8 (2,8%) das amostras foram positivas por isolamento bacteriológico, provando a superioridade da técnica de PCR quando comparada com métodos padrão de isolamento, e fornecendo evidências de sua utilização como um teste de melhor projeção para diagnóstico em campilobacteriose genital bovina.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Arenhart S., Bauermann F.V., Vogel F.S.F., Weiblen R. & Flores E.F. 2010. Evidence of mixed persistent infections in calves born to cows challenged with a pool of bovine viral diarrhea virus isolates. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(12):1053-1057. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Federal de Santa Maria, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com Pregnant cows infected with noncytopathic (NCP) isolates of bovine viral diarrhea virus (BVDV) between days 40 and 120 days of gestation frequently deliver immunotolerant, persistently infected (PI) calves. We herein report the characterization of PI calves produced experimentally through inoculation of pregnant cows with a pool of Brazilian BVDV-1 (n=2) and BVDV-2 isolates (n=2) between days 60 and 90 of gestation. Two calves were born virus positive, lacked BVDV antibodies, but died 7 and 15 days after birth, respectively. Six other calves were born healthy, seronegative to BVDV, harbored and shed virus in secretions for up to 210 days. Analysis of the antigenic profile of viruses infecting these calves at birth and 30 days later with a panel of monoclonal antibodies indicated two patterns of infection. Whereas three calves apparently harbored only one isolate (either a BVDV-1 or BVDV-2), co-infection by two antigenically distinct challenge viruses was demonstrated in three PI calves. Moreover, testing the viruses obtained from the blood of PI calves by an RT-PCR able to differentiate between BVDV-1 and BVDV-2 confirmed the presence/persistence of two co-infecting viruses of different genotypes (BVDV-1 and BVDV-2) in these animals. These findings indicate that persistent infection of fetuses/calves - a well characterized consequence of fetal infection by BVDV – may be established concomitantly by more than one isolate, upon experimental inoculation. In this sense, mixed persistent infections with antigenically distinct isolates may help in understanding the immunological and molecular basis of BVDV immunotolerance and persistence.

• BVDV bovine viral diarrhea virus diarréia viral bovina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Arenhart S., Bauermann F.V., Vogel F.S.F., Weiblen R. & Flores E.F. 2010. Evidence of mixed persistent infections in calves born to cows challenged with a pool of bovine viral diarrhea virus isolates. [Evidências de infecção persistente mista em bezerros nascidos de vacas inoculadas com um pool de isolados do vírus da diarréia viral bovina.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(12):1053-1057. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Universidade Federal de Santa Maria, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com Vacas prenhes infectadas com isolados não-citopáticos (NCP) do vírus da diarréia viral bovina (BVDV) entre os dias 40 e 120 de gestação frequentemente produzem bezerros imunotolerantes, persistentemente infectados (PI). Este artigo relata a caracterização de bezerros PI produzidos experimentalmente, pela inoculação de vacas prenhes com um pool de isolados brasileiros de BVDV-1 (n=2) e BVDV-2 (n=2) entre os dias 60 e 90 de gestação. Dois bezerros nasceram positivos para vírus, negativos para anticorpos, mas morreram aos dias 7 e 15 pós-nascimento, respectivamente. Outros seis bezerros nasceram saudáveis, soronegativos para o BVDV, replicaram e excretaram o vírus em secreções por até 210 dias. Análise antigênica dos vírus presentes nos bezerros PI com anticorpos monoclonais, ao nascimento e 30 dias após, revelou dois padrões de infecção. Três bezerros apresentavam apenas um dos vírus utilizados no desafio (BVDV-1 ou BVDV-2), enquanto outros três bezerros apresentavam co-infecção com mais de um vírus. Além disso, testando-se o sangue dos animais PI com um PCR capaz de diferenciar entre BVDV-1 e BVDV-2 observou-se a presença concomitante de vírus dos dois genótipos (BVDV-1 e BVDV-2) nestes três animais. Esses resultados indicam que infecção persistente - uma consequência bem conhecida da infecção fetal pelo BVDV - pode ser estabelecida concomitantemente por mais de um vírus, após infecção experimental. Nesse sentido, infecções persistentes mistas com isolados antigenicamente distintos podem ser úteis para o estudo das bases imunológicas e moleculares da imunotolerância e infecção persistente pelo BVDV.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Dias F.C., Médici K.C., Alexandrino B., Medeiros A.S.R., Alfieri A.A. & Samara S.I. 2010. [Occurrence of persistently infected animals with bovine viral diarrhoea virus in cattle herds from the states of Minas Gerais and São Paulo, Brazil.] Ocorrência de animais persistentemente infectados pelo vírus da diarréia viral bovina em rebanhos bovinos nos Estados de Minas Gerais e São Paulo. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(11):933-939. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Reprodução Animal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Universidade Estadual Paulista, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Vila Industrial, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: fabiocadi@yahoo.com.br The research on persistently infected (PI) animals with bovine viral diarrhoea virus (BVDV) was conducted in 26 cattle herds, which were not BVDV vaccinated, located in the states of Minas Gerais and São Paulo, Brazil. Using a sampling strategy, five samples of blood were collected from 6 to 12-month-old calves of each herd, and the blood sera were tested by virusneutralization test (VN) to BVDV-1 and BVDV-2. The herds that had at least three out of five samples reacting to one of the genotypes of BVDV and antibody titers greater than 128 were selected to PI animals research. In three of the herds that matched the before-mentioned criteria, paired blood samples were collected from all its individuals considering a collection interval of 30 days. The blood sera of these samples were VN tested against BVDV-1 and BVDV-2. In samples not reacting to at least one of the BVDV genotypes and also in those collected from calves of less than six months of age, virus research was undertaken by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR). From the examined herds, two PI animals were detected in paired samples obtained from a herd located in the state of Minas Gerais.

