PESQUISA VETERINÁRIA BRASILEIRA

Abstract in English:

The importance of the hoof to the horse health is clear, and the current knowledge regarding the cellular aspects of hoof keratinocytes is poor. Studies on equine keratinocyte culture are scarce. Developing keratinocyte cultures in vitro is a condition for studies on molecular biology, cell growth and differentiation. Some methods have already been established, such as those for skin keratinocyte culture. However, few methodologies are found for lamellar keratinocytes. The objective of this study was to standardize the equine hoof keratinocyte isolation and cultivation, and then characterize the cell immunophenotype. For this, the primary culture method used was through explants obtained from three regions of the equine hoof (medial dorsal, dorsal, and lateral dorsal). After the cell isolation and cultivation, the cell culture and its explants were stained with anti-pan cytokeratin (pan-CK) (AE1/AE3), vimentin (V9), p63 (4A4), and Ki-67 (MIB-1) antibodies. Cells were grown to third passage, were positive for pan-CK, p63 and Ki-67, and few cells had vimentin positive expression. As for the explants, the epidermal laminae were not stained for vimentin or Ki-67. However, some cells presented positive pan-CK and p63 expression. This study demonstrated the viability of lamellar explants of equine hooves as a form of isolating keratinocytes in primary cultures, as well as characterized the proliferation ability of such keratinocytes in monolayers.

• Isolation cultivation immunofluorescence lamellar keratinocytes equine hoof cell migration culture technology skin tissue engineering

Abstract in Portuguese:

É notória a importância do casco na saúde dos equinos, mas o conhecimento em nível celular é pouco entendido. Estudos envolvendo o cultivo de queratinócitos equinos são escassos. Sabe-se que o desenvolvimento de cultivos de queratinócitos in vitro é uma condição para estudos sobre a biologia molecular, crescimento e diferenciação celular. Alguns métodos já estão estabelecidos, como para cultivo de queratinócitos de pele, mas poucas metodologias são encontradas para queratinócitos lamelares. O objetivo desse estudo foi padronizar o cultivo de queratinócitos provenientes de casco equino visando futuramente associar ao estudo da medicina regenerativa para assim estabelecer um modelo experimental in vitro e indicar o uso criterioso de terapias regenerativas para a laminite equina. Desta forma, o cultivo em monocamada e a caracterização de queratinócitos lamelares foram realizados. Para isso, o método de cultura primária utilizado foi através de explantes obtidos de três regiões do casco (dorso-medial, dorsal e dorso-lateral). As células foram caracterizadas para os marcadores anti pan-cytokeratin (AE1/AE3), vimentin (V9), p63 (4A4) e Ki-67 (MIB-1) nos cultivos e nos explantes. As  células foram cultivadas até terceira passagem, tendo marcação positiva para pan-CK, p63 e Ki-67 e fraca marcação para vimentina. Já as lâminas epidermais não tiveram marcação de vimentin e Ki-67, porém marcaram acentuadamente para pan-CK e p63. Este estudo demonstrou a exiquibilidade do uso de explantes lamelares do casco de equinos, como forma de isolamento de queratinócitos em cultivos primários, bem como caracterizou a habilidade de proliferação desses queratinócitos em monocamada.

• Isolamento cultivo imunofluorescência queratinócitos lamelares casco equino migração celular tecnologia de cultivo engenharia tecidual

Abstract in English:

