PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

ABSTRACT.- Marinho M., Langoni H., Oliveira S.L., Carreira R., Perri, S.H.V. e Luvizoto M.C. 2002. [Humoral iminune response, bacterial recovery and time lesions in mice geneticaly selected for high and low antibody production and in outbreed Balb/c mice face to Leptospira interrogans sorovar icterohaemorrhagiae.] Resposta humoral, recuperação bacteriana e lesões histológicas em camundongos geneticamente selecionados para bons e maus produtores de anticorpos e Balb/c, frente à infecção por Leptospira interrogans sorovar icterohaemorrhagiae. Pesquisa Veterinária Brasileira 23(1):5-12. Laboratório de Microbiologia, Departamento de Apoio, Produção e Saúde Animal FOA, Unesp-Campus de Araçatuba, Cx. Postal 341, Araçatuba, SP 16050-680, Brazil. The aim of the present work was to evaluate the association among the kinetics of humoral immune response, the recovery ofviable leptospiras and the intensity ofthe tissue lesions in mice selected for high (H) and low (L) production of antibodies (selection N-A) and in mice from the outbreed Balb/c Iine, inoculated with pathogenic Leptospira interrogans serovar icterohaemorrhagiae. Toe H and L lines showed modifications in some steps ofthe immune response, mainly in relation to the macrophagic activity, representing extreme phenotypes found in heterogeneous natural populations. Mice were sacrificed in eight moments after the infection. Analysis of the results revealed that from the 7th day after the infection, on Iine H mice presented antibodies titles significantly higher as compared to the L line mice, maintaining the multispecific effect Balb/c tine mice showed intermediàte results between the two Iines. Antibodies production worked as a timiting factor to the infection, becausewhen a greater leptospiras recovery was obtained, at the initial phase of the infection, the titles of antibodies were elevated. Inflammatory and degenerative process led to similar lesions in the organs ofinfected mice. Only a variation in the degree oftissue compromising was observed according to the tine. H tine mice showed more extensive lesions than L and Balb/c lines mice. For the Balb/c tine mice, the lesions were moderate. As a mie, H and Balb/c mice lines showed a Th2 profile of immune response, with higher indexes of antibody production and gravity ofthe lesions, while L line mice presented a Th 1 profile ofimmune response.

• Leptospirosis humoral immune response bacterial recovery lesions mice genetically selected Balb/c Leptospirose recuperação bacteriana lesões resposta humoral camundongos geneticamente selecionados.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Marinho M., Langoni H., Oliveira S.L., Carreira R., Perri, S.H.V. e Luvizoto M.C. 2002. [Humoral iminune response, bacterial recovery and time lesions in mice geneticaly selected for high and low antibody production and in outbreed Balb/c mice face to Leptospira interrogans sorovar icterohaemorrhagiae.] Resposta humoral, recuperação bacteriana e lesões histológicas em camundongos geneticamente selecionados para bons e maus produtores de anticorpos e Balb/c, frente à infecção por Leptospira interrogans sorovar icterohaemorrhagiae. Pesquisa Veterinária Brasileira 23(1):5-12. Laboratório de Microbiologia, Departamento de Apoio, Produção e Saúde Animal FOA, Unesp-Campus de Araçatuba, Cx. Postal 341, Araçatuba, SP 16050-680, Brazil. O presente trabalho teve por finalidade associar a cinética da resposta humoral à recuperação de leptospiras viáveis e à intensidade das lesões teciduais em camundongos geneticamente selecionados para bons (High) e maus (Low) produtores de anticorpos (seleção IV-A), além de camundongos outbreed, Balb/c, inoculados com amostra patogênica de Leptospira interrogans sorovar icterohaemorrhagiae. As linhagens High e Low (seleção IV-A) apresentam modificações em alguns compartimentos da resposta imune, principalmente em relação à atividade macrofágica, representando fenótipos extre mos encontrados em populações naturais heterogêneas. Os camundongos foram sacrificados em oito momentos após a infecção. A análise dos resultados revelou que a partir do 7º dia após a infecção, os camundongos da linhagem High apresentaram elevação nos títulos de anticorpos estatisticamente significantes quando comparados aos camundongos da linhagem Low, mantendo assim o efeito multiespecífico. Os camundongos Balb/c apresentaram resultados intermediários entre as duas linhagens. A produção de anticorpos colaborou como fator limitante à infecção, pois quando obtevese maior recuperação de leptospiras, na fase inicial da infecção, os títulos de anticorpos encontravam-se em elevação. As lesões observadas nos órgãos de camundongos infectados consistiram basicamente nos mesmos processos inflamatórios e degenerativos, que não se alteraram, variando apenas o grau de comprometimento tecidual, de acordo com a linhagem. A linhagem high apresentou lesões mais extensas que as apresentadas pelas linhagens low e Balb/c, sendo que nesta última as lesões foram moderadas. De forma geral a linhagem High e Balb/c apresentaram um perfil de resposta Th2, com o maior índice de produção de anticorpos e gravidade das lesões, enquanto a linhagem Low apresentou um perfil de resposta Th 1.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Monteavaro, C.E., Soto P., Echevarría H.M., Catena M.C., Portiansky E.L. & Gimeno E.J. 2000. Immunohistochemical detection of Tritrichomonas foetus in experimentally infected mice. [Detecção imunohistoquímica de Tritrichomonas foetus em camundongos experimentalmente infectados.] Pesquisa Veterinária Brasileira 20(1):43-46. Institute of Pathology, Veterinary School, UNLP, P.O.Box 296, 1900 La Plata, Argentina. The need to intensify knowledge of the pathogenesis of bovine genital trichomoniasis (BGT) led to the use ofalternative animal models such as the mouse. Nevertheless, it is necessary to elucidate the dynamics of the infection in this animal species, evaluating different stages of the colonization and evolution of the pathological alterations. The immunohistochemistry (IHC) of fers advantages over the routine histopathological staining techniques for the detection of the protozoan in tissues, cellular detritus and inside the macrophages. The goal of the present study was to demonstrate the presence of Tritrichomonas foetus in the reproductive tract of infected mice using an IHC technique. Female BALB/c mice were infected with a suspension of T. foetus by intravaginal route, in the estrum phase, detected by exfoliative vaginal cytology. After 10 weeks, the animais were sacrificed; uterus and vagina were fixed and histologically processed. Some slides were stained with HE. The rest of the slides were processed for IHC. An immunoadsorbed polyclonal serum against T. foetus was used. The. avidine-biotine technique (HistoMouse, Zymed ™) was employed. The histopathological studies showed a dilation of the uterine glands, presence of macrophages in the lumen of the organ and inner part of the endometrial glands. No T. foetus was identified tísing this method. The IHQ allowed additionally the identification of the protozoan in the endometrium, endometrial glands, uterine lumen and inside neutrophils and macrophages. The cytological studies stained with IHC showed either isolated T. foetus adhered to epithelial cells or inside macrophages. This technique proves to be a useful tool for the study of the pathogenesis of bovine genital trichomoniasis (BGT) in an experimental model.