• Bovine viral diarrhoea virus BVDV-1 BVDV-2 vírus da diarreia viral bovina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Dias F.C., Médici K.C., Alexandrino B., Medeiros A.S.R., Alfieri A.A. & Samara S.I. 2010. [Occurrence of persistently infected animals with bovine viral diarrhoea virus in cattle herds from the states of Minas Gerais and São Paulo, Brazil.] Ocorrência de animais persistentemente infectados pelo vírus da diarréia viral bovina em rebanhos bovinos nos Estados de Minas Gerais e São Paulo. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(11):933-939. Departamento de Medicina Veterinária Preventiva e Reprodução Animal, Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias, Universidade Estadual Paulista, Via de Acesso Prof. Paulo Donato Castellane s/n, Vila Industrial, Jaboticabal, SP 14884-900, Brazil. E-mail: fabiocadi@yahoo.com.br A pesquisa de animais persistentemente infectados (PI) pelo vírus da diarréia viral bovina (BVDV) foi realizada em 26 rebanhos bovinos, não vacinados contra o BVDV, localizados nos Estados de Minas Gerais e São Paulo, Brasil. Utilizando uma estratégia de amostragem, de cada rebanho foram obtidas cinco amostras de sangue de bezerros, entre 6 e 12 meses de idade, e os soros sanguíneos foram submetidos ao teste de virusneutralização (VN) para o BVDV-1 e o BVDV-2. Os rebanhos que apresentaram pelo menos três das cinco amostras reagentes a um dos genótipos do BVDV, e com títulos de anticorpos superiores a 128, foram selecionados para a pesquisa de animais PI. Em três rebanhos que apresentaram tal condição, foram colhidas amostras pareadas de sangue de todos os bovinos do rebanho, com intervalo de 30 dias entre as colheitas, e o soro sanguíneo foi submetido ao teste de VN para o BVDV-1 e o BVDV-2. Nas amostras não reagentes a pelo menos um dos genótipos do BVDV e naquelas provenientes de bovinos com menos de seis meses de idade, realizou-se a pesquisa do BVDV pela reação em cadeia da polimerase precedida pela transcrição reversa (RT-PCR). Dos rebanhos analisados, foram detectados dois animais PI a partir de amostras obtidas nas colheitas pareadas provenientes de um rebanho localizado no Estado de Minas Gerais.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Dezengrini R., Silva S.C., Weiss M., Kreutz L.C., Weiblen R. & Flores E.F. 2010. [Activity of three antiviral drugs against bovine herpesviruses 1, 2 and 5 in cell culture.] Atividade de três drogas antivirais sobre os herpesvírus bovino tipos 1, 2 e 5 em cultivo celular. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(10):855-860. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com The activity of three anti-herpetic drugs (Acyclovir [ACV], Gancyclovir [GCV] and Foscarnet [PFA]) was tested against bovine herpesvirus 1 (BoHV-1), 2 (BoHV-2) and 5 (BoHV-5) in vitro using the plaque reduction assay. Different drug concentrations were tested against one hundred 50% tissue culture infectious dose (TCID50) of the respective viruses. Drug concentrations lower than 200µg/mL resulted in viability rates of more than 80% for MDBK and Hep2 cells in the MTT test (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide). The selectivity index (IS) of the drugs was calculated dividing the concentration of the drug that is cytotoxic for 50% of the cells (CC50) by the concentration of the drug that was effective in reducing by 50% the number of viral plaques (EC50) for the three herpesviruses. Thus, ACV was shown to be moderately active against BoHV-1 (EC50: 112.9mg/mL; IS: 4.5), BoHV-2 (EC50: 114.2mg/mL; IS: 4.5) and BoHV-5 (EC50: 96.9mg/mL; IS: 5.3). GCV was effective against BoHV-2 (EC50: 33.5mg/mL; IS: 16.6), moderately effective against BoHV-5 (EC50: 123.2mg/mL; IS: 4.5) and poorly active against BoHV-1 (EC50: 335.8mg/mL; IS: 1.7). PFA exhibited the highest antiviral activity, being the only drug that, at concentration of 100mg/mL, completely inhibited plaque formation by all three viruses. PFA was the most effective in vitro against BoHV-1 (EC50: 29.5mg/mL; IS: 42.2), BoHV-2 (EC50: 45.2mg/mL; IS: 27.6) and BoHV-5 (EC50: 7.8mg/mL; IS: 160.6). Thus, the results indicate that PFA is a promising candidate for experimental therapeutic testing in vivo against bovine herpesviruses.