ABSTRACT.- Chaves F.Q., Neri Júnior N.A., Rodrigues R.C., Araujo H.F.P. & Guerra R.R. 2018. Morphometry of pectoral muscle fiber and intestinal villi of Calidris pusilla during the wintering period in Brazil. [Morfometria da fibra muscular peitoral e das vilosidades intestinais de Calidris pusilla durante o período de invernada no Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(9):1849-1855. Laboratório de Histologia Animal, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal da Paraíba, Cidade Universitária, Areia, PB 58397-000, Brasil. E-mail: rromaoguerra@gmail.com Migration is an event observed in several animals, such as shorebirds moving between the northern and southern hemispheres, during breeding and wintering intervals. Morphophysiological adaptations are necessary to allow the maintenance of migratory cycles and, therefore, studies with this focus can help clarify biological aspects related to migration. We analyzed the morphology variation in pectoral muscles and intestinal mucosa of Calidris pusilla, during different phases of the wintering period on the coast of Brazil. Fragments of pectoral muscles and duodenal were collected, fixed and processed for histology according to standard procedure, from specimens captured in a locality on the Brazilian coast. Modifications were found in the measured parameters among the three phases of wintering, arrival in Brazil (October, mid-period), January and departure to the Northern Hemisphere - May. The registered structural dynamism characterizes the growth of flight musculature and intestinal changes related to nutrition. Such changes occur temporarily due to the activities of preparation and migration between the northern and southern hemispheres.

• Morphometry pectoral muscle fiber intestinal villi Calidris pusilla wintering Brazil bird migration histology morphology Morfometria fibra muscular peitoral vilosidade intestinal Calidris pusilla invernada Brasil migração Charadriiformes histologia morfologia

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Chaves F.Q., Neri Júnior N.A., Rodrigues R.C., Araujo H.F.P. & Guerra R.R. 2018. Morphometry of pectoral muscle fiber and intestinal villi of Calidris pusilla during the wintering period in Brazil. [Morfometria da fibra muscular peitoral e das vilosidades intestinais de Calidris pusilla durante o período de invernada no Brasil.] Pesquisa Veterinária Brasileira 38(9):1849-1855. Laboratório de Histologia Animal, Centro de Ciências Agrárias, Universidade Federal da Paraíba, Cidade Universitária, Areia, PB 58397-000, Brasil. E-mail: rromaoguerra@gmail.com A migração é um evento observado em vários animais, como as aves limícolas que se deslocam entre os hemisférios norte e sul, durante os intervalos de reprodução e invernada. Adaptações morfofisiológicas são necessárias para permitir a manutenção dos ciclos migratórios e, portanto, estudos com esse enfoque podem ajudar a esclarecer aspectos biológicos relacionados à migração. Analisamos a variação morfológica nos músculos peitorais e mucosa intestinal de Calidris pusilla, durante diferentes fases do período de invernada no litoral brasileiro. Fragmentos de músculos peitorais e duodenais foram coletados, fixados e processados ​​para histologia de acordo com o procedimento padrão, a partir de espécimes capturados na localidade da costa brasileira. O dinamismo estrutural registrado caracteriza o crescimento da musculatura de vôo e as alterações intestinais relacionadas à nutrição. As mudanças nos parâmetros medidos entre as três fases do inverno, chegada ao Brasil (outubro, meio período), janeiro e saída para o Hemisfério Norte. Tais mudanças ocorrem temporariamente devido às atividades de preparação e migração entre os hemisférios norte e sul.

Abstract in English:

ABSTRACT.- Fortes F.S., Kloster F.S., Schafer A.S., Bier D., Buzatti A., Yoshitani U.Y. & Molento M.B. 2013. Evaluation of resistance in selected field strain of Haemonchus contortus to ivermectin and moxidectin using the Larval Migration on Agar Test. Pesquisa Veterinária Brasileira 33(2):183-187. Laboratório de Doenças Parasitárias, Universidade Federal do Paraná, Rua dos Funcionários 1540, Curitiba, PR 80035-050, Brazil. E-mail: fortesfs@gmail.com Haemonchus contortus is one of the most common and economically significant causes of disease in small ruminants worldwide, and the control programs of parasitic nematodes - including H. contortus - rely mostly on the use of anthelmintic drugs. The consequence of the use of this, as the sole sanitary strategy to avoid parasite infections, was the reduction of the efficacy of all chemotherapeutic products with a heavy selection for resistance. The widespread of anthelmintic resistance and the difficulty of its early diagnosis has been a major concern for the sustainable parasite management on farms. The objective of this research was to determine and compare the ivermectin (IVM) and moxidectin (MOX) effect in a selected field strain of H. contortus with a known resistance status, using the in vitro larval migration on agar test (LMAT). Third stage larvae of the selected isolate were obtained from faecal cultures of experimentally infected sheep and incubated in eleven increasing diluted concentrations of IVM and MOX (6, 12, 24, 48, 96, 192, 384, 768, 1536, 3072 and 6144µg/mL). The dose-response sigmoidal curves were obtained using the R2 value of >0.90 and the lethal concentration (LC50) dose for the tested anthelmintic drugs using a four-parameter logistic model. The LC50 value for MOX was significantly lower than IVM (1.253µg/mL and 91.06µg/mL), identifying the H. contortus isolate as considerably less susceptible to IVM compared to MOX. Furthermore, the LMAT showed a high consistency (p<0.0001) and provided to be a useful diagnostic tool for monitoring the resistance status of IVM and MOX in H. contortus field isolate, as well as it may be used for official routine drug monitoring programs under the Ministry of Agriculture (MAPA) guidance.