• Tritrichomonas foetus bovine genital trichomoniasis immunohistochemistry mouse tricomoníase genital bovina imunohistoquímica camundongo.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Monteavaro, C.E., Soto P., Echevarría H.M., Catena M.C., Portiansky E.L. & Gimeno E.J. 2000. Immunohistochemical detection of Tritrichomonas foetus in experimentally infected mice. [Detecção imunohistoquímica de Tritrichomonas foetus em camundongos experimentalmente infectados.] Pesquisa Veterinária Brasileira 20(1):43-46. Institute of Pathology, Veterinary School, UNLP, P.O.Box 296, 1900 La Plata, Argentina. A necessidade de aumentar o conhecimento da patogenia da tricomoníase genital bovina (BGT) conduziu ao uso de modelos experimentais alternativos como o camundongo. Não obstante, é necessário elucidar a dinâmica da infecção nesta espécie e avaliar as diferentes fases da colonização e evolução das alterações patológicas. A imunohistoquí-mica (IHQ) oferece vantagens sobre as técnicas histoquímicas de rotina para a observação do protozoário em tecidos, detritos celulares e dentro de macrófagos. O objetivo do presente trabalho foi demonstrar pelo uso de uma técnica de IHQ a presença de Tritrichomonas foetus no sistema reprodutivo de camundongos infectados. Camundongos BALB/c fêmeas foram infectados pela via intravaginal, com uma suspensão de T. foetus, na fase de estro, detectado com citologia exfoliativa vaginal. Depois de 10 semanas, os animais foram sacrificados; útero e vagina forma fixados e processados para histologia. Alguns cortes foram corados com HE. O restante dos cortes foi processado para IHQ. Foi usado um soro policlonaf imunoadsorvído anti-T.foetus. A técnica de avidina biatina (HistoMouse, Zymed™) foi empregada. Os estudos histopatológicos mostraram uma dilatação das glândulas uterinas, presença de macrófagos no lúmen do órgão e parte interna das glândulas endometriais. T. foetus não foi identificado por esse método. A IHQ permitiu identificar as mesmas lesões observadas e a presença do protozoário no endométrio, nas glândulas endometriais, no lúmen uterino e dentro de neutrófilos e macrófagos. O estudo citológico em lâminas coradas por IHQ, mostrou T.foetus aderido a células epiteliais, ou dentro de macrófagos. Esta técnica demonstra ser uma ferramenta útil para o estudo da patogenia da tricomoníase genital bovina (BGT) utilizando-se o camundongo como modelo experimental.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Menegucci E.A., Dutra I.S. & Döbereiner J. 1998. [Toxicological sensitivity and specificity of the micro-complement fixation test for the detection of botulinum toxins C and D in culture medium and liver of mice.] Sensibilidade toxicológica e especificidade do teste de microfixação de complemento na detecção de toxinas botulínicas C e D em meio de cultura e fígado de camundongo. Pesquisa Veterinária Brasileira 18(2):47-52. Depto Apoio, Produção e Saúde Animal, Unesp-Campus de Araçatuba, Cx. Postal 533, Araçatuba, SP 16015-050, Brazil. The toxicological sensitivity and specificity of the micro-complement fixation test (MCF) for the detection of botulinum toxins C and D were studied in supernatants of the bacterial cultures and in livers of mice inoculated with lethal and sublethal doses. Botulinum toxins C and D were produced in Hemoline culture medium, titered through the determination of LD50 by the mouse test and adjusted to dilutions of 10, 1, 0.1, 0.01 and 0.001 LD50 Two experimental models were used to determine the toxicological sensitivity of MCF in the supernatant of the culture medium with the dilutions described, and also in liver extracts of mice weighing 20 g and inoculated with the same dilutions. Detection of the botulinum toxins was attempted in liver extracts of mice which had received lethal doses of the respective toxins, and in others which had been inoculated with sublethal doses and were sacrificed in intervals of 5 days. The results show that the toxicological sensitivity of MCF, regarding the two types of toxins at the level of 0.001 LD50, was 100% when the supernatants of the culture medium were tested; this means that the sensitivitywas 100 times higher than with the mouse test. The toxicological sensitivity of MCF in the liver extracts of mice inoculated with 1 and 10 LD50 of botulinum toxins C and D was inferior, giving values of 100, 80, 89 and 72% respectively. By this test it was also possible to detect botulinum toxins type C and D in liver extracts of mice inoculated with sublethal doses, up to 15 days after the injection. The specificity of MCF was 88% and 92%, when liver extracts of healthy contral mice were tested and when challenged with antitoxins C and D; and 100% when challenged with the supernatant of the culture medium. These results indicate that MCF could be of importance for research and could substitute in vivo tests.