• Antivirals BoHV-1 BoHV-2 BoHV-5 Foscarnet Gancyclovir Acyclovir antivirais Ganciclovir Aciclovir

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Dezengrini R., Silva S.C., Weiss M., Kreutz L.C., Weiblen R. & Flores E.F. 2010. [Activity of three antiviral drugs against bovine herpesviruses 1, 2 and 5 in cell culture.] Atividade de três drogas antivirais sobre os herpesvírus bovino tipos 1, 2 e 5 em cultivo celular. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(10):855-860. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av. Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com A atividade de três fármacos antivirais (Aciclovir [ACV], Ganciclovir [GCV] e Foscarnet [PFA]) foi testada in vitro frente aos herpesvírus bovino tipos 1 (BoHV-1), 2 (BoHV-2) e 5 (BoHV-5). Para isso, utilizou-se o teste de redução de placas virais em cultivo celular, testando-se diferentes concentrações dos fármacos frente a 100 doses infectantes para 50% dos cultivos celulares (DICC50) dos respectivos vírus. Pelo teste de MTT (3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide), verificou-se que concentrações inferiores a 200µg/mL dos três antivirais resultaram em índices de viabilidade de células MDBK e Hep2 superiores a 80%. Com base na concentração citotóxica para 50% das células (CC50) e na concentração dos fármacos efetiva para inibir em 50% o número de placas virais (EC50), calculou-se o índice de seletividade (IS) dos antivirais para os três herpesvírus. Assim, o ACV demonstrou ser moderadamente ativo frente ao BoHV-1 (EC50: 112,9mg/mL e IS: 4,5), ao BoHV-2 (EC50: 114,2 mg/mL e IS: 4,5) e BoHV-5 (EC50: 96,9mg/mL e IS: 5,3). O GCV apresentou atividade moderada frente ao BoHV-2 (EC50: 33,5mg/mL e IS: 16,6) e, em menor grau, contra o BoHV-5 (EC50: 123,2mg/mL e IS: 4,5), sendo ineficaz frente ao BoHV-1 (EC50: 335,8mg/mL e IS: 1,7). O PFA apresentou atividade antiviral mais pronunciada, sendo o único fármaco que, na concentração de 100µg/mL, inibiu completamente a produção de placas pelos três vírus testados. O PFA foi o mais efetivo in vitro frente ao BoHV-1 (EC50: 29,5mg/mL e IS: 42,2), ao BoHV-2 (EC50: 45,2mg/mL e IS: 27,6) e ao BoHV-5 (EC50: 7,8mg/mL e IS: 160,6). Portanto, os resultados obtidos indicam que o PFA pode se constituir em um candidato para terapia experimental de infecções pelos herpesvírus de bovinos in vivo.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Rodrigues G.C., Oliveira L.J., Monteiro J.M., Lima A.R., Gonçalez P.O., Hernandez-Blazquez F.J., Leiser R. & Kfoury Jr J.R. 2010. Ultrastructural characterization of bovine umbilical cord blood cells. [Caracterização ultra-estrutural das células sanguíneas do cordão umbilical bovino.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(10):897-902. Departamento de Cirurgia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando de Marques Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP, 05508-270, Brazil. E-mail: jrobertok@usp.br The umbilical cord blood (UCB) is an important source of pluripotent stem cells, which motivated researches on ontogeny and transplantation. The morphological characterization of umbilical cord cells is the first step to establish subsequent experiments on these areas. Although some information on humans can be found, no data on UCB is available for bovines. Therefore, this work is the first attempt to conduct an ultrastructural characterization of bovine umbilical cord blood. Blood was collected from the umbilical cord of twenty fetuses by punction of the umbilical vein. Samples were processed for whole leucocytes observation by centrifugation and the buffy coat was collected. Cells were washed and pelleted and prepared according to the standard protocol of the transmission electron microscopy. The presence of cells with morphologic characteristics compatible with the precursors from the erythrocytic, neutrophilic, eosinophilic, basophilic, and lymphocytic lineages was observed. Atypical cells with peculiar morphological features, strongly similar to apoptotic cells, were seen. Bovine neutrophils with three types of cytoplasmic granules were also found in the blood. The ultrastructural characteristics of observed bovine UCB cells where similar to those found in other species, suggesting that bovines could possibly constitute an experimental model for approaches on UCB cells research.