• Haemonchus contortus anthelmintics ivermectin moxidectin anti-helmínticos ivermectina moxidectina

Abstract in Portuguese:

RESUMO.- Fortes F.S., Kloster F.S., Schafer A.S., Bier D., Buzatti A., Yoshitani U.Y. & Molento M.B. 2013. Evaluation of resistance in selected field strain of Haemonchus contortus to ivermectin and moxidectin using the Larval Migration on Agar Test. [Avaliação da resistência em um isolado de campo selecionado de Haemonchus contortus à ivermectina e moxidectina usando o Teste de Migração de Larvas em Ágar.] Pesquisa Veterinária Brasileira 33(2):183-187. Laboratório de Doenças Parasitárias, Universidade Federal do Paraná, Rua dos Funcionários 1540, Curitiba, PR 80035-050, Brazil. E-mail: fortesfs@gmail.com Haemonchus contortus é uma das causas mais comuns e economicamente significativas de doença em produções de pequenos ruminantes em todo o mundo, e os programas de controle de parasitas nematoides - incluindo H. contortus - baseiam-se principalmente no uso de drogas anti-helmínticas. A consequência da utilização desses compostos, como sendo a única estratégia sanitária para evitar infecções por parasitas, tem sido a redução da eficácia de todos os produtos quimioterápicos, selecionando fortemente para resistência. O desenvolvimento generalizado da resistência anti-helmíntica e a dificuldade de seu diagnóstico precoce têm sido uma grande preocupação para o manejo sustentável de parasitas no campo. O objetivo desta pesquisa foi determinar e comparar o efeito da ivermectina (IVM) e da moxidectina (MOX) em um isolado de campo selecionado de H. contortus com um estado de resistência conhecido, utilizando o teste in vitro de migração de larvas em ágar (LMTA). Larvas de terceiro estágio de um isolado de H. contortus selecionado foram obtidas a partir de culturas de fezes de ovinos infectados experimentalmente e incubadas em onze concentrações diluídas crescentes de IVM e MOX (6, 12, 24, 48, 96, 192, 384, 768, 1536, 3072 e 6144µg/mL). As curvas sigmoides de dose-resposta foram obtidas utilizando o valor de R2 >0,90 e a dose de concentração letal (CL50) para as drogas anti-helmínticas testadas, utilizando um modelo logístico de quatro parâmetros. O valor de CL50 para MOX foi significativamente menor do que para IVM (1,253µg/mL e 91,06µg/mL), identificando o isolado de H. contortus como consideravelmente menos suscetível à IVM em comparação à MOX. Além disso, o LMTA mostrou uma alta consistência (p<0,0001) e pode ser uma ferramenta útil de diagnóstico para monitorar o status de resistência de IVM e MOX em isolado de campo de H. contortus, assim como ser utilizado de forma oficial e em rotina para programas de monitoramento das drogas sob a demanda do Ministério da Agricultura (MAPA).