• Botulinum toxins micro-complement fixation test sensitivity specificity mouse test Toxinas botulínicas microfixação de complemento sensibilidade especificidade camundongo.

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Menegucci E.A., Dutra I.S. & Döbereiner J. 1998. [Toxicological sensitivity and specificity of the micro-complement fixation test for the detection of botulinum toxins C and D in culture medium and liver of mice.] Sensibilidade toxicológica e especificidade do teste de microfixação de complemento na detecção de toxinas botulínicas C e D em meio de cultura e fígado de camundongo. Pesquisa Veterinária Brasileira 18(2):47-52. Depto Apoio, Produção e Saúde Animal, Unesp-Campus de Araçatuba, Cx. Postal 533, Araçatuba, SP 16015-050, Brazil. No presente estudo pretendeu-se verificar a sensibilidade toxicológica e especificidade do Teste de Microfixação de Complemento (MCF) na detecção de toxinas botulínicas C e D no sobrenadante de cultivas bacterianos e em fígados de camundongos inoculados com doses letais e subletais. As toxinas foram produzidas em meio de cultura Hemoline, tituladas através da determinação da DL50 pelo Bioensaio em Camundongo e diluídas nas concentrações de 10, 1, 0, 1, 0,01 e 0,001 DL50. Desta forma, foram utilizadas em dois modelos experimentais, onde foi determinada a sensibilidade toxicológica do MCF no sobrenadante do meio de cultura com as diluições descritas acima e ainda em extratos hepáticos de camundongos com peso corporal de 20g, inoculados com as mesmas diluições. A tentativa de evidenciação das toxinas botulínicas nos extratos hepáticos de camundongos foi realizada através da sua extração após a morte pela administração das doses letais e ainda pelo sacrifício dos animais inoculados -com doses subletais, em intervalos de 5 dias. Os resultados evidenciaram uma sensibilidade toxicológica para o MCF de 100% para os dois tipos de toxinas ao nível de 0,01 DL50, quando testados os sobrenadantes de meio de cultura, portanto 100 vezes superior ao Bioensaio em Camundongo. A sensibilidade toxicológica do MCF, quando examinados extratos hepáticos de camundongos inoculados com 1 e 10 DL50 de toxinas botulínicas C e D, foi inferior, com valores de 100, 80, 89 e 72%, respectivamente. Pelo teste foi possível detectar toxinas botulínicas tipos C e D nos extratos hepáticos de camundongos inoculados com doses subletais até 15 dias após a sua inoculação. A especificidade do MCF foi de 88 e 92%, quando testados extratos hepáticos de camundongos sadios, e confrontados com as antitoxinas C e D; e 100% no sobrenadante do meio de cultura. Os resultados apontam para uma possível utilização do teste como importante instrumento de pesquisa e ainda na eventual substituição dos testes in vivo pelas suas implicações éticas e limitações práticas.