• Umbilical cord blood cells haematopoietic progenitor cells cordão umbilical células progenitoras hematopoiéticas

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Rodrigues G.C., Oliveira L.J., Monteiro J.M., Lima A.R., Gonçalez P.O., Hernandez-Blazquez F.J., Leiser R. & Kfoury Jr J.R. 2010. Ultrastructural characterization of bovine umbilical cord blood cells. [Caracterização ultra-estrutural das células sanguíneas do cordão umbilical bovino.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(10):897-902. Departamento de Cirurgia, Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade de São Paulo, Av. Prof. Dr. Orlando de Marques Paiva 87, Cidade Universitária, São Paulo, SP, 05508-270, Brazil. E-mail: jrobertok@usp.br O sangue de cordão umbilical (SCU) é uma importante fonte de células progenitoras pluripotentes, que motiva pesquisas em ontogenia e transplantes. A caracterização morfológica das células de cordão umbilical é o primeiro passo para se estabelecer experimentos subsequentes nessas áreas. Embora algumas informações sobre SCU em humanos possam ser encontradas, não existe nenhuma informação disponível sobre elas em bovinos. Portanto, este trabalho é a primeira tentativa de se conduzir uma caracterização ultra-estrutural do sangue de cordão umbilical bovino. O sangue foi coletado do cordão umbilical de 20 fetos por punção da veia umbilical. As amostras foram processadas para observação dos leucócitos totais por centrifugação pela coleta do botão leucocitário. As células foram lavadas, peletizadas e preparadas de acordo com protocolo padrão para microscopia eletrônica de transmissão. A presença de células com características morfológicas compatíveis com precursores das linhagens eritrocítica, neutrofílica, eosinofílica, basofílica e linfocítica foram observadas. Células atípicas com características morfológicas peculiares muito semelhantes a células em apoptose foram observadas. No sangue do cordão umbilical também foi encontrado neutrófilos bovinos apresentando três tipos de grânulos citoplasmáticos. As características ultra-estruturais do SCU bovino foram semelhantes às encontradas em outras espécies, sugerindo que esta espécie possa servir como modelo experimental para abordagens em pesquisas sobre sangue de cordão umbilical.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Figueiredo S.M., Rocha V.C.M., Higino S.S.S., Batista, C.S.A., Alves C.J., Clementino I.J. & Azevedo S.S. 2010. [Bovine tuberculosis in the state of Paraíba: retrospective survey.] Tuberculose bovina no Estado da Paraíba: estudo retrospectivo. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(9):712-716. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Av. Universitária s/n, Bairro Santa Cecília, Patos, PB 58700-970, Brazil. E-mail: sergio.azevedo@pq.cnpq.br The aim of this study was to determine the frequency of positive herds (foci) and positive animals for bovine tuberculosis in the state of Paraíba, Northeast region of Brazil. Data from the Agency of Agricultural Protection in the state, collected from its 23 microregions, during the January 2008 to July 2009 period, were used. During this period, 10,963 herds were examined and 54,472 cattle were submitted to the tuberculin test. For diagnosis the cervical and caudal-fold tuberculin tests were used as screening tests in dairy and beef cattle, respectively; as confirmatory test, comparative cervical test was used. A herd was considered focus when presented at least one positive animal. Of the herds investigated, 62 (0.57%) had at least one positive animal, and of the animals examined, 136 (0.25%) were positive. There was significant difference (p<0.001) in the proportion of positivity for females (0.32%) and males (0.04%). Despite low frequency of foci of brucellosis and seropositive animals, it is necessary to conduct measures including awareness of producers, surveillance in sanitary barriers and periodic surveys of epidemiological situation of this disease especially in the regions with highest frequency of infection, aiming to avoid, or at least minimize, the spread of the agent.

• Bovine tuberculosis Mycobacterium bovis tuberculose bovina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Figueiredo S.M., Rocha V.C.M., Higino S.S.S., Batista, C.S.A., Alves C.J., Clementino I.J. & Azevedo S.S. 2010. [Bovine tuberculosis in the state of Paraíba: retrospective survey.] Tuberculose bovina no Estado da Paraíba: estudo retrospectivo. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(9):712-716. Unidade Acadêmica de Medicina Veterinária, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande, Av. Universitária s/n, Bairro Santa Cecília, Patos, PB 58700-970, Brazil. E-mail: sergio.azevedo@pq.cnpq.br O objetivo do presente trabalho foi determinar a frequência de propriedades positivas (focos) e de animais positivos para a tuberculose bovina no Estado da Paraíba. Foram utilizados dados da Agência de Defesa Agropecuária do Estado, coletados de suas 23 microrregiões, durante o período de janeiro de 2008 a julho de 2009. Durante esse período, foram examinadas 10.963 propriedades e 54.472 bovinos foram submetidos ao teste de tuberculinização. Para o diagnóstico foi utilizada, como prova de triagem, a tuberculinização cervical simples para gado de leite e a tuberculinização na prega caudal para gado de corte; como prova confirmatória foi utilizada a tuberculinização cervical comparativa. Uma propriedade foi considerada foco quando apresentou pelo menos um animal soropositivo. Das propriedades investigadas, 62 (0,57%) apresentaram pelo menos um animal positivo e dos animais analisados, 136 (0,25%) foram positivos. Houve diferença significativa (p<0,001) na proporção de fêmeas (0,32%) e machos (0,04%) positivos. A despeito da baixa freqüência de focos de brucelose e de animais soropositivos, é necessária a condução de medidas que incluem a conscientização dos produtores, fiscalização nas barreiras sanitárias e levantamentos periódicos da situação epidemiológica desta doença, principalmente nas microrregiões com maior frequência da infecção, com o objetivo de evitar, ou pelo menos minimizar, a disseminação do agente.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Dezengrini R., Silva S.C., Weiss M., Oliveira M.S., Traesel C.K., Weiblen R. & Flores E.F. 2010. [Effects of Foscarnet on the infection by bovine herpesviruses 1 and 5 in rabbits.] Efeitos do Foscarnet sobre a infecção pelos herpesvírus bovino tipos 1 e 5 em coelhos. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(8):623-630. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av, Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com The activity of Foscarnet (PFA) against three bovine herpesviruses (BoHVs) was previously demonstrated in cell culture. Herein we evaluated the effects of PFA on the infection and disease by BoHV-1 and BoHV-5 in a rabbit model. Rabbits inoculated with BoHV-5 in the conjunctival sac (IC) and treated with PFA (100 mg/kg/day) from day 1 to 17 post-inoculation (pi) shed less virus between days 2 and 6 pi comparing to untreated controls; this difference was significant at day 3 pi [F(9,108) = 2,23; P<0.03]. The morbidity and mortality rates of rabbits inoculated with BoHV-5 IC or intranasally (IN) were also significantly reduced in PFA-treated rabbits (50%; 11/22) comparing to untreated controls (95.4%; 21/22) (P<0.0008). In rabbits inoculated IC with BoHV-1, a reduction in virus shedding was observed in PFA-treated animals between days 1 and 4 pi; 6 and 7 pi. In addition, PFA-treated rabbits presented a longer incubation period and a shorter clinical course comparing to untreated controls (P<0.005 and P<0.04, respectively). The frequency and severity of ocular signs were also reduced in the PFA-treated group. These results demonstrate that PFA is effective against BoHV-1 and BoHV-5 in vivo and open the way towards its use in experimental therapy of herpetic infections in domestic animals.

• Antivirals BoHV-1 BoHV-5 PFA bovine herpesviruses 1 bovine herpesviruses 5 Foscarnet herpesvírus bovino tipo 1 herpesvírus bovino tipo 5

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Dezengrini R., Silva S.C., Weiss M., Oliveira M.S., Traesel C.K., Weiblen R. & Flores E.F. 2010. [Effects of Foscarnet on the infection by bovine herpesviruses 1 and 5 in rabbits.] Efeitos do Foscarnet sobre a infecção pelos herpesvírus bovino tipos 1 e 5 em coelhos. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(8):623-630. Setor de Virologia, Departamento de Medicina Veterinária Preventiva, Centro de Ciências Rurais, Universidade Federal de Santa Maria, Av, Roraima 1000, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: eduardofurtadoflores@gmail.com

Abstract in English:

ABSTRACT.- Arruda L.P., Nakazato L., Dutra V., Lemos R.A.A., Nogueira A.P.A., Cruz R.A.S., Pescador C.A. & Colodel E.M. 2010. [Molecular detection of bovine herpesvirus 1 and 5 in formalin-fixed, paraffin-embedded samples from cattle with neurological disease.] Detecção molecular de herpesvírus bovino 1 e 5 em amostras de encéfalo conservadas em formol e emblocadas em parafina provenientes de bovinos com doença neurológica. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(8):646-650. Departamento de Clínica Médica Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade Federal de Mato Grosso, Av. Fernando Corrêa da Costa s/n, Bairro Coxipó, Cuiabá, MT 78068-900, Brazil. E-mail: laura.peixoto@gmail.com Bovine herpesvirus (BoHV) is an important cause of neurological disease in cattle in the Midwest Brazil. The application of molecular diagnostic techniques represents an important contribution for the study of BoHV. This paper describes the detection of BoHV-5 and BoHV-1 by a specific multiplex PCR assay in 76 paraffin-embedded samples from central nervous system (CNS) of cattle with neurological disorders. The samples were divided into 2 groups according to the histological features: Group 1 was composed of 40 cases of necrotizing meningoencephalitis (characteristic of BoHV infection), and Group 2 was composed of 36 cases of nonspecific nonsuppurative meningoencephalitis. Positive results for BoHV-5 accounted for 40% of the samples in the group 1 and 33% in the group 2. No detection of BoHV-1 was recorded.

• Bovine herpesvirus 1 bovine herpesvirus 5 BoHV-1 BoHV-5 herpesvírus bovino 1 herpesvírus bovino 5

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Arruda L.P., Nakazato L., Dutra V., Lemos R.A.A., Nogueira A.P.A., Cruz R.A.S., Pescador C.A. & Colodel E.M. 2010. [Molecular detection of bovine herpesvirus 1 and 5 in formalin-fixed, paraffin-embedded samples from cattle with neurological disease.] Detecção molecular de herpesvírus bovino 1 e 5 em amostras de encéfalo conservadas em formol e emblocadas em parafina provenientes de bovinos com doença neurológica. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(8):646-650. Departamento de Clínica Médica Veterinária, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Universidade Federal de Mato Grosso, Av. Fernando Corrêa da Costa s/n, Bairro Coxipó, Cuiabá, MT 78068-900, Brazil. E-mail: laura.peixoto@gmail.com A infecção por herpesvírus bovino (BoHV) é uma das principais causas de doença neurológica em bovinos na região Centro-Oeste do Brasil. O uso de técnicas moleculares de diagnóstico representa uma contribuição importante para o estudo dessa doença. Este trabalho descreve o uso de uma técnica específica de PCR multiplex para identificar BoHV-5 e BoHV-1 em 76 amostras de encéfalo de bovinos fixadas em formol e incluídas em parafina. Com base nas alterações histológicas, as amostras foram separadas em 2 grupos: o Grupo 1 era composto de 40 amostras de bovinos com meningoencefalite necrosante característica da infecção por BoHV; no Grupo 2 estavam 36 amostras de casos com encefalite não-supurativa inespecífica. Identificação de BoHV-5 foi constatada em 40% das amostras do grupo 1 e em 33% das amostras do grupo 2. Não houve amplificação de DNA de BoHV-1 em nenhuma amostra.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Holz C.L., Cibulski S.P., Teixeira T.F., Batista H.B.C.R., Dezen D., Campos F.S., Varela A.P.M. & Roehe P.M. 2010. Serum neutralization with different types and subtypes of bovine herpesvirus 1 and 5. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(7):515-522. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, Fepagro Saúde Animal, Eldorado do Sul, RS 92990-000, Brazil. E-mail: proehe@gmail.com The serum neutralization (SN) test is the gold standard method to measure neutralizing antibodies to bovine herpesviruses. However, in view of the further subdivisions of bovine herpesviruses in types/subtypes, defining which virus to use at challenge in SN tests may be difficult. In view of that, this study was carried out to re-evaluate (SN) sensitivity with different types/subtypes of bovine herpesviruses types 1 (BoHV-1) and 5 (BoHV-5) as challenge viruses. Bovine sera (n=810) were collected from two distinct geographic regions and tested by SN with three type 1 viruses (BoHV-1.1 strains “Los Angeles” and “EVI123/98”; BoHV-1.2a strain “SV265/96”) and three type 5 viruses (BoHV-5a strain “EVI88/95”; BoHV-5b strain “A663” and BoHV-5c “ISO97/95”). SN tests were performed with a 1 hour incubation of the serum-virus mixtures at 37ºC against 100 TCID50 of each of the viruses. SN sensitivity varied greatly depending on the challenge virus used in the test. The highest sensitivity (327 positive/810 total sera tested; 40.37%) was attained when the positive results to the six viruses were added together. No association could be found between any particular type or subtype of virus and the sensitivity of the test. When positive results to each single strain were considered, SN sensitivity varied from 41.7% to 81.7%, depending on the virus and the geographic region of origin of the sera. Variation was detected even when challenge viruses belonged to the same subtype, where disagreement between positive results reached 41%. These results indicate that one hour incubation SN tests against single viruses, as performed here, may display a significantly low sensitivity (p=0.05); performing SN tests against a number of different viruses may increase considerably SN sensitivity. Furthermore, the choice of virus used for challenge is critical in SN tests. In addition, sera from different geographic regions may give rise to disagreeing results with different strains of BoHV-1 and BoHV-5. This might be particularly relevant for control programs and in international trade, were maximum sensitivity should be targeted.

• BoHV-1 BoHV-5 bovine herpesvirus 1 and 5 herpesvírus bovinos 1e 5

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Holz C.L., Cibulski S.P., Teixeira T.F., Batista H.B.C.R., Dezen D., Campos F.S., Varela A.P.M. & Roehe P.M. 2010. Serum neutralization with different types and subtypes of bovine herpesvirus 1 and 5. [Soroneutralização com diferentes tipos e subtipos de herpesvírus bovinos 1e 5.] Pesquisa Veterinária Brasileira 30(7):515-522. Instituto de Pesquisas Veterinárias Desidério Finamor, Fepagro Saúde Animal, Eldorado do Sul, RS 92990-000, Brazil. E-mail: proehe@gmail.com O teste de soroneutralização (SN) é o método padrão para a mensuração de anticorpos neutralizantes para herpesvírus bovinos. Entretanto, com as subdivisões propostas destes agentes em tipos e subtipos, a definição de qual amostra utilizar como virus de desafio à SN pode ser difícil. Em vista disso, este estudo foi realizado para re-avaliar a sensibilidade de testes de SN utilizando diferentes tipos e subtipos de herpesvírus bovinos tipos 1 (BoHV-1) e 5 (BoHV-5) como amostras de desafio. Soros bovinos (n=810) foram coletados de duas regiões geográficas distintas e testados frente a amostras do tipo 1 (BoHV-1.1: amostras “Los Angeles” e “EVI123/98”, BoHV-1.2a: amostra “SV265/96”) e três amostras do tipo 5 (BoHV-5a: “EVI88/95”; BoHV-5b: “A663” e BoHV-5c “ISO97/95”). Os testes de SN foram realizados com incubação de 1 hora a 37ºC da mistura soro-vírus, frente a 100 doses infectantes para 50% dos cultivos celulares (DICC50) de cada um dos vírus. A sensibilidade da SN variou grandemente em função do vírus utilizado no teste. A maior sensibilidade (327 soros positivos/810 soros testados; 40.37%) foi alcançada quando os resultados positivos frente aos seis diferentes vírus foram somados. Nenhuma associação foi detectada entre determinado tipo/subtipo de vírus e a sensibilidade do teste. Quando resultados positivos frente a cada vírus foram considerados isoladamente, a sensibilidade da SN variou entre 41,7% a 81,7%, dependendo do vírus de desafio e da região geográfica de origem das amostras de soro. Variação foi detectada mesmo quando as amostras de desafio pertenciam a um mesmo subtipo; a discrepância entre os resultados positivos atingiu até 41%. Estes resultados indicam que testes de SN contra amostras isoladas de vírus podem apresentar uma sensibilidade notadamente baixa; o emprego de diferentes amostras de vírus de desafio pode aumentar consideravelmente a sensibilidade da prova. Além disso, a escolha da amostra de vírus para a realização do teste é crítica. Outro achado importante é que sorors de diferentes regiões geográficas podem dar resultados discordantes frente a diferentes amostras de BoHV-1 e BoHV-5. Estes achados são particularmente relevantes para programas de controle destas infecções e para o comércio internacional, onde a sensibilidade deve ser maximizada.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Cadore G.C., Vogel F.S.F., Sangioni L.A., Pena H.F.J. & Gennari S.M. 2010. [IgM and IgG as markers of infection transplacentary Neospora caninum in bovine fetuses.] IgM e IgG como marcadores da infecção transplacentária por Neospora caninum em fetos bovinos. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(7):551-553. Setor de Medicina Veterinária Preventiva (Doenças Parasitárias), Universidade Federal de Santa Maria, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: fervogel@smail.com The aim of this study was to determine the occurrence of anti-Neospora caninum antibodies in serum samples collected from 260 bovine fetuses, between July 2007 and March 2008, in an abattoir in the municipality of Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brazil. An indirect fluorescent antibody test was used to detect anti-N. caninum immunoglobulins G (IgG) and M (IgM), using a cut-off of 1:25. Considering IgG or IgM detection, 15% (39/260) of the samples tested were found positive. Among the positive samples, 38 (97.4%) were positive for IgG and 6 (15.4%) for IgM. However 5 (12.8%) of it were positive for both IgG and IgM. These results are in agreement with the proven ability of N. caninum to fetal infection. IgM testing was few relevant to detect N. caninum transplacental infection through fetal bovine serum analisys.

• Neospora caninum immuno-globulin G and M (IgG and IgM) Imunoglobulinas G e M (IgG e IgM).

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Cadore G.C., Vogel F.S.F., Sangioni L.A., Pena H.F.J. & Gennari S.M. 2010. [IgM and IgG as markers of infection transplacentary Neospora caninum in bovine fetuses.] IgM e IgG como marcadores da infecção transplacentária por Neospora caninum em fetos bovinos. Pesquisa Veterinária Brasileira 30(7):551-553. Setor de Medicina Veterinária Preventiva (Doenças Parasitárias), Universidade Federal de Santa Maria, Camobi, Santa Maria, RS 97105-900, Brazil. E-mail: fervogel@smail.com O objetivo deste estudo foi determinar a ocorrência de anticorpos anti-Neospora caninum em 260 amostras de soro coletadas de fetos bovinos de julho de 2007 a março de 2008, em abatedouro do município de Santa Maria, Rio Grande do Sul, Brasil. Para detecção de anticorpos anti-N. caninum, a técnica de imunofluorescência indireta foi utilizada tanto para a detecção de imunoglobulinas G e M. Amostras com títulos e” 25 foram consideradas positivas. Das 260 amostras testadas, 15% (39/260) foram positivas para anticorpos anti-N. caninum. Destas, em 38 (97,4%) foi detectada a presença de IgG anti-N. caninum e em seis (15,4%) de IgM. Em cinco amostras (12,8%) detectaram-se ambos, IgG e IgM. Os resultados reafirmam a habilidade do N. caninum em determinar infecção fetal. A pesquisa de IgM foi de limitada importância na detecção da infecção via transplacentária em soro fetal bovino.